梅毒螺旋体特异抗原P15、P47的克隆表达和临床应用

目的：克隆表达梅毒螺旋体特异抗原P15、P47，用于临床检测梅毒感染。方法：化学合成P15、P47基因并插入GST融合蛋白表达载体，以亲和层析进行纯化。将重组P15，P47抗原包板制备酶联免疫检测试剂盒，对国家标准品，正常人群，梅毒患等的血清进行检测。结果：化学合成的P15、P47基因，测序结果与GenBank数据符合，将重组P15、P47抗原包板制备酶联免疫检测试剂盒，对国家标准品的检测全部符合，对正常人群，梅毒患和其他一些疾病患的检测显示很高的灵敏度和特异性，结论：用重组梅毒P15和P47抗原制备的酶联免疫检测试剂盒符合临床特异性诊断的要求。     

重组人LFA3-Ig融和蛋白体内外生物活性研究

LFA3-Ig融合蛋白是由人淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3)与CD2结合的部分与人IgG1的Fc段构成的融合蛋白,采用基因工程技术大量制备,可用于治疗银屑病等自身免疫性疾病。实验利用体外细胞模型及正常食蟹猴作为体内模型,研究了上海市抗体工程技术研究中心研制和中试生产LFA3-Ig的生物学效应。结果表明:rhLFA3-Ig可通过特异性地结合淋巴细胞表面的CD2,抑制T淋巴细胞的活化,其体外活性与国外同类产品相比无显著差异;食蟹猴重复应用rhLFA3-Ig后,高剂量组外周血淋巴细胞有显著下降,于给药后48 h即降至最低,为给药前的76.1%;给药期间高剂量组外周血淋巴细胞波动于给药前的80%左右,至恢复期末,淋巴细胞恢复至给药前的90%左右。给药后,各剂量组CD2+、CD3+、CD4+及CD8+淋巴细胞计数均有不同程度的下降,且具有剂量相关性,停药后可恢复。上述结果为该重组融合蛋白提供了必要的临床前药效学资料,可作为其临床试验的重要参考。     

HSV-tk/ACV系统基因治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

本文首次应用HSV-tk/ACV系统对小鼠黑色素瘤B16进行了基因治疗研究。体外实验证实,转有HSV-tk基因的B16细胞(B16LNTK)对阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)的敏感性显著高于其亲本细胞B16,当B16LNTK与B16以不同比例混合培养时,亲本细胞B16对ACV的敏感性不同程度增高,存在旁观者效应。用B16LNTK接种同系C57BL/6小鼠,经ACV治疗20天后,B16LNTK组小鼠的肿瘤(0.254±0.18cm~3)较对照组B16组的肿瘤(4.43±1.08cm~3)小94％(n=5,双侧t检验P<0.01)。HSV-tk/ACV系统原位基因转移治疗B16荷瘤小鼠效果显著:HSV-tk/ACV治疗组肿瘤14天后较对照组肿瘤小43％(n=5,双侧t检验P<0.05)。结果提示HSV-tk/ACV系统可作为黑色素瘤基因治疗研究的一种有效方法。