用shRNA下调泛素表达抑制人肺癌H1299细胞生长并促进其凋亡

目的通过下调人肺癌细胞中泛素(Ub)基因的表达,研究其对肺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法设计沉默泛素基因表达的shRNA-UBB、shRNA-UBC质粒,用反转录PCR及Western blot法验证shRNA的沉默效果;研究泛素低表达后H1299细胞的生长和克隆形成能力的变化;采用annexin V-PE及DNA片段法检测细胞凋亡变化;PI染色结合流式细胞术检测细胞周期的变化。结果敲减泛素基因(Ub-KD)48、72 h后,能明显抑制H1299细胞的增殖、降低细胞的克隆形成率;与对照组相比,Ub-KD(shRNA-UBB/UBC)组细胞凋亡率显著增加(shRNA-NC:5.60%,shRNA-UBB:9.07%,shRNA-UBC:11.70%,shRNA-UBB/UBC:17.82%)。联合shRNA-UBB、shRNA-UBC作用下能显著增加H1299细胞G1期比例(shRNA-NC:34.53%,shRNA-UBB:34.40%,shRNA-UBC:42.77%,shRNA-UBB/UBC:50.20%)。结论联合敲减UBB、UBC基因通过增加细胞凋亡及细胞G1期阻滞抑制肺癌细胞的生长及克隆形成能力。     

蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对人肺腺癌细胞生长迁移和周期的影响及作用机制

目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对人肺腺癌A549细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期分布的影响及机制。方法 MTT法检测不同MG132浓度处理后不同时间肺腺癌A549细胞的增殖;克隆形成实验检测A549细胞的存活能力;划痕实验测定A549细胞的迁移能力;Transwell小室测定其侵袭能力;流式细胞术测定细胞周期分布的改变;Western blot法测定蛋白表达水平。结果 MG132明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,并呈现剂量-效应和时间-效应关系。MG132联合X射线对A549细胞克隆存活能力有显著抑制作用（F=554.78、954.64,P<0.01）,且加MG132组克隆存活率均低于照射组（t=4.44、12.41、3.52、6.72,P<0.05）。MG132在无毒性剂量下联合X射线可显著抑制A549细胞的迁移及侵袭能力（t=12.79,P<0.01）,并明显增加G₁期细胞阻滞（t=4.29,P<0.05）;MG132联合X射线明显降低A549细胞中基质金属蛋白酶-2,-9和G₁期相关蛋白Cyclin D1的表达水平,同时增加细胞中P53的表达。结论 MG132可以显著抑制人肺腺癌A549细胞的生长,且在无毒性剂量下联合X射线可以明显降低其转移和侵袭能力,显著增加肿瘤细胞的G₁期阻滞。     

转录因子Yin Yang 1(YY1)在食管癌中的表达及其对食管癌细胞功能的影响

目的:探讨转录因子Yin Yang 1(YY1)在正常食管组织和食管鳞癌组织中的表达及其在食管癌发生发展中的作用?方法:免疫组化染色检测15例正常食管组织,39例食管癌旁组织和88例食管癌组织样品中YY1蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测食管鳞癌细胞(TE-1细胞)增殖和生长变化;蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1和p21表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测TE-1细胞迁移?侵袭能力的变化?结果:与正常食管组织和食管癌旁组织相比,YY1 蛋白在食管鳞癌组织样品中的表达显著提高?此外,转染了YY1过表达载体后明显抑制TE-1细胞生长,而干扰YY1表达则可促进细胞的生长;同时伴随着YY1靶基因p21(也称p21WAF1/Cip1)的变化?TE-1细胞转染YY1过表达载体后,细胞的侵袭?迁移能力增强?结论:食管鳞癌组织中YY1表达显著上调,YY1可调节细胞的生长和转移侵袭能力?因此,YY1有望成为食管癌诊断和发展的分子标志物,也有可能是食管癌基因治疗的一个潜在靶点?