秋冬季婴幼儿轮状病毒感染分子流行病学调查

目的监测2010年云南昭通地区秋冬季腹泻患儿感染轮状病毒的流行趋势,了解流行毒株的基因型特征。方法 2010年9—12月在云南省昭通市第一人民医院采集94份就诊的腹泻患儿粪便,应用胶体金法、逆转录聚合酶链式反应及PAGE电泳等方法,对样品进行轮状病毒抗原检测,其中8份阳性样品进行VP7基因测序分析及基因型分型。结果腹泻病患排泄物中轮状病毒抗原阳性比例为54.3%(51/94);8份轮状病毒基因序列分析,其中7份为G1型,1份为G3型;核苷酸同源性分析发现检测样品中轮状病毒主要与在中国辽宁、印度和泰国发现的流行株相似。结论 2010年昭通地区秋冬季患儿腹泻主要由轮状病毒引起,其中以G1型为主,其次为G3型。     

两种HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其免疫原性比较

目的:利用毕赤酵母表达系统表达两种融合形式的乙肝病毒表面抗原(HBsAg-s和s-HBsAg),并对融合蛋白的免疫原性进行研究。方法:用毕赤酵母分泌型表达质粒pPIC9k为载体,通过PCR方法引入(Gly4Ser)3连接肽的编码基因将GM-CSF融合到HBsAg基因的3′端或5′端进行分泌表达,表达产物以SDS-PAGE及Western blot进行分析并通过DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱进行蛋白纯化。将纯化的两种融合蛋白与单纯的HBsAg蛋白分别免疫小鼠,ELISA方法检测HBsAg特异的抗体反应水平。结果:两种HBsAg/GM-CSF融合蛋白均可在毕赤酵母菌株GS115中获得了分泌表达,Western blot分析表明表达产物能够与抗GM-CSF抗体及抗HBsAg抗体发生特异性结合。免疫后的血清ELISA结果显示,相比单纯的HBsAg蛋白,两种融合蛋白可以诱导出更高的抗体水平(P<0.05),其中将GM-CSF蛋白融合在HBsAg蛋白的C端效果要好于融合在N端。结论:通过与GM-CSF蛋白的融合可以显著增强HBsAg的免疫原性,这为提高乙肝疫苗的免疫效果提供了新的思路与方法。     

两种hIL-6/GM-CSF融合蛋白基因的构建、表达及活性比较

目的 :构建及表达具有hIL 6和hGM CSF双重生物学活性的hIL 6 /GM CSF融合蛋白分子。方法 :应用PCR技术对hIL 6和hGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在两者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成克隆有两种融合蛋白基因的pBV2 2 0表达质粒 ,两种融合蛋白分别是 :IL 6 (1～ 184 ) GM CSF(9～ 12 7) (简称IG1)和IL 6 (2 4～ 184 ) GM CSF(9～ 12 7) (简称IG2 )。将表达质粒分别导入E .coliBL 2 1中诱导表达。通过QSepharoseHP离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化目的蛋白。使用hIL 6依赖细胞株B9和hGM CSF依赖细胞株TF1,通过MTT比色法测定融合蛋白的生物学活性。结果 :对两种融合蛋白基因的测序结果表明 ,其序列与理论设计完全一致。表达质粒在E .coliBL 2 1中均得到高效表达 ,表达的融合蛋白均占总蛋白含量的 2 5 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在 ,通过QSepharoseHP离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后 ,获得两种目的蛋白 ,其纯度均达到 95 %以上。活性测定结果表明 ,两种融合蛋白均具有较高的hIL 6和hGM CSF的双重生物学活性。结论 :获得了具有较高纯度和双重生物学活性的hIL 6 /GM CSF融合蛋白     

戊型肝炎病毒的分子生物学研究进展

戊型肝炎病毒(HEV)是一类新发现的RNA病毒.由于缺少可靠、方便的常规细胞培养系统和病毒感染的小动物模型,而从自然感染的人或实验感染的非人灵长类动物中获取的病毒量太少,对HEV的生物学和病理学研究受到严重限制.近几年来,主要利用亚基因组表达策略研究HEV基因产物的特性和功能,取得很多重要进展.本文以此为重点,概述了近年HEV的分子生物学研究成果     

重组TRAIL腺病毒抑制肺癌细胞生长和诱导凋亡的作用

目的：研究重组TRAIL腺病毒（Ad-TRAIL）对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法：培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜、吖啶橙染色后荧光显微镜、电镜进行细胞形态结构观察;肿瘤细胞生长抑制实验检测细胞存活率,绘制肿瘤细胞生长抑制曲线;DNA凝胶电泳、PI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡;集落形成实验观察肿瘤细胞集落形成能力。结果：Ad-TRAIL组、sTRAIL组与空腺病毒Ad组、PBS阴性对照组相比均明显抑制非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460的增殖。DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;形态学观察发现Ad-TRAIL组的肿瘤细胞具有细胞凋亡的形态;Ad-TRAIL作用的YTMLC细胞有较高比例（8.55%）的亚二倍体凋亡峰,而Ad和PBS组分别为1.08%和0.47%;Ad-TRAIL组被TUNEL标记的细胞比例为10.6%,高于Ad组的1.13%。Ad-TRAIL组的集落数为28±7,而PBS和Ad对照组分别为257±18,193±12。结论：Ad-TRAIL对非小细胞肺癌细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用,Ad-TRAIL有可能用于非小细胞肺癌的基因治疗。     

戊型肝炎病毒的分子生物学研究进展

戊型肝炎病毒(HEV)是一类新发现的RNA病毒。由于缺少可靠、方便的常规细胞培养系统和病毒感染的小动物模型，而从自然感染的人或实验感染的非人灵长类动物中获取的病毒量太少，对HEV的生物学和病理学研究受到严重限制。近几年来，主要利用亚基因组表达策略研究HEV基因产物的特性和功能，取得很多重要进展。本文以此为重点，概述了近年HEV的分子生物学研究成果。     

二价轮状病毒灭活疫苗的免疫效果评价

目的 评价二价轮状病毒灭活疫苗免疫效果,探讨其开发的可行性.方法 首先将G1型和G3型轮状病毒灭活疫苗等量混合制备二价疫苗,设立抗原量相等的G1型、G3型单价疫苗对照及PBS阴性对照,然后肌内注射免疫小鼠,通过ELISA检测血清和肠道中病毒特异性IgG和IgA、微量中和实验检测血清中病毒特异性中和抗体,ELISPOT分析免疫小鼠脾细胞中病毒特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞的数量,评价二价疫苗的免疫效果.结果 与阴性对照组相比,二价疫苗显著诱发了G1和G3特异性血清IgG、IgA、中和抗体和肠道IgG、IgA.与单价疫苗组相比,二价疫苗诱发的G1特异性血清IgG和IgA、肠道IgG和IgA及血清中和抗体与G1单价疫苗组诱发的相应抗体间差异无统计学意义;但二价疫苗组诱发的G3特异性血清IgG(t=2.691,P＜0.05)及中和抗体(t=2.561,P＜0.05)却显著高于G3单价疫苗组诱发的相应抗体水平,其余G3特异性抗体水平两者无差异.同时,与阴性对照组相比,二价疫苗免疫小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-4分泌细胞的数量均显著增加.与单价疫苗组相比,G1刺激产生的IFN-γ和IL-4分泌细胞的数量,二价疫苗组与G1单价疫苗组无显著差异;但在二价疫苗组,G3刺激产生的IL-4分泌细胞的数量显著高于G3单价疫苗组(t=2.327,P＜0.05),而IFN-γ分泌细胞的数量两组无显著性差异.结论 二价疫苗可以有效的诱发免疫应答,疫苗不同成分诱发的免疫应答未发生干扰抑制,这些结果为临床二价轮状病毒灭活疫苗的开发提供了实验依据.