液相色谱-串联质谱法检测人血浆中碘帕醇

目的建立一种稳定的检测人血浆碘帕醇的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),并对该方法进行性能评价。方法以氘代同位素作为内标,人血浆样品经直接沉淀法前处理后进样,用XSelect^TM HSS PFP色谱柱进行分离,用含0.1%甲酸-5mmol/L九氟戊酸-10%乙腈的水溶液等度洗脱;正离子电喷雾离子化扫描检测,多反应监测(MRM)扫描分析,建立检测血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。根据CLSI EP10-A和CLSI C62-A,评价该方法的线性范围、正确度、精密度、选择性、基质效应、稳定性。结果 LC-MS/MS检测血浆碘帕醇的线性范围为1～1 000μgI/mL(以含碘量计算);低、中、高浓度(3、50、800μgI/mL)血浆质控品检测结果与理论靶值的偏移为-6.1%～7.5%,重复性以不精密度表示,CV<6.6%(4.6%～6.6%),期间精密度CV<8.5%(6.6%～8.5%),方法回收率为92.5%～95.9%,基质效应为88.8%～95.2%;方法选择性良好,溶血和脂血因素均不影响检测结果。血浆样品在室温下放置最好不要超过48 h,在-80℃下反复冻融不超过2次,经前处理后的血浆样品4℃自动进样器中放置不超过72 h,碘帕醇可稳定检测。结论建立并评价了一种可靠的检测人血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。     

Crybb2基因敲除对小鼠晶状体自噬的影响

目的：研究beta-B2晶状体蛋白(CRYBB2)缺失对小鼠晶状体自噬的影响。

方法：取6月龄野生型(WT)和Crybb2基因敲除型(Crybb2 ^KO)小鼠各6只,取晶状体组织,透射电子显微镜观察各组小鼠晶状体组织自噬的改变,用Western blot法检测两组小鼠自噬相关蛋白的相对表达量。

结果：透射电子显微镜下观察发现,与WT小鼠相比,Crybb2^KO小鼠晶状体核区线粒体累积明显,皮质区自噬小体数量增多。Western blot结果显示,Crybb2^KO小鼠晶状体组织LC3B表达显著低于WT小鼠(0.09±0.01 vs 0.26±0.05),P62及p-mTOR表达(0.64±0.09和0.41±0.03)显著高于WT小鼠(0.43±0.07和0.27±0.02)。

结论：CRYBB2晶状体蛋白缺失会影响晶状体自噬,其机制可能与mTOR信号通路的自噬相关,最终导致白内障产生。     

子痫前期患者血清12-羟基二十碳四烯酸浓度变化及其对血管内皮细胞凋亡的影响

目的观测子痫前期患者血清12-羟基二十碳四烯酸（12-HETE）浓度变化及对绒毛膜外滋养细胞诱导血管内皮细胞凋亡的影响,探讨12-HETE参与在子痫前期发生、发展的可能机制。方法收集2019年6月至2020年6月复旦大学附属中山医院吴淞医院子痫前期患者临床症状出现前26例和出现后23例,以及与之孕周、年龄及BMI相匹配的正常孕妇26例及正常未孕妇女14例血清样本,利用超高压液相色谱串联质谱仪（UPLC-MS）检测各组血清12-HETE浓度;建立人血管内皮细胞的单培养及其与胎盘滋养细胞HTR-8/Snveo的共培养模型,分为正常对照组、12-HETE处理组、共培养对照组、共培养12-HETE处理组。采用流式细胞术检测各组细胞血管内皮细胞的凋亡情况,计算凋亡率。结果12-HETE的保留时间为3.33min,母离子碎片为319.33m/z,离子碎片为179.22m/z,在20~2000pg/ml的线性范围内,相关系数r2=0.99,能够满足样本检测需求。子痫前期患者临床症状出现前、后12-HETE浓度均高于正常孕妇组和正常未孕妇女组（均P＜0.01）。血管内皮细胞单培养中,12-HETE处理组细胞凋亡率显著低于正常对照组（P＜0.01）;共培养对照组血管内皮细胞的凋亡率显著高于正常对照组（P＜0.01）;共培养12-HETE处理组血管内皮细胞的凋亡率显著低于共培养对照组（P＜0.01）。结论子痫前期患者临床症状出现前后外周血中12-HETE浓度均显著升高,其可能通过抑制血管内皮细胞凋亡参与子痫前期的发生、发展。