肠道病毒71型山东临沂分离株全基因组序列分析

目的 自1例死亡患儿的标本中分离EV71,并分析其全基因组序列特点,研究其基因序列的改变是否与其神经毒力有关.方法 咽拭子标本采自山东临沂市人民医院1例死亡患儿,在人横纹肌瘤细胞(RD)上分离EV71,分段扩增获得EV71的全序列,用BLAST、Bioedit和MEGA 4进行序列分析.结果 获得1株EV71分离株SDLY107,基因组全长7405 bp,全基因组核苷酸序列与2008年的阜阳株Fuyang.Anhui.P.R.C/17.08/2同源性最高,为98.6%,与原型株BrCr/70的同源性为80.0%,与神经毒型株MS/87的同源性为86.5%.系统进化分析表明,SDLY107与中国大陆的北京株、河南株、广西株、深圳株、兰州株、阜阳株、重庆株、浙江株的亲缘关系较近,按照传统的VP1基因分型方法,可归为C4亚型,是近年来我国大陆流行的主要基因亚型.氨基酸序列分析发现,SDLY107与其他毒株相比,有2个特有的突变(E947D,K1873R).结论 SDLY107分离株属于C4亚型,氨基酸突变E947D和K1873R可能与EV71的致病性有关.

Abstract：

Objective To isolate enterovirus 71 from a death children,and analyze whether the neurovirulence was related to the variation of nucleotide and amino acid. Methods Enterovirus 71 was isolated from throat swabs which were colleted from Shandong Linyi People's Hospital. The full length genome was sequenced by amplification with RT-PCR and sequencing of 9 overlapped gene fragments covering full length of the genomes. The nucleotide and amino acid sequenced was aligned by BLAST, Bioedit and MEGA 4. Results A strain of enterovirus 71 was isolated and named as SDLY107. The full length was 7405 bp. The results of homology analysis of overall nucleotide sequence showed that strain Fuyang. Anhui. P. R. C/17.08/2 had highest homology (98.6%)with strain SDLY107, and the homology was 80.0% between strain SDLY107 with prototype strain BrCr/70,and 86. 5% between strain SDLY107 with nerve strain MS/87. Phylogenetic analysis showed that the phylogeny was close between SDLY107 with some isolated strains from Chinese Mainland, such as Beijing, Henan, Guangxi, Sbenzhen, Lanzhou, Fuyang, Chongqing and Zhejiang strains, which was clustered for C4 subtype. The results of amino acid sequence analysis showed that there were 2 mutations, E947D and K1873R, for strain SDLY107. Conclusion SDLY107 belonged to C4 subtype, amino acid mutations E947D and K1873R of which may be relevant to the pathogenicity of EV71.     

用直接投入增菌法进行药品包装材料控制菌检查的探索性研究

目的:对复合膜、硬片、铝箔、瓶盖、垫片、干燥剂等药品包装材料构建微生物限度检查-控制菌检查的新方法,为加强药品包装材料的微生物质量控制提供一种检测新思路.方法:分别取代表性复合膜、硬片、铝箔、瓶盖、垫片、干燥剂样品,用代表性菌株制备人工污染样品,采用国家药品包装材料标准规定的方法(以下简称供试液增菌法)以及本研究建立的...     

传统型血袋无菌检测新技术研究

目的:建立传统型血袋无菌检查新方法.方法:以传统型血袋为研究对象,采用"培养基冲洗法""培养基灌装法"2种新的无菌检查方法和传统薄膜过滤法进行方法适用性试验,以确定所设计方法对该产品的适用性;另选取萎缩芽孢杆菌(ATCC 9372)作为代表性菌株污染血袋,选取4个稀释梯度,进行3种方法的检出率对比研究以得到最优的无菌检...     

一种消毒连接器对无针输液接头的消毒效果研究

目的 研究一种消毒连接器对无针输液接头的消毒效果.方法 采用悬液定量杀菌试验方法和模拟现场消毒试验方法,对某消毒连接器的消毒效果进行评价.结果 消毒连接器中浸有浓度为70％异丙醇,用其挤出液对悬液内表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和白色念珠菌作用3 min,平均杀灭对数值均＞5.00.将上述各试验...     

抗菌敷料抗菌功效体外评价研究

目的：评价抗菌敷料的体外抗菌功效。方法：本研究基于模拟临床创面微生物的实际生长状态,构建体外创面模型并建立抗菌敷料抗菌功效评价方法,用以评价抗菌敷料对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌和白色念珠菌的体外抗菌功效。结果：试验样品在12 h内抑制了金黄色葡萄球菌的增殖,在72 h内杀灭对数值未超过1.00;在24 h对铜绿假单胞菌的杀灭对数值达到4.24,随后大幅下降, 在72 h的杀灭对数值降为0.37;在12 h对大肠杆菌的杀灭对数值达到4.10,在其后至72 h内杀灭对数值均大于3.00;在12 h对白色念珠菌的杀灭对数值达到1.11,在72 h的杀灭对数值仅为0.04。结论：该抗菌敷料对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌和白色念珠菌均显示了抗菌效果,其中对铜绿假单胞菌、大肠杆菌的抗菌功效要好于金黄色葡萄球菌和白色念珠菌。     

中国和欧盟医用外科口罩细菌检测方法对回收率的影响

 目的 明确我国和欧盟医用外科口罩细菌检测方法回收率的差异。方法 采用微生物回收的方法对中国《医用外科口罩(YY 0469-2011)》和欧盟《医用口罩要求和试验方法(EN 14683-2019)》中的检测方法回收率进行对比分析,并探索两种方法中最优方法的环节。结果 EN 14683-2019检测方法回收率高达65.1%,高于YY 0469-2011标准近4倍;洗脱方式为机械振摇,洗脱效果不如手动振摇法(回收率为68.6%);EN 14683-2019的可接受标准严于YY 0469-2011的可接受标准。结论 EN 14683-2019的洗脱液中含有表面活性成分(吐温20),提高了检测方法的回收率;YY 0469-2011方法中手动振摇的洗脱方式对微生物的洗脱效果要优于EN 14683-2019方法中的机械振摇法。     

BALB/c鼠脾脏T淋巴细胞体外转化试验条件的优化研究

为了探索BALB/c鼠脾脏T淋巴细胞转化试验的最佳培养条件,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法,对脾细胞浓度和刀豆蛋白A(ConA)的浓度两个参数进行研究。结果表明,在本次实验条件下,采用5×105个/ml细胞、2.5μg/ml的ConA可获得最大的吸光度(A)值,两个因素间存在明显的交互效应。     

具药天然胶乳橡胶避孕套的细胞毒性试验

目的研究具药天然胶乳橡胶避孕套的细胞毒性。方法遵照ISO10993医疗器械生物学评价国际标准的试验原则,采用国际标准的试验方法,在此基础上进一步定量化,更精确的反应了产品的细胞毒性。结果及结论具药天然胶乳橡胶避孕套在浸提液浓度大于1.5cm2.ml-1时具有重度细胞毒性。在浸提液浓度小于等于1cm2.ml-1时具有极轻的细胞毒性反应。     

肠道病毒71型山东临沂分离株3D区遗传进化分析

目的 构建肠道病毒71型(EV71)山东临沂分离株3D区的系统进化树,进行遗传进化分析,探讨3D区与神经毒力的关系.方法 于2009-2010年在山东省临沂市人民医院采集手足口病(HFMD)患儿的粪便标本和咽拭子标本107份,进行EV71的分离;用Bioedit和MEGA 4对EV71山东临沂分离株SDLY1、SDLY11、SDLY48、SDLY96、SDLY107的3D区进行序列分析,参比序列选自GenBank.结果 3D区的系统发生树分析结果显示,5株临沂分离株在发生树上比较集中,SDLY11、96、107的3D区同源性最高,与CoxA16原型株G-10的系统发生关系较近,与EV71原型株BrCr/70的系统发生关系较远;3D区碱基构成比和氨基酸构成比分析显示,含量最高的碱基为A(29％),含量最高的氨基酸为亮氨酸(＞10％);基因序列比对和氨基酸序列比对分析结果显示,碱基突变较多,但大多为静默突变,临沂分离株与CoxA16 G-10之间的氨基酸突变中有很大一部分是赖氨酸与精氨酸之间的突变,在SDLY107的3D区发现了3个特有的氨基酸突变:N37S、K142R、G261E.结论 EV71山东临沂分离株3D区的进化可能与CoxA16 G-10有关,突变N37S、K142R、G261E可能与EV71的神经毒力有关.