胚胎干细胞与基因靶重组研究

基因组结构发生改变的动物品系是研究基因结构与功能的良好动物模型。本文介绍胚胎干细胞的特性,基因靶重组技术应用于胚胎干细胞与遗传性疾病的研究现状与前景,以及筛选基因靶重组后细胞克隆的新方法。预期通过基因靶重组的胚胎干细胞形成的转基因鼠,将在遗传性疾病的治疗、发育生物学、肿瘤生物学等众多领域发挥作用。     

093 重组α/β半乳糖苷酶在豆、乳制品中的应用

大豆和牛乳以其丰富的营养价值成为人们生活中不可缺少的食品。但是，存在于大豆和牛乳中的某些低聚糖和乳糖能够引起肠胃胀气，限制了部分人群的食用。α-半乳糖苷酶可以水解大豆中易使肠胃胀气的棉籽糖和水苏糖，制备α-半乳糖基寡糖含量低的豆制品；β-半乳糖苷酶能够水解乳中的乳糖，获得低乳糖乳制品。本文综述了低聚糖引起肠胃胀气的原因以及基因重组α／β半乳糖苷酶在开发低含量寡聚糖的豆、乳制品方面的进展情况。     

重组α/β半乳糖苷酶在豆、乳制品中的应用

大豆和牛乳以其丰富的营养价值成为人们生活中不可缺少的食品。但是,存在于大豆和牛乳中的某些低聚糖和乳糖能够引起肠胃胀气,限制了部分人群的食用。α_半乳糖苷酶可以水解大豆中易使肠胃胀气的棉籽糖和水苏糖,制备α_半乳糖基寡糖含量低的豆制品;β_半乳糖苷酶能够水解乳中的乳糖,获得低乳糖乳制品。本文综述了低聚糖引起肠胃胀气的原因以及基因重组α/β半乳糖苷酶在开发低含量寡聚糖的豆、乳制品方面的进展情况。     

α—半乳糖苷酶及其在输血等方面的应用

α－半乳糖苷α－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ,α－Ｇａｌ,Ｅ．Ｃ．３．２．１．２２）是广泛存在于自然界中的一种外切糖苷酶,传统上划分为两类异构酶,即α－半乳糖苷酶Ａ和α－半乳糖苷酶Ｂｏ在体内,α－半乳糖苷酶Ａ水解以α－半乳糖残基为末端的糖复合物,而α－半乳糖苷酶Ｂ则水解以α－半乳糖苷酶则水解以α－Ｎ－乙酰－氨基半乳糖残基为末端的聚糖及糖蛋白、糖脂等复合物,因而它实际上是一种α－Ｎ－乙酰－半乳糖胺酶。     

抗Glycophorin A单链抗体基因的构建及酵母表达研究

目的　制备人红细胞表面血型糖蛋白A单链抗体。方法　从可分泌抗人红细胞表面血型糖蛋白A单克隆抗体的杂交瘤细胞中 ,分别扩增出编码其轻、重链可变区基因的cDNA ,通过连接序列组建单链抗体基因 ,将该基因导入毕赤酵母中 ,筛选工程菌株。结果　构建了抗GPA单链抗体基因 ,获得了分泌型表达单链抗体的毕赤酵母菌株 ,工程菌株可表达 30kD蛋白 ,ELASA证明其具有与GPA特异结合活性。结论　该单链抗体保留了亲本抗体的活性 ,为研制红细胞抗体快速诊断试剂奠定了基础     

ABO血型改造制备通用型红细胞

血型改造的理论基础、研究意义及国外研究进展ABO血型系统是临床输血最重要的血型系统,在所有的输血死亡事故中,每年因ABO血型不相合而导致的输血死亡事故居首位,约为69.7%[1].     

MGMT基因启动子甲基化检测在脑胶质瘤化疗中的意义

背景与目的：如何预测和克服肿瘤细胞对化疗药物的耐药性,实施个体化治疗是肿瘤化疗急需解决的问题。与基因启动子甲基化密切相关的DNA损伤修复基因O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT）表观沉默与肿瘤对烷化剂药物化疗敏感性密切相关。本研究探讨检测MGMT基因启动子CpG岛甲基化在判断脑胶质瘤患者预后及预测肿瘤对烷化剂药物耐药性中的意义。方法：甲基化特异性PCR（MSP）法检测脑胶质瘤组织及肿瘤细胞株MGMT基因启动子甲基化状态,蛋白印迹和免疫组化法测定蛋白表达。MTF法检测肿瘤细胞株对烷化剂药物敏感性,将患者随访资料针对MGMT甲基化状态绘制Kaplan-Meier生存曲线,并进行log—rank检验分析。结果：39例脑胶质瘤患者组织MGMT基因启动子甲基化发生率为46．2％,蛋白表达阳性率为61．5％,且肿瘤组织中MGMT基因甲基化状态与蛋白表达显著相关（P〈0．05）：6例正常组织均未检测出基因甲基化。MGMT基因过甲基化的脑胶质瘤SHG44细胞株用5-Aza-CdR处理后完全脱甲基化．MGMT蛋白恢复了表达,同时细胞株对烷化剂药物敏感性也发生逆转．由敏感转变为耐受。在采用手术、放疗和烷化剂尼莫司汀化疗等综合治疗的39例脑胶质瘤患者中,MGMT基因甲基化的患者生存率显著高于MGMT基因未甲基化患者（P〈0．05）。结论：MGMT基因甲基化状态与蛋白表达及肿瘤细胞对烷化剂药物敏感性密切相关,有可能替代MGMT蛋白检测成为判断脑胶质瘤患者预后和预测肿瘤对烷化剂化疗耐药性的标志分子。     

建立人/猪造血嵌合体模型的初步探讨

本研究目的是利用免疫系统尚未成熟的胎猪和新生猪作为人脐血造血干细胞（HSC）的移植受者，建立人／猪造血嵌合体模型，初步探讨在猪体内扩增HSC的可行性。在无菌隔离器中，通过肌肉或脐静脉（剖子宫）给胎猪移植人脐血细胞，或在断脐前通过脐静脉给新生猪移植人脐血细胞，应用流式细胞术检测移植组猪外周血中人CD45^＋细胞。结果表明：移植后，受试猪生长发育与对照猪一致；移植后60天时，用流式细胞术在猪的外周血中检测到一定比例的人源细胞。结论：胎猪或新生猪能耐受一定量的人源抗原的植入，建立人／猪造血嵌合体模型是可行的。     

人血浆对红细胞保存的影响

为了研究人血浆对保存的红细胞结构和功能的影响，对悬浮红细胞、洗涤红细胞以及添加不同量血浆的红细胞成分血在不同保存时间内的红细胞的功能指标，包括pH值、K^＋浓度、Na^＋浓度、渗透脆性、血浆游离血红蛋白、乙酰胆碱酯酶活性、ATP含量、2．3-DPG、P50含量进行了比较。结果证明，血浆有利于保存血液维持其高pH值、低K^＋浓度和高Na^＋浓度，有利于保存红细胞维持其ATP含量、携氧能力和红细胞变形性，但对保存血液维持低渗透脆性，对保存血液的血浆游离血红蛋白、乙酰胆碱酯酶活性、ATP含量和2．3-DPG含量无影响。结论：在红细胞成分血中加入一定量的血浆可能有利于红细胞的长期保存。     

异种输血--猕猴受输猪红细胞的初步研究

本研究的目的是改造猪红细胞（pRBC）表面抗原，使之与灵长类动物相容，以探讨异种输血的可能性。结合使用α半乳糖苷酶（AGL）酶解和甲氧基聚乙二醇（mPEG）修饰改造猪红细胞表面异种抗原，并输注给猕猴，观察pRBC在猕猴体内活存时间及安全性；使用免疫抑制剂（蛇毒因子CVF和地塞米松）延长pRBC在猕猴体内的存活时间；建立失血性贫血猕猴模型，观察输注pRBC治疗失血性贫血猕猴的可能性。结果表明：AGL酶解能够去除猪红细胞表面主要异种抗原（α—Gal抗原），减弱其与猕猴血清的凝集反应，酶解技术与mPEG修饰技术结合可以使猪红细胞与猕猴血清更为相容。异种输血试验表明，双修饰的pRBC在猕猴体内存活时间为12小时，使用免疫抑制剂后，可延长至40小时；pRBC在猕猴体内8小时的存活率为38％，在输注pRBC的8小时内，失血猕猴的血红蛋白和红细胞压积可维持在失血前的正常水平。结论：改造后的pRBC可安全地输注给猕猴，改善失血猕猴的贫血症状．提示用猪红细胞进行异种输血是可能的。