PGC-1α-shRNA慢病毒载体对牙髓干细胞分化的影响

目的：构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（peroxisome proliferators activated receptor γ coactivator 1α,PGC-1α）短发夹RNA（short hairp in RNA,shRNA）慢病毒表达载体,体外评价其对牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSC）分化的影响。方法：根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰PGC-1α编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PLKO.1/PGC-1α-shRNA感染DSPC,实时荧光定量PCR检测PGC-1α的表达,细胞化学染色和实时荧光定量PCR检测其对DPSC分化的影响。结果：测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,DPSC转染了PGC-1α-shRNA后PGC-1α表达水平降低,干扰效率达81%,而且细胞钙化结节增多,牙本质涎磷蛋白和Ⅰ型胶原的表达明显上调,与对照组相比具有显著性差异（P〈0.05）。结论：慢病毒介导的PGC-1α-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响牙髓干细胞的分化。     

口腔扁平苔藓组织中CD3+、CD8+T细胞浸润与不典型增生的关系

目的：探讨口腔扁平苔藓（OLP）中CD3+T细胞和CD8+T细胞浸润与OLP伴上皮不典型增生的相关性,为OLP的临床诊断和免疫治疗提供新的方向。方法：采用免疫组化半定量法检测CD3+、CD8+T细胞在79例OLP患者组织中的表达,取10例口腔正常黏膜组织作为对照,分析口腔扁平苔藓组织中CD3+、CD8+T细胞浸润与不典型增生的关系。结果：CD3+、CD8+T细胞在正常口腔黏膜组织中呈阴性表达,在79例OLP中均呈阳性表达。CD3+、CD8+T细胞浸润与患者性别、年龄、发生部位无明显统计学意义,但是与OLP伴上皮不典型增生密切相关,具有统计学意义（P<0.001,P=0.002）,CD3+T细胞浸润和CD8+T细胞浸润之间具有显著相关性（r=0.498,P<0.001）。结论：口腔扁平苔藓患者组织中CD3+、CD8+T细胞浸润与上皮不典型增生密切相关,影响OLP的发生发展。     

槲皮素调控NF-κB信号通路对口腔黏膜鳞状细胞癌的化学预防作用

目的 研究槲皮素作为预防药物通过调控NF-κB信号通路对口腔黏膜鳞状细胞癌的化学预防作用机制。方法 采用DMBA诱导法建立金黄仓鼠颊囊癌模型随机分为6组阴性对照组、给药组、DMBA模型组、低剂量组（12.5 mg/kg）、中剂量组（25 mg/kg）、高剂量组（50 mg/kg）,采用qPCR和Western Blot方法检测NF-κB-p50、NF-κB-p65、IκBα、p-IκBα、IKKβ的表达情况;应用计算机辅助虚拟对接方法对槲皮素与IKKβ激酶分子进行模拟对接。结果 Western blot检测结果表明,中剂量组、高剂量组与模型组相比NF-κB-p50、NF-κB-p65、p-IκBα、IKKβ表达水平降低（P<0.05~0.01）,而IκBα表达水平升高（P<0.05~0.01）;qPCR检测结果显示,高剂量组与模型组相比NF-κB-p50mRNA、NF-κB-p65mRNA表达水平降低（P<0.05~0.01）。分子模拟对接结果表明,槲皮素通过氢键和π键作用,在同一活性腔中与IKKβ激酶区对接。结论 槲皮素可能通过靶向调控NF-κB相关信号通路而发挥对口腔黏膜鳞状细胞癌的化学预防作用。      

FGF-23（R176Q）过表达对成年小鼠下颌骨形成和矿化的影响

目的：研究 FGF-23（R176Q）过表达对成年小鼠下颌骨形成和矿化的影响。方法使用 CT 扫描、血清学检查、HE染色、免疫组织化学法染色和 RT-PCR 等方法分析 FGF-23（R176Q）转基因小鼠（TG 组）和野生型小鼠（WT 组）下颌骨，比较血清钙、磷浓度变化和下颌骨骨基质和矿化的差异。结果WT 组小鼠血清钙、磷和1，25（OH）2 D3浓度均明显高于 TG 组，差异有统计学意义（P ＜0．05）；TG 组的成骨细胞密度低于 WT 组，差异有统计学意义（P ＜0．05）；TG 组的二聚糖阳性百分比高于 WT 组，而 DSP 阳性百分比低于 WT 组，差异有统计学意义（P ＜0．05）；WT 组的 OCN 和Ⅰ型胶原 mRNA 表达水平均明显高于 TG 组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论FGF-23（R176Q）过表达能够抑制下颌骨骨基质的形成，减少骨质的矿化，进而导致了下颌骨发育障碍。     

1，25二羟维生素D3在小鼠下颌骨矿化作用机制研究

目的：探讨1,25二羟维生素D3（1,25（OH）2D3）在小鼠下颌骨矿化中的作用机制。方法：利用组织学、免疫组织化学和实时定量RT—PCR比较分析了6周龄野生型和1α羟化酶基因敲除（1α（OH）ase）小鼠下颌骨矿化的差异。结果：与野生型小鼠相比,1α（OH）ase小鼠的类骨质的比例明显增加,骨钙素（osteocalcin,OCN）在下颌骨沉积面积和在成骨细胞表达水平均明显降低,碱性磷酸酶（ALP）在下颌骨成骨细胞的活性和表达水平明显降低,而Biglycan在下颌骨的沉积面积和在成骨细胞表达水平则明显增加。结论：1,25（OH）：D,通过调节OCN、ALP和Biglycan的基因表达水平和蛋白质沉积水平促进小鼠下颌骨的矿化。     

1,25（OH）2D3缺乏对小鼠下颌骨体及髁突骨形成的影响

目的:研究1,25(OH)2D3缺乏对小鼠下颌体及髁突骨形成的影响及机制。方法:利用组织化学、免疫组织化学和western-blot等方法比较分析6周龄野生型(WT)和1α(OH)ase-/-小鼠髁突的骨形成及其与下颌体骨形成的差异。结果:与WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-小鼠髁突骨量明显增加,ALP和I型胶原的阳性面积也明显增加,而下颌体的骨量明显减少,ALP和I型胶原的阳性面积明显减少。1α(OH)ase-/-小鼠的下颌体PTHR和IGF-1蛋白表达水平轻度减少,而在髁突中PTHR和IGF-1蛋白表达水平明显增加。结论:内源性1,25(OH)2D3在小鼠下颌体骨形成中发挥了重要作用,PTH通过和PTHR结合在IGF-1的介导下在髁突骨形成中发挥重要作用。     

PGC-1α-shRNA慢病毒载体对牙髓干细胞分化的影响

目的:构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferators activated receptor γ coactivator 1α,PGC-1α)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对牙髓干细胞(dental pulp st...     

1,25二羟维生素D3在小鼠下颌骨矿化作用机制研究

目的:探讨1,25二羟维生素D3(1,25(OH)ZD3)在小鼠下颌骨矿化中的作用机制.方法:利用组织学、免疫组织化学和实时定量RT-PCR比较分析了6周龄野生V和1a化酶基因敲除(1 a(OH)ase4-/-)小鼠下颌骨矿化的差异.结果:与野生型小鼠相比,1α(OH)ase-/-_小鼠的类骨质的比例明显增加,骨钙素(...     

转录抑制因子Snail在口腔鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征及预后多因素的关系

目的 研究转录抑制因子Snail在口腔鳞状细胞癌(以下简称口腔鳞癌)中的表达及其与多种临床病理因素之间的关系,探讨其在口腔鳞癌治疗及预后评估中的意义。方法 采用免疫组织化学染色半定量的方法检测83例术前未接受放、化疗或其他特殊治疗的原发性口腔鳞癌患者标本中Snail的表达情况,并对其与口腔鳞癌患者的临床病理因素、转移及预后之间的关系进行统计学分析。结果 83例口腔鳞癌组织标本中,Snail的表达率为89.2%,其中,高表达率为49.4%,低表达率为39.8%。口腔鳞癌组织中Snail的表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移之间在统计学上无显著性差异（P>0.05）。Snail表达水平与口腔鳞癌患者的复发之间有显著性差异（P＝0.003）。结论 口腔鳞癌患者癌组织中Snail的高表达与肿瘤复发及预后之间有一定相关关系。因此,Snail有可能作为口腔鳞癌患者复发和预后的预测指标。     

靶向黏着斑激酶siRNA表达载体构建及转染Tca8113细胞的沉默效应

目的:构建靶向黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒表达载体,转染人舌癌细胞Tca8113后观察其对FAK表达的抑制作用.方法:根据siRNA的设计原则,在人FAK mRNA序列中,设计并合成2条特异性靶序列寡核苷酸及2条无关对照序列,经退火成互补双链,再克隆到pGC-silencerTM-U6/Neo真核表达载体中,构建重组体pSilencer-FAK并进行酶切鉴定;转染重组质粒至Tca8113细胞中,经G418抗性筛选,获得稳定转染细胞系;运用免疫细胞化学和Westem-blot鉴定FAK的沉默效应.结果:质粒酶切证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo载体中;psi-lencer-FAK转染细胞后,FAK基因的表达受到明显抑制.结论:成功构建了针对人FAK的siRNA表达载体,通过转染Tca8113细胞可有效地抑制细胞中FAK的表达.