柴胡皂苷A 调节cAMP/PKA/CREB 信号通路对失眠大鼠的改善作用及机制研究

目的 基于cAMP/PKA/CREB 通路探讨柴胡皂苷A 对失眠大鼠的改善作用及机制。方法 将75 只SD 大鼠随机分为空白组、模型组、柴胡皂苷A 低剂量组（0.625 mg·kg-1）、柴胡皂苷A 高剂量组（2.500 mg·kg-1）、艾 司唑仑组（0.1 mg·kg-1）,每组15 只。采用腹腔注射苯丙氨酸（PCPA,0.1 mg·kg-1）复制失眠大鼠模型。观察大 鼠一般情况及昼夜节律;采用戊巴比妥钠翻正实验测定大鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间;观测大鼠睡眠时相, 记录慢波睡眠第1 期（SWS1）、慢波睡眠第2 期（SWS2）、快速眼球运动睡眠期（REMS）时长以及总睡眠时长 （TST）;qRT-PCR 法测定下丘脑节律基因Clock、Bmal1 mRNA 及钟控基因Rev-erbα、Rorα mRNA 的表达水 平;免疫荧光法测定海马组织NeuN 表达水平;ELISA 法测定脑组织中的cAMP 水平;Western Blot 法测定脑 组织中Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα 及cAMP/PKA/CREB 通路相关蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模 型组大鼠昼伏夜出的节律紊乱,极度兴奋,易激惹,睡眠减少;睡眠潜伏期明显延长（P＜0.05）,睡眠持续时 间及SWS1、SWS2、REMS、TST 均明显缩短（P＜0.05）;神经元排列紊乱,NeuN 阳性神经元IOD 值明显降低 （P＜0.05）; 脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）; 脑组织 cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。与模型组比较,给药组大鼠的攻击性 明显减弱,昼伏夜出有节律性,活动减少,睡眠增多;睡眠潜伏期明显缩短（P＜0.05）,睡眠持续时间及 SWS1、SWS2、REMS、TST 均明显延长（P＜0.05）;神经元排列紊乱情况有所恢复,NeuN 阳性神经元IOD 值 明显升高（P＜0.05）;脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）;脑 组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。结论 柴胡皂苷A 可能通过激活 cAMP/PKA/CREB 通路改善失眠大鼠的昼夜节律。