重组疫苗E.coli LLO／OVA诱导树突状细胞成熟并表达趋化因子及受体

目的：探讨重组疫苗E．coli LLO／OVA诱导树突状细胞成熟和表达趋化因子及其受体的作用．方法：采用基因芯片杂交及RT—PCR检测经Ecoli LLO／OVA刺激后小鼠骨髓树突状细胞（BMDC）的NF-KB信号通路相关分子和趋化因子及其受体mRNA的表达,流式细胞分析BMDC活化状况及趋化因子受体CXCR4的表达．结果：未成熟BMDC表达趋化因子基因Ccl2,Ccl4,Ccl6,Ccl9,Ccl17,Ccl22,Cxcl2,Cxcl4和趋化因子受体基因Ccr2,Ccr5和Ccr7．经E．coli LLO／OVA刺激后4～8h,BMDC明显上调表达基因Myd88,Nf-κbl,Ccl3,Ccl5,Ccl7,Ccl22,Cxcll,Cxcl9和Ccrl2,同时下调表达趋化因子受体基因Ccr2和Ccr5,但持续表达Ccr7．经该疫苗刺激后8h,BMDC上调表达基因Tlr2,Myd88,Nf-κbl和Cxcr4．该疫苗刺激后12h,BMDC下调一系列趋化因子和趋化因子受体基因表达,仅持续表达基因Ccl5和Cxcr4．经疫苗刺激24h后BMDC上调表达CIMO,CD80,CD86,MHC—Ⅱ类分子及CXCR4．结论：重组疫苗E．coli LLO／OVA可能通过Myd88／NF—κB信号途径诱导了小鼠骨髓树突状细胞成熟并表达一系列趋化因子及趋化因子受体基因,尤其上调了趋化因子受体CXCR4的表达．     

重组疫苗E.coli LLO／OVA经TLR4和NOD1受体诱导树突状细胞表达细胞因子

目的:探讨树突状细胞(DC)的模式识别受体(PPBs)活化与细胞因子表达的关系.方法:采用基因芯片及RT-PCR检测经E.coli LLO/OVA刺激后小鼠骨髓树突状细胞(bone marrw-derived dendritic cell,BMDC)的PPRs及其下游NF-KB信号通路相关分子mRNA的表达水平,并观察BMDC的活化状况及培养上清液内细胞因子含量.结果:经E.coliLLO/OVA刺激后2 h,BMDC出现短暂的TLR4 mRNA表达上调,其下游信号途径相关的Myd88、Rip2、Irak1、Imk2、Ikkα、NF-KB1和NF-KB2 mRNA均出现表达上调,黏附分子Icam1、细胞因子IL-1α、IL-1b、IL-6和TNF-α的mRNA也表达上调;经E.coli LLO/OVA刺激后4 h,BMDC出现Card4(NOD1)mRNA表达上调,其下游信号途径相关的Rip2、Ikkβ、NFkB1和NF-KB2 mRNA均出现表达上调,IFN-γ、TNF-β和CD40 mRNA也上调表达.经E.coli LLO/OVA刺激后24 h,BMDC表达共刺激分子及MHC-Ⅱ类分子上调;且培养上清液内IL-12和IFN-γ含量增高.结论:重组疫苗E.coli LLO/OVA经TLR4和NOD1受体激活NF-KB信号通路,诱导了小鼠BMDC成熟并表达一系列细胞因子尤其是IL-12和IFN-γ.     

重组疫苗E. coli LLO/OVA促进小鼠树突状细胞NOD1受体活化并表达IFN-γ

目的探讨重组疫苗E.coli LLO/OVA诱导树突状细胞的细胞内受体NOD(nucleotide-binding oligomerizationdomain)活化及表达IFN-γ的作用。方法采用基因芯片杂交分析经E.coliLLO/OVA刺激后小鼠骨髓树突状细胞(bonemarrow-derived dendritic cells,BMDC)Card4/NOD1及其下游NF-κB信号通路相关分子mRNA的表达,RT-PCR检测BMDC的NOD1、NOD2和IFN-γmRNA表达,ELISA测定BMDC培养上清液内IFN-γ含量。结果经E.coli LLO/OVA刺激后4h至8h,BMDC出现Card4/NOD1基因表达上调,其下游信号途径相关分子基因Rip2、Ikkα、Ikkβ、Nfκb1、Nfκb2和IFN-γ均出现表达上调。RT-PCR结果显示该疫苗刺激后BMDC的NOD1与IFN-γ基因表达时段一致。经E.coliLLO/OVA刺激后24h,BMDC培养上清液内IFN-γ含量明显高于E.coli OVA刺激后的BMDC。结论重组疫苗E.coliLLO/OVA诱导小鼠骨髓树突状细胞NOD1受体信号途径活...     

重组E.coli LLO/OVA刺激小鼠骨髓树突状细胞细胞因子表达的研究

目的 研究重组大肠杆菌疫苗E.coli LLO/OVA刺激小鼠骨髓树突状细胞的细胞因子表达,探讨该疫苗对BM-Dc的免疫刺激作用.方法 以E.coli OVA为对照,采用基因芯片、RT-PCR和ELISA在基因和蛋白质水平检测E.coli LLO/OVA刺激C57BL/6小鼠骨髓树突状细胞细胞因子表达情况.结果 经E.coli LLO/OVA刺激后4～24 h,BMDC出现一系列细胞因子基因表达上调,尤其在刺激后4～8 h BMDC的细胞因子基因上调表达明显,其中G-CSF和IFN-γ的表达明显高于E.coli OVA刺激后的BMDC;RT-PCR检测也证实E.coli LLO/OVA刺激8 h后BMDC的IFN-γmRNA转录水平明显高于E.coli OVA刺激的BMDC;FLISA结果显示E.coli LLO/OVA刺激BMDC后12～24 h,培养上清液内IFN-γ的含量明显高于E.coli OVA刺激后的BMDC,而IL-10的含量则明显降低.结论 E.coli LLO/OVA刺激小鼠BMDC上调表达一系列细胞因子,并且较E.coli OVA刺激的BMDC更明显上调G-CSF和IFN-γ基因表达.ILO作为重组疫苗E.coli OVA的免疫佐剂在刺激BMDC表达促进机体免疫的细胞因子中发挥重要作用.     

CD11c细胞的改良法磁珠分离及诱导T细胞增殖研究

目的:改良CD11c细胞的磁珠分离方法,并观察CD11c细胞诱导同源CD4 T和CD8 T细胞增殖的作用.方法:使用胶原酶、DNase I和EDTA处理脾组织,以及小鼠血清和抗CD16/32抗体阻断CD11c磁珠与脾细胞非特异结合后分离CD11c细胞:流式细胞术分析CD11c细胞的纯度;淋巴细胞混合培养和ELISA检测CD11c细胞诱导同源T细胞增殖及分泌细胞因子的作用.结果:改良后的磁珠分离法获得了平均(4.52±0.05)×106/鼠的CD11c细胞,纯度高达98%.重组肿瘤疫苗E.coli LLO/OVA免疫小鼠的CD11c细胞明显促进了CD4 T和CD8 T细胞增殖并分泌IL-2和IFN-γ.结论:改良法磁珠分离获得了较多高纯度的CD11c细胞,活化的CD11c细胞具有诱导同源T细胞增殖及分泌细胞因子的作用.