肾癌c-erbB-2免疫原性及临床应用的可行性研究

我们采用树突状细胞激活的杀伤性T淋巴细胞对过继免疫治疗肾癌进行研究。现报告如下。材料与方法　 2 0 0 1年我院行根治性肾切除术的新鲜肾细胞癌组织标本10例 ,其中透明细胞癌 6例、嗜色细胞癌 1例、混合细胞癌 3例 ,术后冻存待检。另取 77例包含有肿瘤和正常组织的肾癌石蜡标本切片行免疫组化检测。中国医学科学院肿瘤研究所免疫室建立的 7株人肾癌细胞系 (RCC MZHQ、RCC SKH、RCC LSL、RCC CCY、RCC WCS、RCC FTL、RCC SuL)。人肾癌细胞系RCC Krause及RCC Rupp Ⅱ为康奈尔大学惠赠 ;人乳腺癌细胞系SK BR 3作为阳…     

肾细胞癌中c-erbB-2表达及其意义

目的子研究c—erbB-2在肾细胞癌中的表达及其与临床分期、病理分型、病理分级和预后的关系。方法 应用免疫组化S-P法分别用鼠抗人c-erbB-2胞内段单克隆抗体(CB11)和鼠抗人c-erbB-2胞外段单克隆抗体(9G6．10)检测77例肾细胞癌及相应癌旁肾组织c—erbB-2蛋白表达。应用RT-PCR方法检测10例新鲜肾癌组织及癌旁正常组织c—erbB-2 mRNA的表达。透明细胞癌、颗粒细胞癌及乳头状肾细胞癌c—erbB-2的表达分别为68．2％、93．1％及75．0％。结果 77例肾癌组织CB11和9G6．10的阳性率分别为61%(47／77)和45．5%(35／77)；二者联合检测总阳性率为77．9％(60／77)。透明细胞癌、颗粒细胞癌及乳头状肾细胞癌c—erbB-2的表达分别为68．9％、92．9％及75%。RT-PCR检测新鲜肾癌组织c—erbB-2mRNA的阳性率为100％(10／10)。结论 肾癌中c—erbB-2蛋白及c—erbB-2mRNA均过表达。不同的肾癌病理类型c—erbB-2蛋白表达不同，颗粒细胞癌表达最高。c—erbB-2在肾癌的不同临床分期均过表达，说明可能在病变的早期c—erbB-2已经发生改变。c-erbB-2的表达与临床分期及肿瘤分级无明显相关性。     

构建人类肾上腺皮质腺癌细胞系并用其验证过继免疫细胞治疗效果

Objective To establish a human adrenocortical carcinoma (ACC)cell line ACC-LWL, and investigate its cell phenotypes and expression of tumor associated antigens, to detect sensitivity of ACC-LWL against adoptive immune cells. Methods Fresh tumor tissues from the resection of a human ACC were primary cultured and passed generation to generation so as to achieve stable growth in vitro. For analyzing its biological characteristic, the cell cloning formation in soft agar, chromosome and tumorigenesis were tested. Flow cytometric analysis was carried out for phenotype analysis and RT-PCR examination for MN/CA9 and HLA-A2 genes expression. PBMC from 4 healthy donors (2 HLA-A2+ or 2 HLA-A3+) co-cultured with IL-2 (200 U/ml)and the tumor cell lysate of ACC-LWL (20 μg/ml) in vitro to generate CTL. After 14 day stimulation, CTLs were incubated with ACC-LWL with a E/T ratio of 10:1 for 4 hours at 37 ℃. Cytotoxicity was measured with MTr assay. Results One human ACC cell line had been established that showed the characteristics of malignant cells. The cells grew a solid tumor in nude mice. ACC-LWL had a high expression of MHC-Ⅰ, weakly expression of Her2/neu and MHC-Ⅱ, no expression of CD80 or CD86. RT-PCR showed that ACC-LWL expressed MN/CA9 and HLA-A2 genes. CTL, either HLA-A2+ or HLA-A3+, had the capability of killing ACC-LWL in vitro. Conclusion This newly established ACC would provide a useful target in vitro and in vivo for investigations related to human ACC.     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

六个人肾癌细胞系的建立及生物学特性的研究

目的　建立人肾癌细胞系 ,研究肾癌细胞表型及其肿瘤相关抗原的表达。　方法　病理证实的 6例肾癌原始新鲜肿瘤组织经体外原代和传代培养至稳定生长 ,检测癌细胞集落形成、染色体及裸鼠体内移植瘤生长 ;免疫荧光染色和流式细胞仪分析细胞系细胞表型 ;RT PCR检测MN/CA9基因表达。　结果　建立的 6个细胞系包括透明细胞型 4个 ,透明 嗜色细胞混合型 1个和乳头状腺癌 1个。 6个细胞系均表现恶性肿瘤细胞的生物学特性。 6个细胞系均高表达HLA ClassⅠ和HER2 /neu分子 ;2个弱表达HLA ClassⅡ ;1个高表达CD86 ;均不表达CD80。 3个细胞系表达MN/CA9基因。　结论　新建立的肾癌细胞系可作为研究人肾癌细胞的生物学特性、肿瘤相关抗原、免疫原性和免疫治疗的体外模型     

环氧化酶-2在肾癌组织中的表达--附65例临床分析

目的:探讨肾癌组织中环氧化酶-2的表达及其意义。方法:回顾性分析65例肾癌患者的病理资料,比较肾癌组织及瘤周正常组织的环氧化酶-2的表达情况。结果:环氧化酶-2在肾癌组织中的表达阳性率为77%,在瘤周正常组织的表达阳性率为4%(P<0.01);环氧化酶-2的表达与肿瘤的TNM分期之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:环氧化酶-2在肾癌中高表达,抑制环氧化酶-2的活性有可能在肾癌的防治中发挥重要的作用。     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

可溶性肿瘤抗原和CD3单克隆抗体共同诱导的杀瘤细胞——T-AK细胞

用可溶性肿瘤抗原和CD3单克隆抗体共同刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生CD8~ T细胞为主的杀瘤细胞,称其为T-AK细胞。与LAK细胞和CD3-AK细胞比较,T-AK细胞扩增快、低依赖IL-2,培养14天细胞数扩增24倍,比CD3-AK细胞高8倍,比LAK细胞高15倍,并能持续生长21天。T-AK细胞中含CD3~ 86％、CD4~ 20％、CD8~ 95％、CD16~ 40％、CD25~ 53％,它们是CD8~ T细胞为主的异质性细胞群。T-AK细胞对刺激它的STA来源的靶细胞高亲和性杀伤,杀伤率>90％,对NK敏感和不敏感细胞也有杀伤,表现非MHC限制杀伤。     

丝裂霉素C不同给药间隔对人类膀胱癌细胞杀伤、生存及耐药性的研究

 【摘要】　目的　研究丝裂霉素C（MMC）不同给药间隔与药物对膀胱癌细胞的杀伤、凋亡及耐药性产生之间的关系。方法　分别间隔24、48、72和96 h，用MMC处理BIU-87细胞， 2 h／次，共5次，MTT法检测细胞毒作用，Western blot分析p53、bcl-2、bax及p170的表达。结果　间隔24、48、72、96 h给药，IC50分别为4.41、0.71、2.83、4.31、6.16 μg／ml；间隔24 h给药，BIU87细胞p53、bcl-2表达明显下调，bcl-2／bax比值显著减小；间隔48、72和96 h给药，p53、bcl-2的表达及bcl-2／bax的比值无明显改变；间隔24 h给药5次，均未见p170表达，间隔48、72、96 h给药，p170表达逐渐增强。结论　MMC的给药间隔与药物对人类膀胱癌细胞的杀伤作用以及癌细胞的凋亡及耐药性的产生密切相关，膀胱内灌注化疗的给药间隔也是影响疗效的重要因素。