纳米载体介导的PiggyBac转座子制备CAR-NK细胞

目的：探索新型阳离子聚合物纳米载体mPEG-P(Asp-AED-g-HFB) (PAEF)和PiggyBac转座子介导嵌合抗原受体 （chimeric antigen receptor,CAR）修饰自然杀伤（natural killer,NK）细胞的基因转染方法,为肿瘤细胞免疫治疗制剂研发提供新策 略。方法：制备PAEF/DNA（转座酶+转座子）复合物,通过Nano-ZSE动态光散射系统（Malvern Instruments）测量PAEF/DNA复 合物的粒径分布和表面电位;DNA凝胶电泳验证PAEF的DNA包封率、释放性和稳定性,结合粒径电位选择进入细胞合适的N/P 值;CCK-8细胞毒性实验分析不同N/P值条件下PAEF/DNA复合物的细胞毒性;荧光显微镜及流式细胞术检测细胞转染效率, 评 估PAEF基因转染载体的可行性。结果：PAEF可包裹DNA形成粒径100~150 nm的纳米复合物,后者易于介导DNA进入细胞; 当N/P值为20时,PAEF即可实现DNA的完全包裹;在还原剂二硫苏糖醇（dithiothreotol,DTT）存在下,PAEF对DNA有良好的释 放能力;N/P值为80时,PAEF/DNA复合物转染组的NK-92细胞存活率显著高于脂质体转染组[（72.50±3.9） % vs（64.03±1.8） %, P<0.05];荧光显微镜下观察发现,PAEF/DNA组荧光多、荧光强度大;流式细胞术显示最高转染效率为83.4%。结论：纳米载体 PAEF通过静电吸附作用能够很好地包裹DNA,且生物相容性好,基因转导效率较高,成功制备的CAR-NK细胞为过继免疫治疗 提供良好的实验基础。     

载siRNA微泡实现肿瘤治疗与疗效评估一体化的可行性分析

目的探讨利用载小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）的脂质微泡超声造影剂实现恶性肿瘤基因治疗与疗效评估
一体化的可行性。方法以异质性组装法制备载siRNA的脂质微泡,并用动态光散射法检测其直径大小和表面电位。通过激
光共聚焦显微镜观察红色荧光标记的siRNA在瘤内的分布。针对抗凋亡基因sirtuin 2（SIRT2）设计siRNA,通过在体实验研究
载siRNA微泡在超声辐照下的肿瘤基因沉默效果。在用载siRNA微泡治疗肿瘤的同时,以超声造影技术观察肿瘤治疗效果。
结果siRNA微泡的直径为400.7±30.5 nm,表面带弱正电（+8.8±0.8 mV）。siRNA微泡协同超声辐照能高效地将siRNA递送到
肿瘤细胞胞浆内,有效沉默肿瘤组织中的SIRT2基因,诱导肿瘤凋亡,明显减缓肿瘤的生长速度。超声造影检查结果提示,载
siRNA微泡具有良好的超声显像效果,能在治疗过程中实时评估肿瘤的血供情况。结论新型载siRNA的脂质微泡超声造影剂
在活体上能对肿瘤进行基因沉默治疗,同时观察肿瘤治疗效果,实现恶性肿瘤基因治疗与疗效评估的一体化。