D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及快速纯化

目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶（DAAO）的新方法，以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸（GL-7ACA）。方法通过基因工程手段，构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒，电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞，利用PCR方法筛选阳性转化子，再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌（PHD12）摇瓶发酵单位达到2000IU／L，发酵罐内达到22500IU／L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化，以60％的总收率获得纯化产物。纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性。结论利用基因工程表达组氨酸标记蛋白，可简化基因工程的下游工序。     

银芩胶囊抗流感病毒的活性

目的研究银芩胶囊在体内、外的抗流感病毒活性。方法采用噻唑蓝（MTT）比色法检测银芩胶囊对体外模型狗肾细胞（MDCK细胞）的毒性浓度；采用细胞病变效应（CPE）观察法测定银芩胶囊体外抑制流感病毒有效浓度；流感病毒感染动物模型为昆明种小鼠，口服给予银芩胶囊剂量分别为每日1．0、0．3和0．1g／kg，分2次给予，共给药6d，通过观察流感病毒FM1感染小鼠死亡率、生命延长情况及肺病变程度指标判定其抗流感病毒作用。结果银芩胶囊在1．25mg／mL浓度下对MDCK细胞无毒性，在0．6mg／mL浓度下能有效抑制流感凡病毒CPE产生；每日口服1．0、0．3和0．1g／kg银芩胶囊，对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护率分别为40％、20％和5％，生命延长率分别为51．1％、29．1％和23．4％，减轻小鼠肺病变分别为64．3％、56．1％和34．6％。结论银芩胶囊在体内、外均有良好的抗流感病毒活性。     

针药结合治疗老年痴呆伴睡眠障碍临证撷要

睡眠障碍是老年痴呆患者常见并发症之一，同时又会加剧老年痴呆进一步发展，严重降低了患者的生活质量。老年痴呆伴睡眠障碍的病机为本虚标实：肾精亏虚，心神失养为本；痰瘀阻络，神机失用为标。治疗以补肾益髓、养心安神为原则，可予针药结合疗法。针刺选用“安神穴组”，使阴阳和谐相交；中药方选孔圣枕中丹加减以补肾填精、宁心安神，辨证配伍合适的药对，如胆南星-瓜蒌以豁痰开窍、丹参-川芎以活血化瘀等。经临床验证，针药结合可显著改善老年痴呆伴睡眠障碍患者的精神状态与睡眠质量。附验案1则以佐证。