慢性萎缩性胃炎动物模型的实验研究

目的:通过多因素刺激大鼠胃黏膜,建立稳定、实用、价廉的慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变的大鼠模型,在光镜及扫描电镜下观察其效果。方法:模型组(20只)用50℃脱氧胆酸钠(20 mmol/L),体积分数60%的乙醇空腹灌胃及体积分数0.05%的氨水自由饮用刺激胃黏膜6个月,对照组(10只)正常饲养。结果:与对照组比,模型组一般情况差、体重增加减慢,腺体萎缩,炎性细胞浸润;造模结束时8只伴有明显的肠上皮化生,4只伴有不典型增生,造模成功率90.0%。结论:多因素刺激大鼠6个月可成功建立CAG模型,且部分出现癌前病变,这种稳定的造模方法为今后相关的研究打下了基础。     

NF-κB、Caspase-3在腺苷诱导人HepG2细胞凋亡中的作用

目的 研究NF-κB、Caspase-3在腺苷(ADO)体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用.方法 将不同浓度的ADO(0.1～5 mmol/L)作用于HepG2细胞,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖的时间效应和剂量效应.2.0 mmol/L ADO单用或联合NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC,100 μmol/L)作用HepG2细胞12 h、24 h,采用Hoechst 33342荧光染色法及流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡及细胞周期,Western blot技术检测NF-κB蛋白表达;荧光比色法测定Caspase-3酶活性.结果 ADO对HepG2细胞生长具有显著抑制作用,并呈一定的量效和时效关系.药物作用24 h、48 h的IC50分别为2.52 mmol/L和1.89 mmol/L.ADO单独处理HepG2细胞12 h和24 h或联合PDTC处理后,细胞凋亡率分别为8.30%、22.32%;20.18%、30.89%,均显著高于对照组(0.81%,P<0.001);ADO作用HepG2细胞后荧光显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变,FCM分析药物处理组显示典型特征性的亚二倍体凋亡峰(sub-G1),细胞生长周期阻滞于G0/G1期;同时伴有Caspase-3活性显著升高(P<0.05).ADO处理后显著增加了NF-κB蛋白表达(P<0.05);PDTC有效抑制了NF-κB表达,同时增加了 Caspase-3活性及ADO的细胞毒作用(P<0.05).结论 ADO诱导了HepG2细胞凋亡并活化Caspase-3.抑制NF-κB活性可通过Caspase-3途径增强ADO的细胞毒作用.     

腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制

目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24～72 h或腺苷0.5～4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB(NF-κB)的表达及亚细胞定位;原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达。结果腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为(57.7±15.0)%,(56.5±11.1)%,(43.8±5.7)%和(28.8±4.1)%,呈时间依赖性下降(r=0.9192,P<0.01);腺苷0.5,1,2和4 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为(83.1±11.2)%,(67.9±6.7)%,(55.3±5.0)%和(45.4±5.4)%,呈浓度依赖性降低(r=0.8252,P<0.01)。腺苷0.5～4mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为(15.5±1.1)%,(28.2±0.8)%,(40.1±2.2)%和(50.6±1.3)%,与对照组(2.1±0.3)%相比均明显增加(P<0.05)。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位。GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加(rGRP78=0.9471,r胱天蛋白酶4=0.8977,r胱天蛋白酶3=0.968,rCHOP=0.9762,rNF-κB=0.9471,P<0.05)。结论腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关。     

泛素表达和蛋白酶体活性在胃癌及癌旁组织中的研究

目的研究26S蛋白酶体水解活性及泛素在胃癌、癌旁组织与正常胃黏膜组织中的差异。方法对75例胃癌患者分别在胃癌、癌旁及远端正常黏膜组织取样进行研究。采用免疫印迹方法分析泛素表达,免疫荧光方法分析26S蛋白酶体活性。结果泛素表达及26S蛋白酶体活性在胃癌及癌旁组织中增强,均高于正常胃黏膜组织。胃癌中泛素水平(4.24vs3.27)及26S蛋白酶体活性(628.3vs431.8)均高于癌旁组织,差异有统计学意义。结论胃癌中泛素-蛋白酶体系统被异常活化,与胃癌的发生与进展有关。     

胃舒散对乙醇诱导大鼠急性胃损伤的保护作用

目的研究胃舒散对乙醇所致急性胃黏膜损伤（AGML）的保护作用。方法采用乙醇灌胃诱导大鼠AGML模型。采用光镜、扫描电镜和透射观察不同剂量胃舒散（3．0、1．5、0．75g／kg）对黏膜组织形态学的保护作用，并同时检测胃黏膜局部血流量（GMBF）、跨膜电位（PD）、胃组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和血浆NO水平，等容积的生理盐水和丽珠得乐（1．0g／kg）分别作为正常对照和治疗对照组。结果胃舒散组胃黏膜损伤指数及组织学评分均较模型对照组显著降低（P〈0．05，P〈0．01）；GMBF及PD较模型对照组显著增高（P〈0．0l，P〈0．05）；胃舒散可明显提高胃组织SOD活性（P〈0．05）及血浆NO水平（P〈0．叭）。结论胃舒散对乙醇所致AGML有明显的保护作用，其作用机制可能与增加胃黏膜血流及抗氧化作用有关。     

氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究(英)

目的：直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡，本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法：暴露细胞于2 mmol/L过氧化氢产生氧化应激，用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡，用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化，Western blotting检测细胞浆中细胞色素c变化，fluorometric assay kit检测caspase活性变化。结果：氧化应激作用于HepG2细胞后12 h开始发生凋亡；氧化应激作用后4 h，细胞线粒体膜电位明显下降；胞浆中细胞色素c浓度呈时间依赖性增高；氧化应激作用8 h、12 h后细胞内caspase-3、caspase-9活性分别升高6.7及3.6倍，但caspase-8活性无变化。结论：氧化应激能诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡，其途径与线粒体通路及caspase激活有关。     

NF-κB与幽门螺杆菌相关性胃炎及胃癌

幽门螺杆菌作为胃粘膜最常见和最重要的感染因素,可以活化核因子κB(NFκB),改变多种细胞因子表达,引起局部炎性反应,影响细胞凋亡,增加细胞群不稳定性和DNA错配机会,从而参与胃部炎症的发生和进展,并与胃癌形成、浸润转移等有关。     

核因子-κB和表皮生长因子受体在胃癌及癌前病变中的表达

目的 研究核因子-κB（NF-κB）和表皮生长因子受体（EGFR）在胃癌及癌前病变中的表达和作用。方法 应用免疫组化法检测NF-κB与EGFR在35例正常胃黏膜、31例肠上皮化生、34例不典型增生与55例胃癌中的表达情况，并分析与胃癌临床病理之间的关系。结果 NF-κB出阳性率在胃癌、不典型增生、肠上皮化生、正常胃黏膜中分别为78．2％、61．8％、58．1％、2．9％。在胃癌中高于肠上皮化生（P〈0．05），EGFR阳性率在胃癌、不典型增生、肠上皮化生、正常黏膜中分别为83．6％、61．8％、80．6％、0％，在胃癌中高于不典型增生（P〈0．05）。NF-κB与EGFR阳性率在胃癌及癌前病变明显高于止常胃黏膜（P〈0．01），低分化、浸润或淋巴结转移的胃癌中阳性率更高，并且在胃黏膜中表达存在等级相关性（r=0.588 P〈0.01）。结论 NF-κB与EGFR可能协同作用参与胃癌发生及进展，可以作为估计预后的指标。     

靶向 GRP78 的miRNA表达载体对人食管癌EC109细胞增殖的抑制作用

目的:探讨靶向葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)基因的miRNA真核表达质粒,对人食管癌EC109细胞增殖的影响。方法:设计合成4对针对GRP78的特异性miRNA干扰序列和1对阴性对照序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,构建靶向GRP78的miRNA重组质粒:pcDNATM6.2-miR78-1、pcDNATM6.2-miR78-2、pcDNATM6.2-miR78-3、pcDNATM6.2-miR78-4,并通过脂质体法转染至HEK293细胞;杀稻瘟菌素筛选2周形成稳定转染细胞系;荧光显微镜检测转染效率。将筛选出的最佳干扰质粒转染至EC109细胞,采用RT-PCR法检测GRP78 mRNA的表达,CCK8法检测其对EC109细胞增殖的影响。结果:测序结果表明成功构建4种靶向GRP78的miRNA重组质粒,经转染和筛选,所有转染后HEK293细胞均有GFP的表达;与未转染组及阴性对照组(pcDNATM6.2-Ctrl)相比,4种干扰质粒组HEK293细胞中GRP78 mRNA的表达均下降(P<0.05);干扰效率以转染pcDNATM6.2-miR78-1为最高。pcDNATM6.2-miR78-1转染EC109细胞,与未转染组、pcDNATM6.2-Ctrl组相比,EC109细胞中GRP78 mRNA的表达明显下降[(0.38±0.02)vs(1.03±0.04)、(1.00±0.03),均P<0.05]。CCK8法检测结果显示,转染pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒12、24、48、72 h后,EC109细胞的增殖被显著抑制[(0.028±0.001)vs(0.086±0.010),(0.035±0.003)vs(0.155±0.011),(0.112±0.009)vs(0.389±0.008)、(0.169±0.013)vs(0.433±0.009);均P<0.05]。结论:4对靶向GRP78的miRNA表达载体构建成功,其中pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒沉默效果最佳,能有效抑制EC109细胞的增殖。