急性髓系白血病中CD64表达的敏感性及特异性研究

研究急性髓系白血病(AML)免疫分型中CD64的敏感性和特异性.用系列抗原对132例AML患者的骨髓细胞进行直接标记,并用流式细胞术进行分析.结果表明:在AML中,CD64对急性粒-单细胞白血病(M4)和急性单核细胞白血病(M5)中敏感性最高(分别为96.4%和100%),在其他AML(M0、M1、M2、M3,M6、M7)中表达均较低.CD64对M4和M5中的特异性为56.5%.因此,CD64有助于AML中M4、M5的鉴别诊断.     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与神经母细胞瘤

早期转移是神经母细胞瘤最为显著的生物学特征之一。降解细胞外基质是肿瘤浸润和转移过程中最为重要的一步,而基质金属蛋白酶又是降解细胞外基质的最重要的酶类,组织金属蛋白酶抑制剂是其天然抑制剂。许多研究已证实基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达异常和比例失调与神经母细胞瘤的浸润和转移密切相关。抑制基质金属蛋白酶的活性成为抗神经母细胞瘤转移治疗的一个新靶点。     

反义寡核苷酸下调神经母细胞瘤细胞S100A4基因表达的研究

目的：研究反义硫代磷酸寡核苷酸(asODN)抑制人神经母细胞瘤细胞系S100A4基因表达的作用。方法：将S100A4反义寡核苷酸通过脂质体转染人神经母细胞瘤细胞系LA-N-6和SK-N-SH。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析不同浓度、不同作用时间asODN对两细胞株中S100A4mR-NA表达水平的影响。结果：asODN明显抑制s100A4 mRNA的表达。其抑制作用随浓度增加逐渐增强，0．9μmol／L的asODN可使2株细胞S100A4 mRNA相对丰度与对照组相比下调达30％以上。P＜O．05；asODN的抑制作用24h达高峰，以后逐渐降低。结论：asODN能够下调神经母细胞瘤细胞S100A4基因的表达。为进一步研究S100A4在NB细胞中的作用奠定了基础。     

神经母细胞瘤转移动物模型建立的研究进展

神经母细胞瘤(NB)患者多因早期即发生转移而预后不良,研究其转移机制及进行抗肿瘤转移实验治疗有赖于NB转移动物模型的建立。NB转移动物模型建立的难度较大,近年许多通过不同方法建立的转移动物模型是进行NB体内实验研究的有力工具。     

地西他滨对AML1-ETO阳性急性髓系白血病细胞中PD-L2分子表达的影响

背景 复发难治性AML1-ETO融合基因阳性的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者预后差。程序性细胞死亡蛋白-配体2 (programmed cell death-ligand 2,PD-L2)是参与白血病免疫逃逸的重要分子,研究去甲基化药物对白血病细胞中PD-L2分子表达的影响,对于优化用药方案具重要意义。目的 分析AML1-ETO融合基因阳性的AML细胞中PD-L2分子启动子区甲基化水平及DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(decitabine,DAC)对其表达的影响。方法 以AML1-ETO融合基因阳性AML细胞系Kasumi-1以及两对AML1-ETO沉默(SKNO-1-PGK,SKNO-1-siA/E)或诱导细胞系(U937-MT,U937A/E,U937A/E+ZnSO₄)为模型,采用终浓度为2.5μmol/L的DAC或0.1%二甲基亚砜(对照)处理细胞72 h,其中Kasumi-1、SKNO-1-PGK细胞系设置0.25μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L 3个浓度梯度。采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测...     

FLT3基因3＇-非翻译区-荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定

为分析FMS样酪氨酸激酶3（FMS—like tyrosine kinase3,FLT3）基因3i非翻译区（3’untranslated region,3’-UTR）可能的微小RNA（miRNA）调控位点,构建FLT3基因3’-UTR-荧光素酶报告载体,与miRNA共转染293T细胞,分析miRNA对其调控作用。采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增FLT3基因3,-UTR区序列,插入经PstI和EcoRI双酶切的经过改造的荧光素酶报告载体pGL3-control（pGL3-control—ITI）;通过Target Scan5．1软件预测可能与FLT3基因3’-UTR作用的miRNA;采用FuGENEHD转染试剂包裹荧光素酶报告重组子和miRNA真核表达载体共转染293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了含有804bp的FLT3基因3’-UTR序列的荧光素酶报告重组子,通过酶切和基因测序的方法鉴定正确;miRNA靶位点预测显示,FLT3基因3’-UTR可能是miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-16、miRNA-195、miRNA-424、miRNA-497的作用靶点;与对照组相比,miRNA-15a、15b、195可使荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低20％左右。结论：成功构建了FLT3基因3’-UTR-荧光素酶报告载体,而miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-195可抑制其荧光素酶活性。     

阿齐霉素与克林霉素交替治疗儿童支原体肺炎的疗效观察

目的:探讨阿奇霉素、克林霉素交替治疗儿童支原体肺炎的疗效。方法:对确诊的支原体肺炎患儿进行随机分组,单用阿奇霉素组予静滴阿奇霉素针剂,1次1d,10mg1kg1d,疗程为3d;单用克林霉素组予盐酸克林霉素40mg1kg1d,分2次静脉滴注,疗程为7d;阿奇霉素、克林霉素交替治疗组第1d～3d予静滴阿奇霉素针剂,1次1d,10mg1kg1d,第4d～7d予盐酸克林霉素40mg1kg1d,分2次静脉滴注。结果:单用阿奇霉素组与阿奇霉素、克林霉素交替治疗组疗效比较及单用克林霉素组与阿奇霉素、克林霉素交替治疗组疗效比较,均有显著性差异(p<0.05);克林霉素副反应发生率低于阿齐霉素(p<0.05)。结论:阿奇霉素、克林霉素交替应用治疗支原体肺炎,疗效优于单用阿奇霉素或克林霉素。     

叶酸受体及其在介导药物靶向肿瘤细胞治疗中的应用

肿瘤细胞表面过度表达一系列受体,能与特异性的配体结合并诱导细胞内化.以这些受体为作用靶点,使药物与特异性配体结合即可将药物主动靶向肿瘤细胞.叶酸受体在多种肿瘤细胞特别是髓细胞白血病细胞中都有过度表达,它可通过介导细胞内化将叶酸摄取入细胞胞浆,利用叶酸受体进行肿瘤,特别是白血病的靶向性治疗颇有应用前景.本文就叶酸受体生物学性质、染色体定位及与配体的相互作用,叶酸受体在正常组织、肿瘤组织,特别是白血病细胞中的分布特点,以及叶酸受体介导主动靶向肿瘤细胞,特别是白血病细胞的研究进展进行了概述.     

MicroRNA-193b对K562细胞C-KIT蛋白表达及生物学行为的影响

本研究探讨micro RNA-19b(miR-19b)对K562白血病细胞系C-KIT蛋白表达及生物学行为的影响.采用HiPerFect转染试剂介导FAM荧光标记的miR-193b mimic或阴性对照分别转染过表达C-KIT的K562细胞系,采用流式细胞术检测FAM阳性细胞百分比以监测转染效率,采用Western blot检测C-KIT和磷酸化C-KIT蛋白表达水平,采用CCK-8试剂检测细胞生长曲线,采用Annexin V染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,采用流式细胞仪检测粒系分化标志CD11b和CD15阳性细胞百分比.结果显示,miR-193b或阴性对照转染的K562细胞中,FAM阳性细胞可达80％左右;与对照组相比,过表达miR-193b可明显抑制K562细胞中C-KIT、磷酸化C-KIT蛋白表达水平,同时,K562细胞的增殖受到抑制,凋亡细胞、CD11b阳性细胞、CD15阳性细胞的百分比均有增加.结论:miR-193b可抑制K562细胞C-KIT表达,并抑制细胞增殖;该增殖抑制作用可能与miR-193b诱导的细胞凋亡、分化有关,本研究为进一步分析miR-193b在白血病发生中的作用提供了实验依据.     

MeRIP-qPCR技术检测RNA m6A甲基化修饰对t(8;21)AML细胞中KDM4B基因表达的调控作用

目的:通过MeRIP联合逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术,证明WTAP介导的RNA m⁶A修饰对伴t(8;21)急性髓系白血病(AML)细胞中KDM4B基因的直接调控作用。方法:采用靶向WTAP或KDM4B基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体沉默t(8;21)AML细胞系Kasumi-1和SKNO-1中WTAP或KDM4B基因表达,以转染随机打乱序列(scramble)的shRNA的细胞为对照。用超纯RNA提取试剂盒(DNaseⅠ)提取细胞RNA,Magna MeRIP^TM m⁶A Kit试剂盒富集甲基化修饰片段,并通过RT-qPCR检测m⁶A甲基化修饰的RNA区域;采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)和逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测细胞中WTAP、KDM4B蛋白和mRNA的表达水平。采用克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力。结果:沉默Kasumi-1细胞中WTAP的表达后,m⁶A甲基化修饰在KDM...