凋亡细胞原位末端标记法技术在检测大鼠耳蜗组织细胞凋亡中的应用

近年来 ,随着分子生物学、细胞生物学等的发展 ,凋亡检测技术有了很大提高。原位凋亡检测 ,特别是末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术 ,由于能在组织原位同时显示凋亡细胞形态和分布 ,且具有简便、快捷、敏感、无辐射等优点 ,因而得到了广泛应用。但在耳蜗的新鲜骨组织脱钙后应用TUNEL法检测凋亡细胞 ,尚少见报道。材料与方法1.标本及处理 :雄性Wistar大鼠 30只 ,由本院所实验动物中心提供 ,处死后取耳蜗组织 ,40g L多聚甲醛缓冲液(pH7.4)固定 8～ 12h ,10 0g L乙二胺四乙酸钠 (EDTA) +微波 75 0W、10…     

自体肿瘤疫苗治疗结直肠癌72例分析

近年来自体肿瘤疫苗主动特异性免疫治疗已成为预防和治疗恶性肿瘤复发和转移的一种新的有效手段[1]。自1996年开展该项目以来,我们已成功应用该技术治疗各类恶性肿瘤共381例,其中结直肠癌72例,现报告如下。1资料和方法1.1一般资料1996-1999年大坪医院行结直肠癌根治性切除的患者共198例。治疗组72例加用了自体肿瘤疫苗治疗,男性47例,女性25例,年龄41～65岁,平均53.5岁,其中高、中及低分化腺癌各为19、31及22例。单纯手术组126例仅行常规治疗。1.2自体肿瘤疫苗的制备将切除的肿瘤标本放入含50μg/ml庆大霉素的生理盐水中,无菌条件下快速送至…     

EphB4反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移的作用

目的观察EphB4反义寡核苷酸(ASODN)对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响,探讨EphB4的生物学功能。方法人工合成EphB4 ASODN,脂质体转染U87细胞。分别应用RT-PCR以及免疫组织化学染色方法检测EphB4 mRNA和蛋白质,评估阻抑效应;并应用MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡;采用Boyden侵袭小室法检测细胞迁移和侵袭力。结果(1)由脂质体转染的EphB4 ASODN对U87细胞EphB4 mRNA和蛋白质表达具有不同程度的抑制作用,且呈现一定的时间-剂量依赖性,600nmol/LASODN作用于U87细胞72h,EphB4 mRNA相对表达量为0.30±0.05,EphB4蛋白表达水平亦明显减弱。(2)各实验组EphB4 ASODN对U87细胞增殖均具有抑制作用,呈明显时间-剂量依赖性;以600nmol/LASODN作用72h,U87细胞生长抑制率达到68.70%,而对照组则无明显抑制作用。(3)EphB4 ASODN诱导U87细胞凋亡呈剂量依赖性。(4)EphB4 ASODN组U87细胞的跨膜数为17.82±2.35,与空白对照组及NSODN组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论EphB4在人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭过程中发挥重要作用,可能成为脑胶质瘤基因治疗的一个新靶点。     

Relationship between expression of cathepsin D and proliferating cell nuclear antigen and prognosis in osteosarcoma

The control of both progression and metastasis inmalignant tllmors is important for the prognosis of patients. Therefore, the mechanism by which malignantcells invade and metastasize to other tissues requiresfurther elucidation. Lots of investigations have suggested that some proteases can degrade extracellularmatrices, and thus contribute to the invasive ormetastatic activities of tumor cells. Cathepsin D(Cath-D) is an estrogen-regUlated lysosomal proteasethat may be over-expressed in breas…     

骨肉瘤iNOS过度表达与血管生成及预后的关系

目的 探讨骨肉瘤中诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表达及其与血管生成和预后的关系。方法 应用免疫组化方法检测８０例骨肉瘤标本ｉＮＯＳ的表达,ＦⅧ－ＲＡ和ＣＤ３１免疫组化染色显示肿瘤内微血管密度。结果 ８０例骨肉瘤中５２例ｉＮＯＳ阳性（６５％）,肿瘤细胞境质中的巨噬细胞和部分血管内皮细胞均为阳性。ｉＮＯＳ阳性表达和肿瘤内微血管密度（ＭＶＤ）显著正相关,而且ｉＮＯＳ阳性组病人生成率显著低于ｉＮＯＳ阴性     

EphrinB2及其受体EphB4在脑胶质瘤组织中的表达及与血管生成的关系

目的 :探讨ephrinB2及其受体EphB4在脑星形胶质瘤中的表达规律 ,评价它们在脑胶质瘤发生、发展以及肿瘤血管生成中的作用。方法 :采用免疫组化SP法检测 85例各级脑胶质瘤组织中EphB4、ephrinB2及CD3 4 等蛋白表达 ,根据CD3 4 染色结果计数微血管密度。结果 :EphB4及ephrinB2的蛋白表达定位于肿瘤细胞或血管内皮细胞胞质 ,呈异质性分布 ;两种蛋白在Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤中的表达均明显高于Ⅰ、Ⅱ级肿瘤 ,P <0 0 5。EphB4( )和ephrinB2 ( )病例的MVD分别为 5 7 3 2±16 4和 65 2 5± 19 4,均显著高于相应的EphB4、ephrinB2弱阳性及阴性病例 (分别为3 5 2 3± 13 7和 3 1 12± 11 6) ,P <0 0 5。结论 :EphB4/ephrinB2在脑胶质瘤发生、演进过程中起着重要作用 ,并与肿瘤血管生成密切相关。     

DNA损伤修复基因APE1在骨肉瘤中的表达及其与血管生成的关系

目的探讨DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apuinic/apyrimid-ic endonuclease,APE1)在骨肉瘤中的表达及其与肿瘤发生、发展以及血管生成的关系。方法免疫组化SP法检测三种骨肉瘤细胞株(HOS、U-2OS、Sa-OS-2)、10例正常骨、10例良性骨瘤和60例骨肉瘤组织中APE1蛋白表达,并根据CD34和FⅧ-Rag染色结果计数微血管密度(microvessel densi-ty,MVD)。结果1)APE1蛋白在三种骨肉瘤细胞株呈强阳性表达,主要定位于肿瘤细胞的胞核,60例骨肉瘤组织中43例(72%)呈高表达,17例呈低表达,且显著高于正常骨及良性骨瘤,χ2=30·997,P=0·000。2)APE1表达的程度和预后密切相关。3)APE1强表达组中的瘤内MVD为46·4±26·7,显著高于弱表达组的33·3±20·7,t=2·277,P=0·030。结论APE1在骨肉瘤中过度表达与骨肉瘤分化以及MVD密切相关,有可能作为骨肉瘤抗血管生成治疗中一个新的靶向分子。     

pSilence APE1提高骨肉瘤放疗敏感性的动物实验研究

目的:观察APE1 siRNA表达载体pSilence APE1基因放射治疗对骨肉瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:人骨肉瘤细胞9901荷瘤裸鼠30只随机分为3组:对照组、单独放射治疗组和pSilence APE1 放疗联合治疗组。实验治疗第15天处死动物,绘制肿瘤生长曲线,免疫组化SP法检测骨肉瘤细胞APE1蛋白的表达、骨肉瘤细胞的微血管密度和TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果:pSilence APE1 放疗联合治疗组和对照组、单独放射治疗组的肿瘤大小存在显著性差异(P<0.05)。pSilence APE1 放疗联合治疗组肿瘤组织APE1表达显著降低;pSilence APE1 放疗联合治疗组肿瘤微血管密度明显低于对照组和单独放射治疗组(P<0.01),而肿瘤细胞凋亡显著增加(P<0.01)。结论:实验结果表明,pSilence APE1基因放射治疗能显著抑制骨肉瘤的生长。     

APE1在DEN诱导大鼠肝细胞癌形成过程中作用的研究

目的：研究DNA损伤修复关键酶脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶（apurinic／apyfimidinic endonuclease 1 Aepl）在大鼠肝细胞癌形成过程的动态变化，初步探讨Apel与肝细胞癌发生、发展的关系。方法：采用改良法建立二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN）诱发大鼠原发性肝癌模型应用免疫组化sP法检测Apel和PCNA在不同诱癌阶段的表达情况。结果：正常大鼠肝脏组织中Apel呈胞核高表达，在不同诱癌阶段的肝脏组织中Apel表达特征有所改变，呈核浆共同表达或、单纯胞浆表达；随着诱癌时间的延长FCNA表达逐渐增加。结论：在DEN诱导大鼠肝细胞癌模型的过程的同时Apel具有表达由核内转向浆内的特征，提示核内DNA损伤修复减少导致基因突变增加，可能是肝细胞癌发生、发展的重要机制之一。     

骨肉瘤微血管密度与nm23-H1、PCNA 表达及预后的关系

目的研究骨肉瘤微血管密度与转移抑制基因nm23-H1表达、增殖细胞核抗原(PCNA)指数相关性及其病人预后的关系.方法应用免疫组化方法检测80例骨肉瘤微血管密度(MVD),以及nm23-H1表达和PCNA指数,并应用Cox模型分析其与预后的关系.结果MVD与nm23-H1表达呈负相关,而与PCNA指数呈正相关.Cox模型多因素分析显示MVD、nm23-H1和PCNA均为影响骨肉瘤预后的重要因素.MVD低值组比高值组预后好(P＜0.05).在MVD高值组中,nm23-H1高表达组比低表达组预后亦较好(P＜0.05).结论微血管密度可能是骨肉瘤转移的必要条件,而非充分条件,它与nm23-H1和PCNA相互作用,共同影响骨肉瘤的转移和预后.