mda-7/IL-24和IL-24 delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化

目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。     

白细胞介素-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用

 目的　探索白细胞介素（IL）-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用。方法　用TPA诱导白血病细胞系U937和HL-60向单核-巨噬细胞分化后,检测mda-7／IL-24及其选择性剪接体IL-24 delE5的表达。构建IL-24 delE5真核表达载体,稳定转染K562细胞。通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-Ⅴ／PI检测及动物实验,观察IL-24 delE5对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期、凋亡及体内致瘤性的影响;同时与mda-7／IL-24进行比较。结果　在TPA诱导分化的U937和HL-60细胞中发现IL-24 delE5的表达。稳定转染IL-24 delE5的K562增殖及集落形成明显下降,与空载体相比,G0／G1期细胞比例由（24.46±3.99）%增至（42.69±3.04）%,细胞周期阻滞于G0／G1期,体内实验证实K562细胞移植瘤生长明显被抑制。与mda-7／IL-24相比,上述各实验结果差异均无统计学意义。结论　IL-24 delE5与mda-7／IL-24一样对人类白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用可能与IL-24 delE5所引起细胞周期G0／G1期阻滞有关。     

navitoclax联合阿糖胞苷在HEL细胞凋亡中的作用

目的探讨navitoclax(NTX)联合阿糖胞苷(cytarabine, Ara-C)对HEL细胞凋亡的影响及可能机制。方法取对数生长期HEL细胞,随机分为NTX组、Ara-C组和联合组,分别应用不同浓度NTX、Ara-C、NTX+Ara-C处理72 h,采用CCK-8法测定细胞活率,计算50%细胞抑制时的药物浓度(half maximal inhibitory concentration, IC_(50)),依据IC_(50)进行后续试验。分别取NTX组、Ara-C组和联合组处理24、48 h时细胞,采用流式细胞术检测早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率;采用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, BAX)mRNA、Bcl-2同源拮抗剂(Bcl-2 homologous antagonist/killer, BAK)mRNA、Bcl-2细胞凋亡相互作用介质(Bcl-2 interacting mediator of cell death, BIM)mRNA相对表达量,并进行比较。结果联合组应用NTX 10 nmol/L+Ara-C 20 nmol/L、NTX 100 nmol/L+Ara-C 200 nmol/L处理72 h细胞活率[(35.27±4.04)%、(13.58±1.33)%]低于NTX组应用NTX 10 nmol/L、100 nmol/L[(103.44±9.26)%、(65.56±3.37)%]、Ara-C组应用Ara-C 20 nmol/L、200 nmol/L处理72 h[(53.46±5.42)%、(20.92±1.74)%](P0.05);联合组应用NTX 1 000 nmol/L+Ara-C 2 000 nmol/L、NTX 10 000 nmol/L+Ara-C 20 000 nmol/L处理72 h细胞活率[(11.92±0.94)%、(8.86±1.26)%]低于Ara-C组应用Ara-C 2 000 nmol/L、20 000 nmol/L处理72 h[(19.43±0.43)%、(13.46±0.70)%](P0.05);处理24 h,联合组、NTX组、Ara-C组细胞早期凋亡率[(39.40±0.80)%、(19.50±1.13)%、(7.23±0.73)%]、总凋亡率[(50.01±0.65)%、(28.01±0.56)%、(10.20±0.71)%]依次降低(P0.05),联合组、NTX组晚期凋亡率[(10.61±1.45)%、(8.51±0.85)%]高于Ara-C组[(2.97±0.09)%](P0.05),联合组与NTX组比较差异无统计学意义(P0.05);处理48 h,联合组、NTX组、Ara-C组细胞早期凋亡率[(67.13±9.11)%、(15.03±0.87)%、(4.50±0.07)%]、晚期凋亡率[(15.70±1.33)%、(3.66±0.49)%、(2.22±0.31)%]、总凋亡率[(82.83±10.31)%、(18.70±1.28)%、(6.72±0.37)%]依次降低(P0.05);联合组处理24 h BAK mRNA相对表达量(1.27±0.45)高于NTX组(0.68±0.14)(P0.05),处理48 h BAK mRNA相对表达量(3.66±0.27)高于NTX组(0.90±0.04)、Ara-C组(1.06±0.41)(P0.05);处理24、48 h,联合组、NTX组、Ara-C组BAX mRNA相对表达量(24 h:1.34±0.41、1.14±0.18、0.96±0.28;48 h:1.09±0.48、0.93±0.14、1.04±0.26)、BIM mRNA相对表达量(24 h:0.89±0.07、1.06±0.20、1.04±0.22;48 h:1.19±0.30、0.87±0.08、1.14±0.15)比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 NTX联合Ara-C能明显诱导HEL细胞凋亡,其机制与上调前凋亡蛋白BAK表达有关。     

mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化

目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U9...     

人mda-7/IL-24对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用

摘 要 目的: 探索人黑素瘤分化相关基因-7（melanoma differentiation associated gene7，mda7；又称IL-24）对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用。方法：用RTPCR法检测11个造血系统恶性肿瘤细胞系mda-7受体的转录情况。用脂质体转染法将构建的重组真核表达载体pTargetIL24转染K562细胞。以RTPCR和Western blotting方法检测转染的K562细胞mda7的表达情况；通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、AnnexinⅤ/PI检测mda7/IL24对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响；以裸鼠移植瘤模型观察mda-7对K562细胞移植瘤的治疗作用。结果：在11个造血系统恶性肿瘤细胞系（NB4、HL60、CEM、Namalwa、Jurkat、KG1a、U937、K562、Ramos、J61、HEL细胞）中没有检测到完整mda7受体的表达。转染mda7的K562细胞能显著表达mda-7mRNA及其蛋白；其与转染空载体和未转染的K562细胞相比，细胞增殖活力以及集落形成能力明显下降（P＜0.05），细胞周期阻滞于G0/G1期（P＜0.05），但细胞凋亡率没有明显变化。裸鼠体内实验证实了mda7/IL24明显抑制K562细胞移植瘤生长（P＜0.01）。结论：mda-7/IL-24对白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用，该作用与mda7/IL24引起细胞周期G0/G1期阻滞有关。     

无血清培养体系对脐带血CD34~+细胞定向红系分化影响的比较

目的:通过3种无血清红系定向诱导分化培养体系比较,优化培养体系诱导脐带血干/祖细胞(HSPC)体外红系定向分化,以满足基础研究与临床应用。方法:应用磁珠分选脐带血单个核细胞中的CD34~+细胞;分别接种到3种培养体系(1、2、3)中并采用3阶段培养法诱导CD34~+细胞红系定向分化,在分化不同阶段进行细胞计数,瑞氏吉姆萨染色,应用流式细胞术检测细胞表面CD71、CD235a的表达,集落形成能力检测鉴定红系分化的进程。结果:体系2促HSPC增殖能力最强,体系3促红系分化效果最佳。体系2培养的细胞增殖能力均明显高于体系1、2(P 0.05);FACS分析显示,红系表面分子CD71、CD235a在体系3培养的细胞表面表达最高,分化d 15 CD235a+百分率高达(92.23±3.89)%,体系2为(84.67±3.12)%,体系1为(72.17±6.83)%(P 0.05);细胞形态学染色显示,体系3培养的细胞在分化d 12的晚幼红细胞比例为(67.67±2.08)%,是体系2的10.69倍、体系1的25.34倍(P 0.05);造血集落形成实验发现在体系3中d 3-9形成的BFU-E比例逐渐升高(r=0.99, P 0.05),体系3中BFU-E形成比率明显高于体系1、2(P 0.05)。结论:通过比较3种培养体系,筛选出体系3是促进CD34~+细胞体外红系分化最有效的体系,体系2是促增殖最有效的体系。本研究为进一步提高HSPC体外红系增殖与诱导效率奠定了技术基础,也为研究红系分化调控机制提供了体外培养体系。     

白细胞介素-24抑制K562细胞生长的机制

 目的　探讨白细胞介素-24（又称黑色素瘤分化相关基因-7,IL-24／mda-7）对白血病细胞系K562的周期阻滞作用机制。方法　利用基因芯片技术初步分析转染IL-24／mda-7与转染空载体的K562细胞之间基因表达差异,并以实时定量PCR验证;以Western blotting方法检测pRb的磷酸化水平。结果　转染IL-24／mda-7可使K562细胞的细胞周期相关基因p21WAF-1、BCCIP上调,cdk6、Smurf2下调,定量PCR证实了上述表达变化;IL-24／mda-7转染还可明显降低K562细胞pRb磷酸化水平。结论　IL-24／mda-7 可能通过调节细胞周期相关蛋白,即上调p21WAF-1、BCCIP,下调cdk6、Smurf2,使K562阻滞于G0／G1期,从而抑制细胞生长。     

人mda-7/IL-24对淋巴瘤细胞Namalwa的抑制作用

目的:研究黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7,又称IL-24)对淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的抑制作用。方法:用半定量RT-PCR方法检测10个造血系统恶性肿瘤细胞系(Namalwa、Raji、K562、NB4、U937、Ramous、CEM、KG1a、HL60、J6-1)中mda-7/IL-24的表达情况。用RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆mda-7/IL-24编码区,构建真核表达载体pTarget-IL-24。经测序鉴定后,用脂质体法转染Namalwa细胞,筛选稳定表达细胞株。转染细胞经RT-PCR和Western blotting证实mda-7/IL-24的表达。通过MTF法、集落形成试验、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验来评价mda-7/IL-24对肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成、凋亡情况、体内致瘤能力的作用。结果:10个造血系统恶性肿瘤细胞系中未检测到mda-7/IL-24的表达;转染重组质粒pTarget-IL-24的Namalwa细胞在mRNA与蛋白水平都有mda-7/IL-24的表达;稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞增殖活力以及集落形成能力与转染空载体的对照组相比明显下降(P<0.05);但是两者的凋亡率比较无统计学意义。裸鼠体内移植瘤实验结果显示稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞株的致瘤性明显低于转染空载体的对照组(P<0.05)。结论:mda-7/IL-24对来源于Burkitt淋巴瘤的Namalwa细胞系具有明显的增殖抑制作用,为Burkitt淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。