基因治疗用腺相关病毒载体的剂量效应与剂量控制(英文)

人类基因治疗需要在靶细胞适时、适量、安全的产生具有疗效的药物,这些正好是定量药理学的研究范畴。重组腺相关病毒载体(rAAV)具有的各种特性以及近来在规模化制备方面取得的进展使其逐渐成为基因治疗的理想载体。超过60项以AAV为载体的基因治疗已经完成或正在展开。其中,rAAV载体的剂量与基因表达效率以及临床疗效之间的关系是研究者关注的焦点之一。多数研究认为,在一定的剂量范围内,基因表达水平具有剂量依赖性。然而,基因表达水平同时还受病毒载体构型、组织趋向性、细胞靶向性、注射途径,甚至患者的年龄、性别等条件影响,基因表达水平还可受到其他药物的调控。因此,基因治疗实验过程中应结合定量药理学深入展开,解决基因治疗中的定量与药效之间的关系。     

环丙沙星治疗伤寒60例临床观察

１９９３～１９９６年我院共收治伤寒６０例，我们采用环丙沙星治疗取得满意的效果。现将其总结报告如下：１临床资料１．１一般资料６０例均为本地区４年来散发病例，男３２例，女２８例，年龄８～１２岁，１３～４５岁２４例。１．２临床表现本组病例病程较长，以持续发...     

多基因联合作用对kallistatin活性增强的研究

 目的 加强kallistatin(Kal)这一多功能内源性抗血管生成因子抗肿瘤活性。方法 将其他多个基因与Kal联合应用,利用脂质体将带有目的基因的质粒转染入内皮细胞和肿瘤细胞,分析多基因联合治疗对细胞特性的影响。结果 Kal对肺癌细胞A549、NCI-H446、SPC-A1都具抑制作用。Kal与Trail或vasostatin(Vas)联合,可加强对SPC-A1细胞的抑制作用,但三者联合该抑制作用并未进一步加强。Kal与angiostatin(Ang)、Vas 联合应用可显著增强对血管内皮细胞EVC304生长、迁移以及小管形成的抑制作用。结论 Kal基因可与多种类型的基因联合作用,增强对肿瘤细胞和血管内皮细胞的抑制作用,为肿瘤的多基因联合治疗提供了实验基础。     

干细胞不均匀分裂与肿瘤发生

干细胞可以通过不均匀分裂和均匀分裂两种模式产生后代,均匀分裂产生两个相同的子代干细胞;不均匀分裂产生的子代细胞中一个趋向分化,另一个保持自我更新的能力。干细胞不均匀分裂机制的失调可能导致肿瘤细胞的出现。干细胞的不均匀分裂受细胞极性因子、细胞命运决定因子及纺锤体的调节,这些因子突变或失调均可导致细胞的恶性转化。因此,深入探讨干细胞的分裂模式以及干细胞-肿瘤干细胞-肿瘤细胞之间的关系将成为今后肿瘤研究的重要方向。这些领域的深入研究将为肿瘤的耐药性、复发和转移等问题提供新的解决途径。     

肿瘤基因治疗的研究进展与思考

肿瘤基因治疗的临床研究开展将近20年,迄今有近1 000 个项目已经或正在开展,涉及多种基因、多种载体以及绝大多数肿瘤类型。然而,基因药物在临床上对肿瘤的长效治疗效果尚无定论,出现这一现象的主要原因之一是对肿瘤发生与生长涉及多基因、多步骤的复杂病变过程缺乏系统认识。研究发现,肿瘤内众多的基因突变主要集中在几条已知的信号通路上,且突变的信号通路之间同时存在协同突变和拮抗突变两种作用。肿瘤内主要信号通路的协同突变不难理解,而拮抗突变也有相应的实验证据,如著名的EGFR 和K-ras突变,在肺腺癌中各自的突变频率都非常高,但是很少有患者同时具有两个突变。“ 癌基因依赖”（Oncogene Addiction）理论也许能很好地解释信号通路突变的拮抗现象。这一理论认为,虽然肿瘤细胞的出现涉及到很多、复杂的遗传和表型的异常,但有些异常的出现明显依赖于某个肿瘤细胞增殖、存活相关的癌基因及其信号通路,如这一特定癌基因失活,这些相关的异常就会发生异于正常癌细胞的改变。无论是协同还是拮抗作用,都要求肿瘤治疗药物研发以癌变过程中发生异常的信号通路为标靶,而不是仅针对其中单个基因。因此,开发能同时调控多个信号通路的基因药物如microRNA,或者多基因联合治疗将是肿瘤基因治疗可供选择的重要思路。      

MicroRNA在肺癌早期诊断、预后判断和治疗中的作用

肺癌是目前世界范围内引起死亡人数最多的肿瘤。在蛋白和基因水平上,肺癌发生的分子网络已经部分得到阐明,基于肺癌发生分子网络的基因治疗在过去10年取得了一定的进展,但是肺癌的5年死亡率并没有得到明显的改善(80%～85%)。MicroRNA这一内源性、非编码的短RNA的发现为提高肺癌患者的存活率带来了新的希望。肺癌中microRNA的表达模式不但与肺癌的诊断、分期、进展、预后相关,也为肺癌的基因治疗以及其他常规化疗药物的开发提供了新的研究方向和方法。     

突变型K-ras siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡

目的:构建靶向Kras的siRNA,研究Kras siRNA对Kras基因突变型肺癌细胞A549及Kras野生型小细胞肺癌细胞NCIH446生长和迁移的抑制作用。方法:设计并人工合成4条Kras siRNA（针对野生型Kras基因的Kras siRNA1~ Kras siRNA3;针对突变型Kras 基因的Kras siRNA4）,并分别转入A549和NCIH446细胞。RTPCR和Western blotting检测不同Kras siRNA对Kras mRNA和蛋白表达的影响,MTT法检测不同Kras siRNA对A549和NCIH446细胞增殖的抑制作用,Transwell实验和Hoechst 33258染色检测Kras siRNA对细胞迁移和凋亡的影响。结果:靶向突变型Kras的Kras siRNA4能特异性抑制A549细胞中Kras的表达,但对Nras和Hras的表达没有影响。Kras siRNA4抑制A549细胞的增殖,但不影响含野生型Kras基因的NCIH446细胞的增殖。Kras siRNA4还能诱导A549细胞凋亡、抑制A549细胞迁移。结论: 针对突变型Kras基因的siRNA可特异性抑制Kras突变型肺癌细胞的增殖和迁移,并诱导该细胞凋亡,Kras siRNA可望用于Kras突变型肿瘤特别是肺癌的个体化治疗。     

重组腺相关病毒载体的泛素化机制及其应用

重组腺相关病毒( rAAV)载体是基因治疗临床应用载体之一,但目前rAAV基因药物的临床疗效还不甚理想,提高载体的转导效率是rAAV基因药物研发的主攻方向之一.近来研究发现,泛素-蛋白酶体系统在rAAV载体的胞内传递过程中具有非常重要的作用,调控该过程可显著提高rAAV载体在多种细胞和组织中的基因转导效率.     

肝星状细胞氧化应激模型的构建、检测与分析

目的：建立更为全面的肝星状细胞体外氧化应激模型,为检验药物在肝纤维化氧化应激中发挥的具体作用提供有效工具。方法：分别用Fe-NTA/AA及过氧化氢作用于大鼠原代肝星状细胞及人肝星状细胞系LX-2细胞以造成不同类型的氧化应激反应,以超氧化物阴离子荧光探针检测细胞内产生的超氧化物水平,并分别用结晶紫染色或MTT检验来检测不同氧化刺激物对两种肝星状细胞体外增殖性的影响。结果：铁过载及过氧化氢都会引起两种细胞产生氧化应激反应,铁过载可加速原代肝星状细胞激活,对已完全活化的LX-2细胞产生明显毒性作用;过氧化氢则对两种细胞都会造成明显的细胞毒性作用。结论：处于不同激活状态的肝星状细胞对不同氧化刺激物的反应存在差异,因而在检验肝纤维化药物有效性时,应根据不同的病理、生理需求选择恰当的细胞及氧化应激模型。     

缩短精卵共孵育时间对人类体外受精结局的影响

人类体外受精助孕技术实施过程中,有相当一部分患者不能如愿以偿的获得妊娠机会,因此该技术仍在不断发展和进一步完善中。近年来,学者们试图通过缩短精卵共孵育时间来进一步改良常规体外受精(in vitro fertilization,IVF)技术及改善IVF结局。本文将对缩短精卵共孵育时间与人类IVF结局之间的关系进行综述,主要讨论缩短精卵共孵育时间对活性氧(reactive oxygen species,ROS)、雌二醇(E2)及孕酮(P4)、受精率、多精受精发生率、胚胎质量及妊娠率等关键因素的影响。