Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究

目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒(Ad5F35-LMP2),免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量(1.5×1010TCID50/只)、中剂量(1.5×109TCID50/只)、低剂量(1.5×108TCID50/只)Ad5F35-LMP2重组腺病毒,同时设对照组(PBS4.0ml/只)。肌内注射免疫恒河猴,每个月一次,共免疫3次,第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV-LMP2细胞毒性T细胞应答,同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答,免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系,较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV-LMP2特异性细胞和体液免疫反应。     

热毒净在体外对EB病毒抗原表达的抑制作用

传染性单核细胞增多症(IM)是儿童期常见EB病毒感染所致的传染性疾病,目前尚无理想的治疗方法。我院儿科长期以来应用中药热毒净(RDJ)治疗EB引起的小儿传染性单核细胞增多症,取得了较为满意的疗效[1,2]。本实验研究了热毒净对Raji细胞EB病毒早期抗原表达的影响,为热毒净的抗EB病     

鼻咽癌血清学检测方法的改进

目的 改进现有鼻咽癌血清学早期诊断方法,提高检测灵敏度.方法 用链霉亲和素.生物素放大免疫酶法与既有常规免疫酶法对鼻咽癌防治示范基地所取294份普查血清IgA/VCA,IgA/EA抗体进行血清学检测,并用SPSS统计软件对检测结果进行χ2检验和t检验.结果 共检测30岁以上294份普查人群血清,其中鼻咽癌患者血清106份,健康人血清188份.改进的链霉亲和素一生物素放大免疫酶法与既往已有的免疫酶法相比,血清IgA/VCA、IgA/EA抗体的检测阳性率增加;检测血清抗体的几何平均数明显提高.结论 改进方法可以提高血清学检测的灵敏度,同时保证了检测结果的特异性,提高了鼻咽癌的检出率,可以应用于鼻咽癌早期筛查工作.     

抵抗8-氮鸟便嘌呤的CNf-A细胞株的建立

用8-AG从人的鼻咽癌上皮细胞株CNf建立了一个HGPRT~-自然突变株(CNf-A)。此株细胞对8-AG有抵抗,在20μg/ml 8-AG培养液中维持了一年。HAT培养基能杀死CNf-A细胞。此细胞能与带EB病毒基因的类淋巴母细胞B95-8融合,形成的杂交细胞能在HAT培养液中存活,并可检出EB病毒的核抗原。     

EB病毒LMP2-LMP1Δ融合基因免疫效果的初步研究

目的构建EBV LMP2-LMP1Δ融合基因,初步观察融合基因体内诱导EBV特异性细胞免疫应答的效果。方法 （1）应用PCR方法构建包含EBV-LMP2全长和去除致癌基因的EBV-LMP1Δ融合基因,并将融合基因插入到pcDNA3.1（＋）-his真核表达载体中,构建重组表达质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ,Western blot和免疫荧光方法检测融合蛋白的表达。（2）使用pcDNA-LMP2-LMP1Δ及携带LMP1Δ和LMP2基因的重组腺病毒单独或联合免疫Balb/c小鼠,末次免疫1周后应用IFN-γELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中EBV特异性CTL水平。结果 （1）真核表达质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ能够在293细胞中表达LMP2-LMP1Δ融合蛋白,融合蛋白分子量大小正确,具有免疫原性。（2）重组质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ免疫小鼠能够诱导出EBV特异性的CTL,但诱导的CTL水平很低,1×106小鼠脾淋巴细胞中平均斑点数只有12个,远远低于LMP1Δ、LMP2重组腺病毒平均495个斑点数的免疫结果。但使用pcDNA-LMP2-LMP1Δ和重组腺病毒联合免疫,与只使用重组腺病毒相比,诱导的EBV特异性CTL水平能够显著提高,1×106小鼠脾淋巴细胞中平均斑点数可达1 001个（P〈0.01）。结论构建的EBV LMP2-LMP1Δ融合基因能够有效表达LMP2-LMP1Δ融合蛋白,并能够在小鼠体内诱导出EBV特异性的CTL反应,与重组腺病毒联合使用,可以提高特异性CTL应答水平。     

HIV DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫效果的研究

目的 构建含HIV-1B亚型中国株gagV3基因的DNA疫苗及重组腺病毒伴随病毒(rAAV)疫苗，并研究DNA疫苗和rAAV联合免疫的免疫效果。方法 将HIV-1B亚型中国株gagV3基因克隆入真核表达载体pCI-neo上，构建了含HIV-1 gagV3基因的DNA疫苗pCI-gagV3。采用电击法将pCI-gagV3质粒转染p815细胞，用G418压力筛选，得到转入重组质粒的细胞系p815-gagV3，用免疫酶法检测细胞系中HIV-1基因的表达。用该DNA疫苗进行小鼠免疫实验，检测免疫效果；用该DNA疫苗初次免疫，含同样gagV3基因的重组腺病毒伴随病毒rAAV-gagV3加强免疫，采用免疫酶法检测免疫小鼠血清中HIV-1特异性的抗体水平，用乳酸脱氢酶法检测免疫小鼠的HIV-1特异性CTL水平。结果 pCI-gagV3可以在p815细胞中表达HIV-1的基因，免疫BALB／c小鼠后可以在小鼠体内诱发HIV-1特异性的细胞和体液免疫反应。HIV-1特异性抗体滴度为1：20；效靶比为50：1时，CTL平均杀伤率为41．7％。pCI-gagV3与rAAV-gagV3联合免疫并不能明显提高抗体水平，但可以提高CTL反应，效靶比为50：1时，CTL平均杀伤率为61.3％，高于单独用DNA疫苗或重组AAV疫苗免疫后产生的CTL活性。结论 DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫可以提高免疫小鼠产生的HIV-1特异性CTL反应。     

新疆7岁以下儿童Epstein-Barr病毒感染的流行情况调查

为了解ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒ（ＥＢ）病毒感染在新疆少数民族中的流行情况,在新疆南、北城市和农、牧区采集维吾尔族（维族）、哈萨克族（哈族）、柯尔克孜族（柯族）、汉族共４个民族７岁以下儿童血清８４１份,其中维族１８１份,哈族１１３份,柯族７１份,汉族４７６份。用酶染色法检测上述血清标本中ＥＢ病毒壳膜抗原（ＶＣＡ）ＩｇＧ抗体。ＶＣＡ抗原玻片及试剂均由中国预防医学科学院病毒所提供。检测结果,各民族７岁以下儿童ＥＢ病毒ＶＣＡＩｇＧ抗体阳性率为９３－５％（７８６８４１）,不同民族、不同年龄抗体检出情况见…     

热毒净对鼻咽癌细胞株CNE2抑制作用的研究

目的:观察热毒净对表达EB病毒抗原的CNE₂细胞致瘤的影响及其细胞毒作用。方法:用MTT法测定热毒净对CNE₂细胞的细胞毒作用,抑瘤实验检测热毒净对CNE₂细胞致瘤的影响。结果:MTT法显示在低浓度下,热毒净对体外培养的CNE₂细胞生长没有明显的抑制作用,但在高浓度下,对细胞生长有抑制作用。热毒净在无细胞毒的浓度下,能抑制CNE₂细胞在SCID小鼠体内所致肿瘤的生长。浓度越高,热毒净对肿瘤生长的影响越明显。结论:热毒净能抑制CNE₂细胞在SCID小鼠体内的致瘤作用。     

热毒净及阿昔洛韦对EB病毒抗原表达抑制作用的对比实验

[目的]观察热毒净及阿昔洛韦对EB病毒抗原表达有无抑制作用,并比较两者对EB病毒的作用强弱。[方法]免疫酶法测定热毒净及阿昔洛韦对Raji细胞早期抗原(EA)的表达,分别计算出两者的阻断率(IR)。[结果]热毒净在无毒的浓度下,对Raji细胞EB病毒EA抗原表达有较强的抑制作用,阿昔洛韦在实验的浓度下,对EB病毒EA抗原表达也有抑制作用。[结论]热毒净与阿昔洛韦比较能较强抑制EB病毒抗原的表达。     

携带EBV-LMP2基因的重组MVA痘苗病毒初步免疫效果

目的 观察携带EBV lmp2基因的重组痘苗病毒疫苗在小鼠体内诱导的LMP2特异性细胞免疫应答效果.方法 使用表达EBV lmp2基因的重组痘苗病毒MVA-Lac-LMP2,采用低（2＆#215;105 pfu/只）、中（2 ＆#215; 106pfu/只）、高（2 ＆#215; 107pfu/只）三个剂量组,分别于0、2周免疫BALB/c小鼠,末次免疫1周后应用IFN-γ ELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中EBV LMP2特异性CTL应答水平.结果 MVA-Lac-LMP2能诱导小鼠产生EBV LMP2特异性的CTL应答,其中,中、高剂量组小鼠CTL水平明显高于低剂量组（P≤0.01）,中、高剂量组小鼠诱导的CTL应答水平差异没有统计学意义.结论 MVA-Lac-LMP2能够在小鼠体内诱导EBV-LMP2特异性的细胞免疫,应答水平的高低与免疫剂量有关.