SD118-2对人HepG2细胞凋亡影响及机制探讨

目的观察化合物SD118-2对人HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法取对数生长期人HepG2细胞,分为对照组和给药组。给药组分别给予7 mg/L SD118-2处理12、24和48 h,对照组给予相同浓度DMSO。用MTT法检测细胞增殖率,DAPI荧光染色法观察SD118-2处理后细胞形态,流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率及周期阻滞,用流式细胞仪JC-1染色法检测线粒体膜电位(ΔΨm),Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、PARP和C-PARP表达。结果 SD118-2呈时间依赖性抑制人HepG2细胞生长、降低线粒体膜电位、诱导细胞凋亡、阻滞细胞G2期;抗凋亡蛋白BCL-2表达呈时间依赖性减少,促凋亡蛋白BAX、C-PARP表达呈时间依赖性增加;SD118-2对正常肝脏细胞增殖几乎无影响。结论化合物SD118-2具有诱导人HepG2细胞凋亡的作用,并能使细胞周期进程发生变化。     

HepG2细胞胰岛素抵抗模型中脂代谢的改变

目的:探讨胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)对肝细胞脂代谢酶的影响?方法:用不同浓度胰岛素刺激HepG2细胞,建立肝细胞IR模型;用油红O染色观察细胞形态及胞内脂滴形成;应用甘油三酯(triglyceride,TG)检测试剂盒检测细胞中TG含量;Real-time PCR检测乙酰辅酶a羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)?肝型脂肪酸结合蛋白(liver-type fatty acid-binding protein,L-FABP)?脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)?肉碱棕榈酰转移酶(carnitine palmitoyltransferase 1,CPT1)?微粒体甘油三酯转移蛋白(microsomal triglyceride transfer protein,MTP)等脂代谢相关因子及转录因子胆固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein-1c,SREBP-1c)?过氧化物酶体增生物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor α,PPARα)的mRNA表达水平?结果:用浓度1×10-4 mol/L的胰岛素刺激细胞36 h后形成IR?IR细胞内脂滴增多,TG含量增加;IR细胞内脂合成相关的ACC?SREBP-1c的mRNA水平较对照组升高;LPL?CPT1?MTP?PPARα的mRNA水平较对照组降低;L-FABP mRNA水平与对照组相比无差异?结论:IR通过提高肝细胞脂合成?降低脂氧化过程,导致肝细胞内脂质异常堆积?     

海芒果种子提取物nerifolin对人肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响

目的:观察来源于海芒果种子的皂苷类化合物nerifolin对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法:MTT法检测不同质量浓度nerifolin对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞术检测nerifolin对HepG2细胞周期和凋亡的影响。Caspase试剂盒检测nerifolin对HepG2细胞caspase-3酶活化的影响。结果:Nerifolin可时间和剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖,作用24、48、72h的IC50分别为(2.34±0.08)、(0.13±0.01)、(0.06±0.01)μg/ml。随着nerifolin(0.1μg/ml)作用时间的延长,HepG2细胞S期百分比逐渐增多,而G0/G1期百分比逐渐减少(P<0.01),nerifolin阻滞HepG2细胞于S期。Nerifolin作用后,HepG2细胞早期凋亡率上升至22.65%,caspase-3活性比对照组明显升高(P<0.01)。结论:Neri-folin可通过S期阻滞抑制HepG2细胞的增殖,通过caspase-3依赖途径诱导HepG2细胞的凋亡。     

哺乳期过度营养对大鼠血压及血管内皮舒张功能的影响

目的　观察出生后过度营养及高脂饮食对大鼠血压的影响，探讨哺乳期及早期持续过度营养导致高血压发生发展的病理生理机制。方法　应用小窝鼠模型，SD大鼠雄仔出生3 d后按随机数字表法分为哺乳期正常营养组（10只/窝）和哺乳期过度营养组（3只/窝）。3周断乳后，再分别按随机数字表法完全随机分组给予标准饲料和高脂饲料至16周；共分为4组：正常营养组、哺乳期过度营养组、断乳后过度营养组、持续过度营养组。每周监测体质量，于3、16周测定大鼠内脏脂肪质量、收缩压及心率。取大鼠胸主动脉行血管内皮舒张功能测定。HE染色观察血管组织形态，硝酸还原法检测血管组织中一氧化氮，实时定量-PCR测定血管内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达，Western blot法检测其总蛋白及磷酸化蛋白表达水平。结果　出生后3周哺乳期过度营养组大鼠体质量［（77.80±0.57）g 比 （62.80±0.85）g，t=14.576, P＜0.01］、脂肪质量［腹膜后：（8.19±0.49） mg/g 比 (4.92±0.31)mg/g, t=5.629, P＜0.01; 生殖周：(3.50±0.29)mg/g比(2.08±0.13)mg/g, t=4.552,P＜0.01］显著高于正常营养组大鼠;血管组织中磷酸化-eNOS的蛋白表达明显下降并持续到16周（F=15.215, P＜0.01）；断乳后高脂喂养增加哺乳期过度营养组大鼠体质量、脂肪质量。至16周时，持续过度营养组出现高血压［（149±1.94） mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），F=22.834, P＜0.01］、血管内皮舒张功能受损（F=7.648， P＜0.05）及磷酸化-eNOS的蛋白表达下降（F=15.215, P＜0.01），而断乳后过度营养组仅出现血压改变。结论　哺乳期过度营养断乳后高脂饮食可导致高血压，血管组织磷酸化eNOS表达的持续下降可能是哺乳期过度营养诱导成年期血管内皮舒张功能紊乱发生的重要分子机制。