TAO患者~(99)Tc~m-生长抑素类似物眼眶显像的应用价值

目的 探讨99Tcm-生长抑素类似物眼眶显像在诊断甲状腺相关性眼病(TAO)是否处于炎症活动期中的应用价值.方法 采用临床活动度评分(CAS)标准,将36例TAO患者分为活动组与非活动组,均行99Tcm-生长抑素类似物眼眶显像,并计算出其眼眶生长抑素类似物摄取比值(UR). 结果 两组眼眶生长抑素类似物UR均数分别为1.48±0.16与1.09±0.21;活动组UR值显著高于非活动组(t=6.122 4,P<0.001). 结论 99Tcm-生长抑素类似物眼眶显像在判断TAO是否处于炎症反应活动期具有很高的诊断价值.     

胃饥饿素通过抑制内质网应激减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡

目的 研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响。方法 将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组。对照组细胞不加干预，高糖组采用30 mmol/L葡萄糖构建细胞损伤模型，高糖+ghrelin组采用30 mmol/L葡萄糖和10 nmol/L ghrelin处理细胞，高糖+ghrelin+衣霉素组采用30 mmol/L葡萄糖、10 nmol/L ghrelin和10μmol/L衣霉素联合处理细胞，所有细胞均培养48 h。采用AnnexinⅤ-FITC/7-AAD试剂盒检测4组细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测对照组、高糖组和高糖+ghrelin组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激蛋白GPR78、IRE1α的表达。结果 与对照组比较，高糖组HRMECs细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与高糖组相比，高糖+ghrelin组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较，高糖组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达明显增加(均P&...     

自噬在高糖条件下视网膜色素上皮细胞表达血管内皮生长因子促进RF/6A细胞血管生成中的作用

目的　研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株（ARPE-19）自噬对其表达血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞（RF/6A）迁移和管腔形成的影响。方法　根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤（3-MA）+高糖组。对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24 h，高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h，3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L^-1 3-MA处理24 h，然后更换培养基再加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h。Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1 轻链 3（microtubule-related protein 1 light chain 3，LC3）II型和I型的比值(LC3-II/LC3-I)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3（autophagy-related gene 3，Atg3）的蛋白表达。ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达。比较三组ARPE-19细胞LC3-II/LC3-I、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量。然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中，将RF/6A细胞也按以上方法分组，分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数。结果　对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/LC3-I比值分别为0.405±0.095、0.932±0.024和0.635±0.048；Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.205±0.035、0.590±0.120和0.425±0.082；Atg3蛋白相对表达量分别为0.277±0.035、0.539±0.071和0.389±0.019。ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达量三组分别为（44.03±9.08）ng·L^-1、（205.70±17.90）ng·L^-1和（112.52±21.06）ng·L^-1；RF/6A细胞迁移数三组分别为（125.60±6.35）个、（153.60±19.20）个和（67.40±7.95）个；细胞管腔形成数三组分别为（12.22±0.84）个、（18.44±1.68）个和（5.44±0.51）个；整体比较差异均有统计学意义（均为P<0.01）。与对照组相比，高糖组ARPE-19细胞的LC3-II/LC3-I比值、Beclin-1及Atg3蛋白相对表达量均明显增加（均为P<0.01），VEGF表达水平均明显升高（P<0.01），RF/6A细胞迁移数和管腔形成数均明显增加（均为P<0.01），3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/I比值、Beclin-1和Atg3蛋白相对表达量、VEGF表达量、RF/6A细胞迁移数和细胞管腔形成数均较高糖组明显降低（均为P<0.01）。结论　高糖激活ARPE-19细胞自噬，进而上调VEGF的表达并促进RF/6A细胞迁移和管腔形成，自噬抑制剂3-MA可抑制ARPE-19细胞自噬，并下调VEGF的表达从而抑制RF/6A细胞的血管形成能力。     

脂联素预处理对高糖诱导下HRMECs细胞损伤的保护

目的 观察脂联素(adiponectin, APN)预处理对高糖诱导下人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)凋亡及增殖的影响。方法 将生长状况良好的HRMECs随机分为对照组(DMEM培养基,无干预)、高糖组(DMEM培养基+25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+APN组(细胞先用10μg/ml APN预处理2 h,然后用高糖培养基培养)。各组分别培养24 h后,Western blot检测HRMECs凋亡过程中Bax、Bcl-2以及Caspase-3的蛋白表达水平,流式检测HRMECs凋亡率,CCK-8法检测HRMECs增殖。结果 与对照组比较,高糖组HRMECs的Bax、Caspase-3蛋白水平以及细胞凋亡率均明显增高,但Bcl-2的表达量及细胞增殖率均明显降低(均P<0.001)。与高糖组比较,高糖+APN组HRMECs的Bax、Caspase-3蛋白水平以及细胞凋亡率有所回落,Bcl-2的蛋白水平及细胞增殖率有所回升(均P<0.001)。结论 高糖诱导下HRMECs凋亡增加,增殖减少,APN预处理可以抑制凋亡,促进增殖,提示APN对高糖下视网膜微血管内皮细胞损伤...     

G补缀FHA域血管生成因子1在糖尿病视网膜新生血管形成中的作用

目的：观察G补缀FHA域血管生成因子1(AGGF1)在糖尿病视网膜组织及高糖条件下视网膜血管内皮细胞中的表达,以及AGGF1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。

方法：将C57BL/6J小鼠随机分为对照组和糖尿病视网膜病变(DR)模型组,采用免疫组化法检测视网膜组织中AGGF1的蛋白表达。将体外培养的恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)随机分为对照组(低糖环境培养)和高糖组(培养基中加入25mmol/L D-葡萄糖),采用免疫荧光法检测细胞中AGGF1的蛋白表达。然后将RF/6A细胞分为对照组和AGGF1处理组,分别采用CCK-8法、Transwell法和Matrigel检测细胞增殖、迁移及管腔形成。

结果：AGGF1蛋白在视网膜各层均有表达,在血管内皮细胞中也有明显表达,AGGF1在DR组视网膜中的表达(0.17±0.05)明显强于对照组(0.07±0.02)(P<0.05)。AGGF1蛋白在高糖组和对照组RF/6A细胞中均有表达,AGGF1在高糖下RF/6A细胞中的表达(0.63±0.10)明显强于对照组(0.40±0.03)(P<0.05)。处理12h,AGGF1组细胞增殖率(114.88%±0.84%)明显高于对照组(100.00%±2.17%)(P<0.05); 处理24h,AGGF1组细胞增殖率(157.35%±1.89%)明显高于对照组(142.77%±0.50%)(P<0.05); 处理48h,AGGF1组细胞增殖率(185.39%±1.90%)明显高于对照组(160.17%±1.33%)(P<0.05)。处理12h,AGGF1组细胞迁移数(127.00±7.00个)明显多于对照组(90.33±6.66个)(P<0.05)。处理12h,AGGF1组细胞管腔数(33.67±1.15个)明显多于对照组(15.33±3.51个)(P<0.05); AGGF1组细胞分支总长度(8226.33±288.55μm)明显多于对照组(6463.33±938.01μm)(P<0.05)。

结论：糖尿病视网膜组织和高糖诱导的视网膜血管内皮细胞表达AGGF1蛋白明显增多,AGGF1可促进视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成,提示AGGF1可能参与了DR的视网膜新生血管形成。     

血清脂质运载蛋白2在小鼠视网膜血管内皮细胞血管生成中的作用

目的：观察脂质运载蛋白2(lipocalin-2, LCN-2)对体外培养的小鼠视网膜内皮细胞(retinal vascular endothelial cells, RVECs)增殖、迁移和管腔形成的影响及其在视网膜新生血管中的作用。

方法：取生长状况良好的RVECs分为不同浓度组：分别以0、5、10μmol/L LCN-2作用细胞48h。采用EdU法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移,Matrigel法检测管腔形成。

结果：不同浓度LCN-2作用的细胞增殖率大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度LCN-2组RVECs细胞迁移数目多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度LCN-2组细胞管腔形成数明显多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且细胞增殖、迁移和管腔形成均随着LCN-2浓度的升高而增加。

结论：LCN-2能够明显促进RVECs的血管生成过程,提示LCN-2是一种重要的促视网膜新生血管形成的因子。     

ghrelin-GHSR-1a对高糖环境下视网膜血管内皮细胞的保护作用

目的 观察ghrelin及其受体生长激素分泌素受体1a(GHSR-1a)在高糖环境下对视网膜血管内皮细胞的保护作用.方法 将体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)分为对照组和高浓度葡萄糖组.对照组细胞在含5.5 mmol·L-1葡萄糖的M199培养基中培养48 h,高浓度葡萄糖组细胞在含30.0 mmol·L-...     

甲状腺相关性眼病眶部99Tcm-生长抑素类似物受体显像与CAS评分的相关性研究

目的 探讨甲状腺相关性眼病患者99Tcm-生长抑素类似物眼眶显像与CAS评分的相关性.方法 采用临床活动度评分(CAS)标准,对62例TAO患者分别评分并根据评分结果分为活动组与非活动组,12例健康志愿者作为对照组,对所有患者及健康志愿者行99Tcm-生长抑素类似物眼眶显像,并计算出其眼眶生长抑素类似物摄取比值(UR).结果 3组眼眶生长抑素类似物UR均数分别为1.50±0.25,1.08±0.42及1.07±0.20;活动组与非活动组CAS分值分别为5.17±0.48及1.58±0.86;活动组UR值均高于非活动组和正常对照组(P<0.01);非活动组UR值与正常对照组相比,差异无显著性(P>0.05);全部患者UR值与其CAS评分具有很好的相关性(r=0.872);活动组与非活动组UR值与其CAS评分也有较好的相关性(r=0.789,0.758).结论 99Tcm-生长抑素类似物眼眶显像在诊断TAO是否处于炎症反应活动期具有很高的应用价值;99Tcm-生长抑素类似物眼眶显像与CAS评分高度相关,有良好的一致性,且更客观、直观.     

高糖诱导的视网膜新生血管形成中NLRP3炎症小体与自噬的关系研究

目的　探讨在高糖诱导的视网膜新生血管形成过程中,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3）炎症小体与自噬之间的关系。方法　根据不同干预方式将人视网膜微血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelial cells,HRMEC）随机分为三组:高糖组、3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）＋高糖组、CY-09+高糖组。高糖组在M199培养基中加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理48 h;3-MA+高糖组和CY-09+高糖组分别先用5 mmol·L^-1的3-MA和10 mmol·L^-1的CY-09处理2 h,然后更换培养基再加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理48 h。分别采用MTT、Transwell及Matrigel法检测细胞活力、细胞迁移和管腔形成情况,比较三组细胞活力、细胞迁移数和管腔形成数;采用Western blot法检测三组细胞NLRP3炎症小体信号通路的关键蛋白NLRP3、凋亡相关颗粒样蛋白（ASC）、Caspase-1及自噬标志性蛋白LC3-II、LC3-I、Beclin-1的表达并对比;采用Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染细胞观察自噬流的情况。结果　高糖组、3-MA+高糖组、CY-09+高糖组HRMEC细胞活力分别为（153.56±1.46）%、（115.33±3.26）%和（116.10±1.66）%,细胞迁移数分别为（117.33±7.23）个、（70.00±2.00）个和（71.67±2.52）个,细胞管腔形成数分别为（88.33±2.08）个、（61.33±1.53）个和（62.00±3.00）个。与高糖组相比,3-MA+高糖组及CY-09+高糖组HRMEC的细胞活力、细胞迁移数和管腔形成数均明显减少（均为P<0.001）,而3-MA+高糖组与CY-09+高糖组间差异均无统计学意义（均为P>0.05)。与高糖组相比,3-MA+高糖组及CY-09+高糖组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、Beclin-1的蛋白相对表达量和LC3-II/LC3-I比值均明显降低（均为P<0.05）,细胞内自噬流明显减弱。结论　抑制NLRP3炎症小体与自噬均可有效抑制高糖诱导的视网膜新生血管形成,且二者在其中可能发挥相互正向调控的作用。     

球旁注射曲安奈德治疗甲状腺相关性眼病的临床观察

目的评价球旁注射曲安奈德治疗甲状腺相关性眼病(TAO)的疗效。方法TAO患者54例(108眼)均给予球旁注射曲安奈德,每3周1次注射曲安奈德20 mg,每周2次观测眼压,随访4个月,以眼球突出度、CAS评分和Graves征作为疗效判定的3个指标。结果治疗前后眼球突出度值分别为(17.856±0.201)mm、(16.167±0.229)mm,有显著性差异(t=5.535,P<0.001);治疗前后CAS评分值分别为(5.57±0.160)分、(2.09±0.113)分,有显著性差异(t=17.779,P<0.001);治疗前后Graves征阳性率分别为82%,22%,有显著性差异(2=37.978,P<0.001)。治疗前后眼压值分别为(16.42±1.53)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)、(15.78±2.15)mmHg,眼压无增高。结论球旁注射曲安奈德是治疗TAO的一种安全有效的方法。