微小RNA-380-5p 在宫颈癌组织及细胞中的表达及其通过下调RHOA抑制C33A细胞的增殖和迁移

[摘要] 目的：检测微小RNA-380-5p（miR-380-5p）在人宫颈癌组织和细胞系中的表达,探讨其抑制宫颈癌C33A细胞增殖和迁移的作用机制。方法：收集2016 年12 月至2017 年7 月同济医学院附属武汉中心医院妇产科手术切除的16 例宫颈癌患者癌组织和对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系HCC94、C33A、Hela、SiHa 和人子宫颈上皮永生化细胞H8,用qPCR 法检测miR-380-5p 在癌及癌旁组织、4 种宫颈癌细胞及H8 细胞中的表达。用脂质体转染技术将miR-380-5p mimic（实验组）和miR-NC（阴性对照组）瞬时转染C33A细胞,用qPCR法检测转染后细胞中miR-380-5p 表达,CCK-8 法和Transwell 小室法分别检测转染细胞的增殖和迁移能力。用生物信息学软件TargetScan 预测miR-380-5p 的下游基因,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-380-5p 对下游基因Ras 同源基因家族成员A（Ras homolog gene family member A,RHOA）的结合作用,qPCR 法和Western blotting 检测miR-380-5p 下游基因RHOA的表达。结果：宫颈癌组织中miR-380-5p 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,宫颈癌细胞系中miR-380-5p 表达水平均明显低于H8 细胞（P<0.05）,以C33A细胞中的表达水平最低（P<0.01）。与阴性对照组比较,转染miR-380-5pmimic 能显著抑制C33A细胞的增殖（P<0.05）和迁移能力（P<0.01）,且下调RHOA、ROCK1、ROCK2、CDK2和N-cadherin蛋白的表达（均P<0.01）。生物信息学软件预测RHOA可能为miR-380-5p 的调控基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-380-5p 可与RHOA 3’-非编码区（UTR）特异性结合,miR-380-5p 可明显下调RHOA基因的表达（P<0.01）。结论：miR-380-5p 在宫颈癌组织及细胞系中低表达,过表达miR-380-5p 可能通过下调RHOA及其下游蛋白的表达抑制宫颈癌C33A细胞的增殖和迁移。