缺氧对H9C2心肌细胞中miR-19a-3p表达的研究

目的检测大鼠H9C2心肌细胞缺氧后细胞水平和培养液中循环微小RNA(miRNA,miR)-19a-3p的表达,并探讨其与可能靶基因低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LRP2)的关系。方法对H9C2心肌细胞进行缺氧(37℃,5% CO_2,1% O_2)0、4、8、12、16、20、24h处理,采用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其在不同时间点细胞水平和培养液中循环miR-19a-3p的表达水平,使用ELISA、qRT-PCR、Western Blot检测LRP2在培养液和细胞中mRNA和蛋白表达。结果 H9C2细胞培养液中miR-19a-3p的表达在缺氧0、4、8、12、16h差异无统计学意义(P0.05),在缺氧20h与24h时,H9C2细胞培养液中miR-19a-3p的表达与缺氧0h比较,明显高表达(P0.05);在缺氧20h与24h时,H9C2细胞中miR-19a-3p的表达与缺氧0h比较,明显下降(P0.05);H9C2细胞培养液中LRP2的表达在缺氧16h后表达明显升高,缺氧16h[(675.2±42.4)ng/mL,n=3]、缺氧20h[(979.4±204.2)ng/mL,n=3]和缺氧24h[(1 456.0±363.6)ng/mL,n=3]较0h[(245.0±10.84)ng/mL,n=3]明显升高(P0.05);H9C2细胞中LRP2mRNA表达水平在缺氧16h后表达明显升高,缺氧16h[(0.000 503±0.000 100)ng/mL,n=3]、缺氧20h[(0.001 303±0.000 090)ng/mL,n=3]和缺氧24h[(0.001 617±0.000 110)ng/mL,n=3]较0h[(0.000 139 4±0.000 060 0)ng/mL,n=3]明显升高(P0.05);20h[(0.235 000±0.003 427)ng/mL,n=3]与24h[(0.535 000±0.003 427)ng/mL,n=3]LRP2蛋白表达与0h[(0.140 10±0.018 21)ng/mL,n=3]比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-19a-3p可能参与大鼠H9C2心肌细胞的缺氧坏死过程,并且可能通过调控LRP2而发挥作用。     

甜菜碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤炎症及心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨甜菜碱对大鼠心肌缺血再灌注（IR）损伤的影响及发生机制。方法 选用成年雄性SD大鼠18只,采用随机数字表分为假手术组（SO组）、缺血再灌注组（IR组）及甜菜碱组（450 mg/kg灌胃）,每组6只大鼠。SO组：开胸,前降支动脉下穿线不结扎,IR组和甜菜碱组：开胸,缺血30 min,再灌注4 h。ELISA法检测并比较3组大鼠心肌损伤标记物乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶b（CK-Mb）和肌钙蛋白I（cTnI）和检测炎症因子（HMGB1、IL-17A、IL-6以及TNF-α）的表达。Western Blot法检测并比较3组大鼠心肌组织凋亡蛋白（caspase-3,Bcl-2和Bax）的相对表达量。结果 与SO组比较,IR组中心肌损伤标记物（CK、LDH和cTnI）、炎症因子和凋亡蛋白的表达均增高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与IR比较,甜菜碱组心肌损伤标记物、炎症因子和凋亡蛋白的表达下降,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 甜菜碱可以通过抑制炎症反应和心肌细胞凋亡减轻大鼠心肌IR损伤。     

鲁斯可皂苷元通过抑制p38MAPK途径及心肌细胞焦亡改善小鼠阿霉素心肌病

目的观察和探索鲁斯可皂苷元(Rus)对小鼠阿霉素(DOX)心肌病的影响及可能机制,旨在为临床上DOX心脏毒性的预防和治疗提供参考依据。方法通过单次腹腔注射DOX(15 mg/kg)的方式构建急性DOX心肌病小鼠模型,采用随机数表法将32只雄性C57BL/6小鼠(8~10周)随机分为空白对照组(Sham组)、Rus组、DOX组、DOX+Rus组(每组8只)。DOX组及DOX+Rus组小鼠接受DOX(15mg/kg)腹腔注射,Rus组及DOX+Rus组小鼠则在第一天起给予Rus 10 mg/(kg·d)灌胃,持续7 d。7 d后,行超声心动图检测各组小鼠心脏功能,包括射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)及心率。经实时荧光定量PCR检测心肌组织细胞焦亡标志物胱天蛋白酶1(Caspase 1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)的mRNA表达情况。采用蛋白质印迹法检测心肌组织中凋亡相关蛋白、NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白及p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)相关蛋白的表达情况。采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析。多组间比较采用方差分析。结果与Sham组相比,DOX组小鼠EF及FS水平显著降低(均P<0.05),LVEDD和LVESD均增大(均P<0.05),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05),NLRP3及含有Caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达均明显升高(均P<0.05),细胞焦亡标志物Caspase 1、IL-1β和IL-18的mRNA表达水平均明显升高(均P<0.05),p38蛋白磷酸化(P-p38)水平明显增加(P<0.05);与DOX组相比,DOX+Rus组小鼠心功能明显改善(P<0.05),心肌细胞凋亡水平明显降低(P<0.05),NLRP3表达水平明显降低(P<0.05),ASC蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),P-p38明显被抑制(P<0.05)。结论Rus可改善DOX心肌病小鼠心功能,可能通过抑制NLRP3炎症小体及p38MAPK途径发挥上述作用。     

黑芥子苷通过p38/JNK MAPK信号通路对阿霉素心脏毒性的保护作用

目的:探讨黑芥子苷对阿霉素诱导的心脏毒性的作用及机制。方法:10周龄雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、黑芥子苷组、阿霉素组和黑芥子苷+阿霉素组。阿霉素组和黑芥子苷+阿霉素组给予单次腹腔注射阿霉素(15 mg/kg),对照组和黑芥子苷组给予单次腹腔注射生理盐水(15 mg/kg),黑芥子苷组和黑芥子苷+阿霉素组小鼠同时用黑芥子苷5 mg/kg灌胃,每2天1次,共3次。7 d后超声心动图检测心脏功能,Western blot检测心肌中凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达水平。结果:黑芥子苷组与对照组小鼠超声心动图各指标、凋亡相关蛋白表达水平和MAPK相关蛋白表达水平的差异无统计学意义。与对照组相比,阿霉素组小鼠LVEDD、LVESD均明显增大,LVEF和LVFS均明显减小,Bax表达水平、p38和JNK的磷酸化水平明显升高,Bcl-2表达水平明显降低(P均<0.05)。与阿霉素组相比,黑芥子苷+阿霉素组小鼠LVEDD、LVESD均明显减小,LVEF和LVFS均明显增大,Bax表达水平、p38和JNK的磷酸化水平均明显降低,Bcl-2表达水平明显升高(P均<0.05)。结论:黑芥子苷通过p38/JNK MAPK信号通路减少心肌细胞凋亡,减轻阿毒素诱导的心脏毒性。     

甜菜碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤炎症及心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨甜菜碱对大鼠心肌缺血再灌注（IR）损伤的影响及发生机制。方法 选用成年雄性SD大鼠18只,采用随机数字表分为假手术组（SO组）、缺血再灌注组（IR组）及甜菜碱组（450 mg/kg灌胃）,每组6只大鼠。SO组：开胸,前降支动脉下穿线不结扎,IR组和甜菜碱组：开胸,缺血30 min,再灌注4 h。ELISA法检测并比较3组大鼠心肌损伤标记物乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶b（CK-Mb）和肌钙蛋白I（cTnI）和检测炎症因子（HMGB1、IL-17A、IL-6以及TNF-α）的表达。Western Blot法检测并比较3组大鼠心肌组织凋亡蛋白（caspase-3,Bcl-2和Bax）的相对表达量。结果 与SO组比较,IR组中心肌损伤标记物（CK、LDH和cTnI）、炎症因子和凋亡蛋白的表达均增高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与IR比较,甜菜碱组心肌损伤标记物、炎症因子和凋亡蛋白的表达下降,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 甜菜碱可以通过抑制炎症反应和心肌细胞凋亡减轻大鼠心肌IR损伤。     

大鼠心肌梗死后与FSTL1和miRNA 200的表达及其机制

【摘要】 目的 探讨SD大鼠急性心肌梗死（AMI）与血清卵泡抑素样蛋白1（FSTL1）及其相关miR 200b 3p的表达情况。方法 20只SD大鼠分为AMI组和Sham组,AMI组结扎大鼠左冠状动脉前降支,而Sham组不结扎,术后1d收集两组大鼠静脉血和心脏组织,采用ELISA法检测大鼠血浆cTnI和FSTL1的表达,用qRT PCR法检测大鼠血浆、组织rno miR 200b 3p和组织FSTL1的表达,采用Western blot法检测组织FSTL1的表达。结果 AMI组大鼠心肌梗死后1d血浆FSTL1的表达较Sham组明显升高（P＜005）,其ROC曲线AUC为1000（P＜005）;而AMI组大鼠心肌梗死后1d心脏组织中FSTL1的表达无论在基因水平还是蛋白水平都较Sham组明显降低（P＜005）;AMI组大鼠术后1d血浆中rno miR 200b 3p的表达较Sham组明显降低（P＜005）,而AMI组大鼠术后1d心脏组织中rno miR 200b 3p较Sham组明显升高（P＜005）。结论 FSTL1和rno miR 200b 3p都可能与大鼠AMI有关,FSTL1可以作为AMI的心肌标志物,rno miR 200b 3p可能通过调控FSTL1的表达而参与AMI发病机制的炎症反应、氧化应激和细胞凋亡等过程。     

血浆hsa-miR-19a-3p与急性冠脉综合征相关性研究及其生物信息学分析

目的分析hsa-miR-19a-3p与急性冠状动脉综合征(ACS)的相关性,并探讨其可能机制。方法选择2014年3月至2015年9月湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院心血管病中心收治的118例冠心病患者作为研究对象,并按照冠心病分类分为STEMI组(34例)、NSTEMI组(25例)、UAP组(22例)和SCAD组(37例),采用实时荧光定量PCR检测血浆hsa-miR-19a-3p的表达,采用生物信息学分析其可能靶基因、生物信息学功能和可能结合非编码RNA(如miRNA、lncRNA、circRNA等);采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LRP2)的表达。结果 STEMI组和NSTEMI组血浆hsa-miR-19a-3p水平较UAP组和SCAD组明显升高,差异具有统计学意义(P 0. 05); hsa-miR-19a-3p的靶基因可能为LRP2,其生物信息功能主要与脂蛋白生物合成过程、脂肪因子信号通路、白介素信号通路、血小板源生长因子信号通路、缺氧诱导因子激活缺氧反应、血管生成、丝/苏氨酸激酶信号通路、丝裂素活化蛋白激酶信号通路、转化生长因子β信号通路和趋化因子信号通路等有关; hsa-miR-557、hsa-miR-507、RP11-70C1. 1、CTD-2147F2. 2、C9orf106、C1orf198_hsa-circRNA8985、FGFR3_hsa-circRNA5885、CAMK2N1_hsa-circRNA8340、TGFBR3_hsa-circRNA859和BCL3_hsa-circRNA4124等可能为其"海绵";血浆LRP2水平,STEMI组(1 511±212. 9) ng/m L、NSTEMI组(1 436±400. 0) ng/m L和UAP组(587. 5±176. 0) ng/m L较SCAD组(367. 4±47. 69) ng/m L明显升高,差异具有统计学意义(P 0. 05);血浆hsa-miR-19a-3p与LRP2 Pearson相关系数为0. 488 1(95%CI:0. 312 5～0. 631 4,P=0. 000 4)。结论 hsa-miR-19a-3p与ACS密切相关,通过调控hsa-miR-19a-3p的靶基因LRP2而导致ACS的发生,可能与脂质代谢密切相关。     

血清卵泡抑素样蛋白1表达和冠心病的相关性研究

目的：探讨血清卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)与冠心病(CAD)发生发展的关系。方法纳入 CAD 患者207例,分为 AMI 组(n=72)、不稳定性心绞痛组(UAP 组,n=65)、慢性稳定性冠心病组(SCAD 组,n=70),同时以 CAG 阴性的住院患者60例作为对照组,采静脉血行 ELISA 检测 FSTL1和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果4组患者在年龄、性别、基本病史方面较为一致(P >0.05),血肌酐、血糖、甘油三酯等生化检查比较,差异无统计学意义(P >0.05),而4组间总胆固醇和低密度脂蛋白水平比较,差异有统计学意义(P <0.05);AMI 组与UAP 组血浆 FSTL1和 TGF-β1表达明显较对照组升高(P <0.05),而 SCAD 组与对照组比较,差异无统计学意义(P >0.05),FSTL1和 TGF-β1的 Pearson 相关系数为0.8932(P <0.001);AMI 患者中3支血管病变者血浆FSTL1表达较双支病变和单支病变明显升高(P <0.001),且双支病变患者血浆 FSTL1表达较单支病变患者也明显升高(P <0.05);FSTL1的 ROC 曲线下面积为0.99,95% CI(0.98~1.00)(P <0.001)。结论FSTL1可能与CAD 发病有关,且与心肌梗死程度呈正比,并可能作为心肌损伤的生物标志物。