CYP19基因与子宫内膜癌关系的研究进展

细胞色素P450(CYP)是微粒体混合功能氧化酶中最重要的一族,在生物体内分布广泛。CYP19基因编码芳香化酶(P450 arom),后者是雌激素合成的最后一步限速酶,分布于人体的多种组织中,如胎盘、卵巢颗粒细胞、黄体细胞、脂肪组织、睾丸和肾上腺组织中。芳香化酶在雌激素依赖性疾病子宫内膜癌(EC)、乳腺癌、子宫内膜异位症(EMs)和子宫平滑     

葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶表达的调控作用

目的：探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶（aromatase P450,P450arom）表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用。方法：将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）检测药物对RL95-2细胞P450arom mRNA表达水平的影响。以人类基因组DNA为模板扩增人P450arom组织特异性启动子2（PⅡ）转录起始位点上游序列。PCR产物定向克隆到报告基因载体pGL3-Basic中,构建人P450aromPⅡ系列报告基因质粒,并经限制性内切酶消化鉴定和基因测序证实。瞬时转染系列重组质粒至RL95-2细胞,加入葛根素刺激,分析相关转录因子,利用RT-PCR及Western blotting方法检测相关转录因子在葛根素作用下mRNA及蛋白表达的变化。结果：与溶剂对照组比较,低浓度葛根素会抑制P450arom mRNA表达（P〈0.01）,抑制作用在6、12 h较显著（P〈0.01）。经酶切鉴定、基因测序、转录因子分析及启动子活性测定,成功构建了人P450aromPⅡ系列重组质粒（-1 017,-763,-543,-234-＋8 bp）。瞬时转染系列质粒至细胞中,于12 h后加入葛根素（10-7mol/L）刺激,又12 h后检测荧光蛋白水平。结果表明,-763--543 bp间的活性被抑制（P〈0.05）,通过转录因子分析找到了-410/-401 bp的AP-1（c-jun/c-fos）。利用RT-PCR、Western blotting及荧光素酶活性检测发现葛根素（10-7mol/L）对AP-1（c-jun/c-fos）的抑制作用平行于对P450arom的作用。结论：低浓度葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶基因表达的抑制作用很可能是受上游调控转录因子AP-1（c-jun/c-fos）的影响。