人乳头瘤病毒18型L1-E6、L1-E7嵌合基因表达载体的构建及表达

目的 构建HPV 18 L1－E6，L1－E7嵌合基因的表达载体，并在CHO细胞中表达。方法 克隆HPV18 L1－E6和L1－E7基因，插入中介载体pGEMT-Easy中并测序鉴定。采用PCR定点突变法，突变L1－E6，L1－E7基因序列中与转化作用相关的位点，分别与L1基因连接后插入真核表达载体pVAX1，构建真核表达质粒pVAX-1L1 E6Mxx,L1E7Mxx。用磷酸钙沉淀法，转染CHO细胞，以抗HPV－18L1，抗E6和抗E7特异性单克隆抗体（mAb)做ELISA和免疫细胞化学法检测。结果 ELISA检测显示，转染各种pVAX1-LIE6Mxx-L1E7Mxx融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P－N值均＞2．1；免疫细胞化学检测，在胞浆，胞核可见棕黄色颗粒。结论 我建的pVAX1-L1E6Mxx-E7Mxx融合蛋白质表达质粒，可在转当细胞内表达相应的L1－E6Mxx和L1－E7Mxx蛋白，为今后进行DNA疫苗的研究奠定了基础。     

THE INFLUENCE OF HUMAN SINGLE CHAIN INTELEUKIN-12 GENE TRANSDUCTION ON THE BIOIOGICAI BEHAVIOR OF HEPATOMA 7721 CELLS

Objective. To investigate the anti-tumor effects of human single chain interleukin-12 (hscIL-12).``Method. pcDNA/ hscIL-12 recombinant was transfected into human hepatic carcinoma cells (7721 cells)by lipofectin method. The 7721/hscIL-12 cells which secrete hscIL-12 stably, were obtained via G418 selection, and in vitro the influence of hscIL-12 gene transduction on the growth of tumor cells was evaluated by cell cycle analysis. In vivo, genetically engineered 7721 cells (7721/hscIL-12, 7721/pcDNA) and parental cells were implanted into BALB/c nude mice, respectively. 7721/pcDNA and 7721/hscIL-1 2 groups were divided into two sub-groups on day 8: one was administered with hPBL twice, 6 days at interval; the other was given equal volume of PBS. Mice were sacrificed on day 26, and spleens and tumors were taken out for histologic assay.``Results. hscIL-12 produced stably by 7721/hscIL-12 cells had bioactivity, and it was proved by Western blot, immunocytochemistry, and in situ hybridization. In vitro, compared with 7721 and 7721/pcDNA, the 7721/hscIL-12 grew much more slowly. FACS assay showed apparent Gl arrest of 7721/hscIL-12 cells. In animal experiment, on day 8 after inoculation, the tumors of 7721 and 7721/pcDNA group were up to 5 ～ 7mm,while those of 7721/hscIL-12 group were 2 ～4mm. When treated with hPBL, the tumor of 7721/hscIL-12 group disappeared completely. Histologically, the tumors from 7721/hsclL-12 without hPBL treatment had numerous lymphocyte infiltration, the tumor cells displayed depression looking, atrophy, focal necrosis and apoptosis, whereas the tumors of 7721 and 7721/pcDNA groups grew thrivingly.``Conclusion. hscIL-12 transduced 7721 cells could induced significant antitumor immune response which resulted in tumor regression totally when the hPBL was inoculated, and also hscIL-12 has certain effects on mice immune svstem. These findings suggest that hscIL-12 and hscIL-12 gene therapy might have promising prospects in clinical application.     

Bacterially produced human B7-1 protein encompassing its complete extracellular domain maintains its costimulatory activity in vitro

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｗｈｉｃｈｏｆｔｈｅｔｗｏｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ (Ｉｇ ) ｌｉｋｅｄｏｍａｉｎｓ ,ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｄｏｍａｉｎＩｇＶ (ｈＢ7 1ＩｇＶ) ,ｏｒｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｃｏｎｓｔａｎｔｒｅｇｉｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｄｏｍａｉｎＩｇＣ (ｈＢ7 1ＩｇＣ)ｏｎｈｕｍａｎＢ7 1ｍｏｌｅｃｕｌｅｃｏｎｔａｉｎｔｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓ ,ａｎｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｉｆｔｈｅＢ7 1ｍ…     

抗B7.1分子不同亚区单克隆抗体的制备

Ｂ7分子是Ｔ细胞活化过程中的一个重要共刺激分子。Ｂ7 1为Ｂ7家族成员之一 ,主要诱导Ｔ细胞活化 ,产生细胞免疫应答 ,在维持生理自稳、抗肿瘤免疫、移植物排斥反应中均起重要作用[1 3] 。深入研究Ｂ7 1分子结构 ,寻找其实现协同活化Ｔ细胞的有效表位 ,探索各有效表位调整疾病时的免疫功能 ,使之向有利于宿主方向发展是十分必要的。抗Ｂ7 1抗体 ,尤其是抗Ｂ7 1分子不同亚区的抗体是进行这种研究必不可少的工具。一、材料和方法用含人Ｂ7 1ｃＤＮＡ开放阅读框架编码区的真核表达质粒 (美国Ｄａｎａ Ｆａｒｂｅｒ癌症中心Ｊ Ｆｒｅｅｍａｎ博…     

人乳头瘤病毒16 E6蛋白单克隆抗体的研制

运用杂交瘤技术，我们成功地建立了两株能稳定分泌小鼠抗人乳头瘤病毒１６Ｅ６蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。经鉴定单克隆抗体均属ＩｇＧ１ｋ。试验结果表明，所得单克隆抗体仅与ＨＰＶ１６Ｅ６融合蛋白反应，不与ＨＰＶ１６Ｅ７、Ｌ１、Ｌ２融合蛋白以及Ｌ１－Ｌ２真核表达蛋白反应，也只与Ｃａｓｋｉ细胞反应，不与Ｈｅｌａ细胞反应。初步结果说明，该抗体是ＨＰＶ１６Ｅ１６蛋白特异性的ＭｃＡｂ。     

人乳头瘤病毒16E6蛋白单克隆抗体的研制

运用杂交瘤技术，我们成功地建立了两株能稳定分泌小鼠抗人乳头瘤病毒１６Ｅ６蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，经鉴定单克隆抗体属ＩｇＧ１ｋ。试验结果表明，所得单克隆抗体仅１与ＰＶ１６Ｅ６融合蛋白反应。不与ＨＰＶ１６Ｅ７、Ｌ１、Ｌ２融合蛋白以及Ｌ１－Ｌ２真核表达蛋白反尖，也只与Ｃａｓｋｉ细胞反应，不与Ｈｅｌａ细胞反应，初步结果说明，该抗体是ＨＰＶ１６Ｅ１６蛋白特异性的ＭｃＡｂ。     

人乳头瘤病毒18型L_1基因果蝇表达系统的构建和鉴定

目的:利用基因重组技术,构建人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1基因果蝇表达质粒。方法:以pUC18-HPV18为模板,运用PCR方法扩增不含核定位序列的HPV18L1DNA片段;PCR产物连接至PGEM-TEasy质粒,并测序鉴定;将测序正确的HPV18L1DNA片段亚克隆到果蝇表达载体pMT/BiP/V5-HisA中;利用酶切及PCR方法鉴定重组质粒。结果:经双酶切及PCR鉴定,证实成功构建重组果蝇表达质粒pMT/BiP/V5-HPV18L1。结论:pMT/BiP/V5-HPV18L1重组果蝇表达质粒为下一步转染果蝇S2细胞及制备HPV18VLPs奠定了基础。     

白血病瘤苗对荷瘤小鼠细胞免疫功能影响的研究

目的：探讨白血病细胞疫苗主动免疫治疗在血液恶性肿瘤中的作用。方法：建立红白血病荷瘤小鼠,用自制的3种不同的白血病细胞瘤苗进行主动免疫治疗,用MTT比色法测其治疗2周和4周的Mφ和CTL的杀伤活性,并与对照组相比较。结果：（1）随着肿瘤细胞在小鼠体内的增长,小鼠的细胞免疫功能受到严重抑制,特异性细胞免疫功能的抑制滞后于非特异性细胞免疫功能。（2）灭活肿瘤细胞＋IFA＋细胞因子（rGM-CSF rIL-2 rIL-6)的肿瘤疫苗在提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能方面,尤其是特异性细胞免疫功能方面优于灭活肿瘤细胞＋IFA肿瘤疫苗,而仅含灭活肿瘤细胞的疫苗作用不明显,结论：灭活肿瘤细胞＋IFA＋细胞因子（rGM-CSF rIL-2 rIL-6)的肿瘤疫苗在血液恶性肿瘤的特异性主动免疫治疗中很有潜力。     

人IL-18克隆

从人外周血单核细胞中分离总RNA,进行RT-PCR获得人IL-18成熟编码序列cDNA,测序结果显示,所克隆的人IL-18cDNA编码序列与GenBank所报道的序列完全一致.本研究结果为进一步探讨IL-18的生物学活性和特性奠定了基础,同时亦为利用IL-18进行免疫基因治疗打下了良好的基础.     

白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究

目的：探讨自制的一种白血病瘤苗对C57BL/6小鼠Mφ杀伤功能的影响。方法：建立白血病荷瘤小鼠模型，用自制的3种不同的白血病瘤苗进行预防或主动免疫治疗，用MTT比色法检测预防或治疗2周、4周后小鼠Mφ杀伤活性，并与对照组比较。结果：(1)随着白血病细胞在小鼠体内的生长，小鼠的Mφ免疫功能受到严重抑制。(2)灭活肿瘤细胞 IFA 细胞因子(rGM-CSF rIL-2 rIL-6)的肿瘤疫苗在提高小鼠的Mφ免疫功能方面，优于灭活肿瘤细胞 IFA肿瘤疫苗，而仅含灭活肿瘤细胞的疫苗作用不明显。结论：灭活肿瘤细胞 IFA 细胞因子(rGM-CSF rIL-2 rIL-6)的肿瘤疫苗可以激活以Mφ为代表的非特异性细胞免疫功能，如非特异性细胞毒、免疫监视、抗原递呈等功能，为进一步活化T淋巴细胞打下基础，此种疫苗在血液恶性肿瘤的特异性主动免疫治疗中很有潜力。