当归含药血清通过调控miR-129表达对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用

目的 探讨当归含药血清通过调控微小RNA-129(MicroRNA-129,miR-129)表达对阿尔茨海默病PC12细胞的保护作用。方法 分别以1.5 g/kg当归药液及等量生理盐水对SD(Sprague Dawley)大鼠灌胃处理,配制成10%含药血清及正常血清培养液; 将PC12细胞分为空白组、模型组、药物组、药物+Control小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)组、药物+miR-129 siRNA组,除空白组外,其余各组均用30 μL的Aβ_25-35溶液诱导细胞损伤24 h构建阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)细胞模型,空白组及模型组用空白血清培养液培养,其余各组用10%含药血清培养液培养,培养48 h后收集各组细胞观察细胞形态学; 实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测其中miR-129表达水平,采用甲基噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测各组细胞的增殖抑制率; 流式细胞仪检测各组细胞的凋亡及周期情况; 蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测细胞凋亡相关因子蛋白的表达水平; 酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunoSorbent assay,ELISA)试剂盒检测乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(T-superoxide dismutase,T-SOD)水平。结果 与空白组比较,模型组PC12细胞贴壁功能受损,miR-129、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白水平、S期及G2/M期细胞数目、T-SOD水平降低(P<0.05),细胞抑制率、凋亡率、半胱氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax),G0/G1期细胞数目、LDH,MDA水平升高(P<0.05); 与模型组比较,药物组细胞贴壁功能改善,miR-129,Bcl-2蛋白水平、S期及G2/M期细胞数目、T-SOD水平升高(P<0.05),细胞抑制率、凋亡率、Caspase-3,Bax,G0/G1期细胞数目、LDH,MDA水平下降(P<0.05); 与药物组、药物+Control siRNA组比较,细胞贴壁功能受损,miR-129,Bcl-2蛋白水平、S期及G2/M期细胞数目、T-SOD水平降低(P<0.05),细胞抑制率、凋亡率、Caspase-3,Bax,G0/G1期细胞数目、LDH,MDA水平升高(P<0.05)。结论 当归含药血清对于阿尔茨海默病细胞模型具有一定的保护作用,其机制可能与上调miR-129表达有一定关系。     

骨髓间充质干细胞外泌体源性miR-128 调控GSK3B参与脑梗死进展

目的 探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCS)外泌体源性miR-128调控GSK3B对脑梗死大鼠自噬与炎性反应的影响。方法 分离BM-MSCS及外泌体,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)对miR-128与GSK3B的表达量进行检测,双荧光素酶报告实验验证miR-128和GSK3B的靶向关系,Western blot法检测自噬相关蛋白(LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)的表达,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测组织中炎性细胞因子(TNF-α、IL-6)分泌水平。结果 与sham组大鼠比较,大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion, MCAO)大鼠脑组织中miR-128表达下调,但miR-128在BM-MSCS外泌体中表达上调(P＜0.05)。外泌体处理或上调外泌体中miR-128表达能降低MCAO大鼠脑组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达,抑制TNF-α、IL-6浓度(P＜0.05)。但下调外泌体中miR-128表达则相反。miR-128与GSK3B的靶向关系被验证,下调miR-128的作用被si-GSK3B部分抵消。结论 BM-MSCS外泌体源性miR-128通过靶向GSK3B抑制脑梗死大鼠自噬与炎性反应。