固真方提取液对成骨样细胞内cAMP基础水平及PTH激发水平的影响

固真方(VRF)由何首乌、肉苁蓉等六味中药组成,具有补肾益精、延缓衰老的作用。能显著提高大鼠成骨样细胞甲状旁腺素(PTH)受体的结合率,增进PTH刺激后细胞内C~(2 )释出的反应性,显著促进细胞增殖有关的原癌基因表达、DNA合成以及骨细胞特征性蛋白——碱性磷酸酶的合成。实验用放射免疫分析法(RIA)研究了VRF提取液对成骨样细胞内环磷酸腺苷(cAMP)基础水平及PTH激发水平的影响。1 材料 大鼠成骨样细胞株ROS17/2.8、cAMP抗体及大鼠PTH(1—34)(美国麻省总医院内分泌室转赠);VRF提取液(水提醇沉提取,1ml相当于15g生药,上海中医药大学中药系提供,使用时用无血清F_(12)培养液     

补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用

目的：比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用。方法：采用上述4种不同的含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2Bs细胞株进行处理,通过细胞寿命实验、流式细胞仪、RT—PCR、Westemblot方法研究不同中药对衰老细胞周期及其相关基因(P16^INK4、Cyclin D1及PCNA)的mRNA转录和蛋白表达的影响。结果：补肾、益气中药对衰老细胞周期有一定的促进作用,并可下调衰老细胞增殖抑制基因P16和周期蛋白Cyclin D1的mRNA／蛋白表达;上调细胞周期促进增殖基因PCNAmRNA／蛋白的表达。而健脾、活血中药对细胞周期及其相关基因和蛋白表达的作用不明显。结论：补肾、益气方药对细胞周期有促进作用,其中的作用可能是通过促进P16途径的基因表达来实现。     

固真方对老年大鼠肝脏增殖有关基因表达的影响

中药固真方具有补肾益精、延缓衰老的作用。为了进一步探讨其作用机理,采用NorthernBlot方法研究了固真方对老年大鼠肝组织增殖有关基因——原癌基因(c-fos、c-jun)和β-微管蛋白基因表达的影响。结果显示;老年对照组较青年对照组的表达分别降低了14.5％、85％、90.8%,而老年用药组则较老年对照组的表达分别增高了O.32、5.56、6.09倍。表明固真方的作用与它对原癌基因和β-微管蛋白基因表达的调节有关。     

补肾方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元细胞毒作用的影响

目的:建市Aβ所致的神经细胞毒模型,探讨补肾方的药效及作用机理。方法:原代培养大鼠海马神经元,用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型。采用LDH释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞计判断神经元凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、c-Jun)的蛋白表达。结果:神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞计可见亚二倍体峰;Bcl-2的蛋白表达减少,而Bax与C-Jun表达增加。补肾方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞计显示凋亡率下降,Bcl-2蛋白表达增加,c-Jun表达减少,而Bax表达变化不明显。Tacrine组神经元存活率增加,但其它指标的变化不明显。结论:①补肾方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡。②其作用机制可能是通过提高bcl-2、降低c-Jun基因的蛋白表达而实现。③Tacrine对神经元存活率有提高作用,但抑制神经元凋亡的作用似不明显。补肾方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于Tacrine。     

固真方对老年大鼠肝脏c－myc、c－fos、p53表达的影响

为了进一步探讨固真方延理衰老的分子机理，本文用斑点杂交技术研究了固真方对大鼠肝组织与增殖密切相关的基因──原癌基因（ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ）和抗癌基因ｐ５３表达的影响。结果显示：ａ．ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ的表达老年对照组较青年对照组明显降低（Ｐ＜０．０１）．而老年用药组较老年对照组明显增高（Ｐ＜０．０１）。ｂ．ｐ５３的表达老年对照组与青年对照组及老年用药组与老年对照组之间的变化无统计学意义。     

Aβ诱导海马神经元调亡的机制及补肾方的调控作用

目的 探讨Aβ诱导海马神经元凋亡的机制及补肾方的药效。方法 原代培养的大鼠海马神经元经Aβ1-42处理后,FDA与PI双染判断神经元存活率,Hoechst33258染色、TUNEL检测神经元凋亡,免疫细胞化学观察Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因怕表达。结果 神经元经Aβ1-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase-3表达增加,bcl-2的mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显。补肾方可明显改善上述变化。结论 Aβ通过对凋亡相关基因表达的调控并经Caspase-3途径引起神经元凋亡。补肾方可抑制Aβ诱导调亡。     

补肾方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元细胞毒作用的影响

目的：建立Aβ所致的神经细胞毒模型,探讨补肾方的药效及作用机理。方法：原代培养大鼠海马神经元,用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型。采用LDH释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞计判断神经无凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因（Bcl-2、Bax、c-Jun)的蛋白表达。结果：神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞计可见亚二倍体峰;Bcl-2的蛋白表达减少,而Bax与c-Jun表达增加。补肾方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞计显示凋亡率下降,Bcl-2蛋白表达增加,c-Jun表达减少,而Bax表达变化不明显。Tacrine组神经元存活率增加,但其它指标的变化不明显。结论：（1）补肾方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存在活率,抑制凋亡。（2）其作用机制可能是通过提高bcl-2、降低c-Jun基因的蛋白表达而实现。（3）Tacrine对神经元存活率有提高作用,但抑制神经元凋亡的作用似不明显。补肾方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于Tacrine。     

固真方对老年大鼠肝脏c—myc,c—fos,p53表达的影响

为了进一步探讨固真方延缓衰老的分子机理，本文用斑点杂交技术研究了固真方对大鼠肝组织与增殖密切相关的基因－原癌基因和抗癌基因Ｐ５３表达的影响。结果显示：ａ．ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ的表达老年对照组较青年对照组明显降低，而老年用药粗较老年对照组明显增高。ｂ．ｐ５３的表达老年对照朋与青年对照组及老年用药组与老年对照组之间的变化无统计学意义。     

补肾健脾方药对老年大鼠肝脏衰老有关基因表达的影响

目的：比较补肾、健脾方药对老年大鼠肝脏衰老有关基因表达的调控作用。方法：以自然衰老大鼠为衰老模型,随机分为老年对照组、老年补肾组、老年健脾组,并设青年大鼠对照组。予药物干预4个月后,采用RT-PCR和Western blot方法检测大鼠肝脏抑癌基因p16、抑癌基因p21、细胞周期素D1（Cyclin D1）、增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期素E（CyclinE） mRNA转录和蛋白的表达。结果：老年大鼠肝脏p16、p21和Cyclin D1 mRNA/蛋白的表达明显增高,而PCNA和Cyclin E mRNA/蛋白的表达明显降低。补肾方药可明显下调肝脏p16和Cyclin D1,上调PCNA和Cyclin E基因mRNA与蛋白的表达;健脾方药能明显下调肝脏Cyclin D1,上调PCNA和Cyclin E基因mRNA与蛋白表达,但对p16作用不明显。结论：补肾、健脾方药均能不同程度调控肝脏衰老有关基因表达,促进老年大鼠肝细胞增殖,但补肾方药作用似更明显。     

调心、补肾方对β淀粉样蛋白神经毒模型神经元存活率及突触小泡蛋白表达的影响

目的：研究调心方和补肾方对Aβ1－42所致神经毒模型海马神经元存活率和突触小泡蛋白表达的影响。方法：原代培养大鼠海马神经元,用25μmol/L聚集状态的Aβ1－42建立神经细胞毒模型。采用FDA与PI双染后细胞计数、LDH释放量来检测神经元存活率,应用免疫细胞化学法研究突触小泡蛋白的蛋白表达。结果：神经元经Aβ1－42处理后,活细胞数减少,LDH释放增加,突触小泡蛋白表达减少。调心方、补肾方使活细胞数提高,LDH释放减少,突触小泡蛋白表达回升。Tacrine使神经元存活率增加,但突触小泡蛋白表达的变化不明显。结论：调心方与补肾方对Aβ1－42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,使突触小泡蛋白表达回升,但两方作用无显差异。Tacrine对神经元存活率有提高作用,但提高突触小泡蛋白表达的作用不明显。