TrkA和Bcl-2在局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中的表达

目的探讨局灶性脑缺血再灌损伤后TrkA与Bcl-2基因/蛋白的表达变化。方法 250～350g健康雄性SD大鼠48只,分为对照组(n=24)和脑缺血模型组(n=24)。线栓法制备大脑中动脉栓塞模型,分别在再灌注后6h、24h、48h、7d共4个时间点处死大鼠。运用原位杂交及免疫组化法检测TrkA、Bcl-2基因/蛋白表达变化。结果与对照组相比,模型组TrkA、Bcl-2基因/蛋白阳性表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠脑缺血再灌注损伤后,可能通过上调TrkA和Bcl-2的表达,起到神经保护作用。     

CGRP和NGF对大鼠全脑缺血再灌注脑组织Bcl-2蛋白表达的影响

目的 :观察降钙素基因相关肽 (CGRP)和神经生长因子 (NGF)对缺血神经元 Bcl- 2蛋白表达的影响 ,探讨其神经保护功能的分子机制方法 :应用颈动脉负压分流法是作大鼠短暂性全脑缺血模型 ;于再灌注开始 ,颈颈动脉注入 CGRP、CGRP和 NGF;应用免组织化学方法检测经元 Bcl- 2蛋白的表达。结果 :CGRP组大脑皮层及海马区 Bcl- 2免疫反应阳性百分率为分别 70 .83± 8.95和 4.17± 0 .34 ,较全脑缺血再灌注组 (2 4.88± 2 .88和 2 .95± 0 .34 )明显增加 (P<0 .0 1) ;CGRP加 NGF组大脑皮质及海马区 Bcl- 2免疫反应阳性细胞百分率分别为 83.2 3± 5 .97和 8.0 3±1.5 6 ,明显高于 CGRP组和全脑缺血再灌注组 (P<0 .0 1)。结论 :CGRP可上调缺血再灌注脑组织 Bcl- 2蛋白的表达 ,CGRP的神经保护作用可能与其上调 Bcl- 2蛋白表达有关 ;CGRP和 NGF的联合应用加强了上调 Bcl- 2蛋白表达的作用     

二苯乙烯苷对老龄大鼠脑缺血再灌注后HIF-1α及EPO表达的影响

目的 探讨二苯乙烯苷(TSG)对老龄大鼠脑缺血再灌损伤后的神经保护作用.方法雄性SD老龄大鼠72只,随机分为3组:即假手术组、模型组及TSG干预组,每组24只.其中模型组及TSG组分别灌胃生理盐水及TSG,6d后应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,于术后6h、24h、48h及7d 4个时间点观察动物神经行为学变化并评分,免疫组化法检测HIF-1α和EPO蛋白的表达.结果神经功能评分显示模型组及TSG干预组各时间点均有明显的神经功能缺损症状,除6h时间点外,其余各时间点TSG干预组大鼠神经功能评分显著低于模型组(P＜0.05);与模型组比较,TSG干预组各时间点HIF-1α及EPO蛋白表达均显著升高(P＜0.01).HIF-1α与EPO蛋白表达增加呈正相关.结论TSG可能通过增加老龄大鼠脑缺血再灌注损伤缺血周边区HIF-1α及EPO蛋白的表达,起到脑保护作用.     

高血压大鼠局灶性脑缺血再灌注后Survivin及Bcl-2表达

目的:研究肾性高血压大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织Survivin、Bcl- 2表达和细胞凋亡,探讨其意义。方法:体重2 90～3 10g肾性高血压Wistar大鼠5 0只随机分成2组:A组(缺血再灌注组)及B组(假手术组)。采用线栓法制作局灶性脑缺血2h再灌注模型,假手术组不造成缺血。用免疫组化法和TUNEL法分别观察再灌注6、12、2 4、48和72h脑组织Survivin、Bcl- 2表达和凋亡细胞。结果:在缺血再灌注组中:①再灌注6h时较多Survivin表达,到72h仍见强烈表达;②再灌注6h即可见Bcl -2表达较多,2 4h达高峰,此后逐渐下降;③再灌注6h后已出现较多凋亡细胞,在72h达高峰。假手术组及再灌注组的非缺血侧未见Survivin、Bcl- 2阳性细胞,但见0～2个凋亡细胞。结论:局灶性脑缺血再灌注后Survivin、Bcl- 2表达显著增高,细胞凋亡参与了脑缺血再灌注过程。     

17-β雌二醇对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2表达的影响

目的 观察雌激素对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后bcl-2表达的影响,探讨雌激素在脑缺血-再灌注损伤中 的脑保护作用机制。方法 用线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型。缺血2h分别再灌注3h、6h、12h、24h后断头取脑,应用TTC 染色和免疫组化方法,观察脑梗死体积及bcl-2蛋白的表达。结果 ①雌二醇组神经功能评分明显低于手术对照组(P<0.01)。 ②雌二醇组脑梗死体积较手术对照组显著缩小(P<0.01)。③在损伤区皮质,雌二醇组bcl-2表达较手术对照组明显上调(P< 0.01);在纹状体区,元显著性差异(P>0.05)。结论 ①雌二醇能明显减轻脑缺血再灌注损伤所造成的行为障碍,缩小梗塞体 积。②雌二醇脑保护机制可能通过上调皮质抑凋亡基因bcl-2的表达。     

大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2、Fas蛋白的表达及意义

目的　探讨 Ｂｃｌ２ 及 Ｆａｓ 蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达及与缺血性凋亡的关系。方法　采用免疫组化方法观察 Ｂｃｌ２ 及 Ｆａｓ 蛋白在脑缺血再灌注后随时间延长动态变化并用图像分析测定二者的免疫强度。结果　脑缺血再灌注后 Ｂｃｌ２、 Ｆａｓ 表达。 Ｂｃｌ２ 蛋白表达于再灌注 ３ｈ 达高峰,再灌注 ６ｈ 其表达呈下降趋势,再灌注 ２４ｈ 仅少数细胞阳性表达。 Ｆａｓ 蛋白表达于再灌注 ６ｈ 达高峰,对缺血较敏感的海马大锥体细胞亦有表达,再灌注 ２４ｈ 其表达减少。结论　 Ｆａｓ 蛋白表达介导了脑缺血后细胞凋亡的发生,并可能参与了迟发性神经元死亡。 Ｂｃｌ２ 表达与神经元存活密切相关,在神经元缺血敏感性方面起重要作用,对神经元起保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。     

甘露醇和复方甘油对大鼠急性期局灶脑缺血凋亡相关基因Bcl-2、bax表达影响的对比研究

目的　研究甘露醇和复方甘油对凋亡调控基因的影响,从而证实其脑保护作用。方法　采用免疫组化方法观察甘露醇和复方甘油对Bcl-2、bax表达的影响。结果　甘露醇和复方甘油均能抑制神经细胞凋亡,但二者相比甘露醇效果更为明显。结论　在脑梗死急性期应首选甘露醇,也可将甘露醇与复方甘油两药合用,以增强疗效。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后调控基因Bcl-2、Bax的表达及与细胞凋亡的关系

目的:本研究旨在探讨Bcl-2及Bax蛋白在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的变化及与细胞凋亡的关系。方法:雄性Wistar大鼠56只,随机分为假手术组、缺血15分钟再灌注1、6、12、24、48、72小时组。采用大鼠四条血管阻断方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。采用TUNEL法观察不同再灌注时间组海马CAl区细胞凋亡的变化。采用免疫组化法观察Bcl-2及Bax蛋白表达水平的变化。结果:脑缺血损伤后随再灌注时间延长凋亡细胞逐渐增多,至再灌注48小时达到高峰,72小时后减少。Bcl-2表达至再灌注12小时达高峰,再灌注24~72小时组逐渐减弱。Bax表达至48小时达高峰,再灌注72小时减少。结论:Bcl-2于再灌注早期表达增强,Bax于再灌注中期表达增强,Bcl-2/Bax比例失衡可能是大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。     

Angiopoietin-1 mRNA and Bcl-2 expression following estradiol treatment in ovariectomized rats with focal cerebral ischemia/reperfusion injury

BACKGROUND： Estrogen has been clinically demonstrated to attenuate ischemic brain injury. However, the precise mechanisms remain controversial. OBJECTIVE： To investigate the effects of estradiol on angiopoietin-1 mRNA and Bcl-2 expression, as well as apoptosis and cerebral blood flow, in ovadectomized rats with focal cerebral ischemia following reperfusion. DESIGN, TIME AND SETTING： Randomized, controlled, animal experiment. The study was performed at the Central Laboratory, Chongqing Medical University from September to December 2005. MATERIALS： Estradiol benzoate was purchased from Shanghai Ninth Pharmaceutical Factory; corn oil was purchased from Walmart Supercenter; TUNEL kit, rabbit anti-rat Bcl-2 polyclonal antibody, and biotin-labeled goat anti-rabbit antibody were purchased from Wuhan Boster, China. METHODS： Healthy, female, 6-month-old Wistar rats-wild-type and estrogen alpha receptor gene knockout （ERKO）-were randomly divided into estradiol and control groups with 25 animals in each group. The rats were intramuscularly injected with estradiol benzoate （100 μg/kg per day） at 30 days following bilateral ovariectomy or corn oil （1 mL/kg per day） for seven consecutive days. Following administration, cerebral ischemia/reperfusion models were established using the right middle cerebral artery occlusion （MCAO） method. After 30 minutes of MCAO, estradiol and control groups were separately injected with estradiol benzoate and corn oil with the above-mentioned doses. MAIN OUTCOME MEASURES： Cell apoptosis was determined by TUNEL; angiopoietin-1 mRNA and Bcl-2 gene expression was determined, respectively, by immunohistochemical staining and RT-PCR. In addition, changes in cerebral blood flow were measured by laser Doppler flowmetry. RESULTS： Changes in angiopoietin-1 mRNA and cerebral blood flow in estradiol-treated, wild-type, MCAO rats following ischemia/reperfusion were greater than in control rats （P 〈 0.01 or 0.05）. However, no significant difference was observed between estradiol-treated ERKO MCAO rats and control rats. In addition, estradiol-treated wild-type and ERKO MCAO rats exhibited significantly increased Bcl-2 expression （P 〈 0.05） and decreased number of apoptotic cells in brain tissues compared with control groups （P 〈 0.05）. CONCLUSION： Estradiol upregulated angiopoietin-1 mRNA and Bcl-2 expression, suggesting that estradiol might be involved in protective mechanisms of cerebral ischemia/reperfusion injury.     

钙拮抗剂对大鼠缺血性脑损伤后Bcl-2和Bax基因表达的作用

目的探讨大鼠实验性脑缺血后海马组织Bcl-2和Bax基因的表达及尼莫地平预处理对Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法采用线栓法建立大鼠脑缺血模型；尼莫地平预处理；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定其海马组织中Bcl-2和Bax mRNA。结果大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)后，海马组织Bcl-2和Bax基因均被诱导表达，Bcl-2表达量持续升高，而Bax表达量在脑缺血24h达高峰，随后逐渐下降。在脑缺血后6h和24h，经尼莫地平预处理7d的大鼠，海马组织Bcl-2基因的表达水平较未经预处理的大鼠明显上调，而Bax基因表达水平则较未经预处理的大鼠明显下调。结论钙拮抗剂尼莫地平能有效地调控大鼠缺血性脑损伤后海马组织Bcl-2和Bax基因表达的水平，为干预脑卒中后基因表达提供依据。     

不同时期亚低温对短暂性脑缺血后海马神经元凋亡及Bcl-2/BaX的影响

目的观察不同时期亚低温(33℃)对短暂性全脑缺血的神经保护作用及对Bcl-2/Bax表达的影响.方法40只SD大鼠随机分成常温组、即刻亚低温组、延迟亚低温组和对照组,采用大鼠短暂性脑缺血模型,尼氏体染色观察存活神经元,TUNEL法检测凋亡神经元,免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果即刻亚低温可上调海马CA1、CA3区Bcl-2/Bax比值,减少细胞凋亡,延迟亚低温仅对CA3区有此作用.结论亚低温对缺血后神经元有保护作用,该作用与低温开始时间有关.     

褪黑素对SD大鼠脑缺血再灌注损伤后c-fos表达的影响

目的探讨褪黑素在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及可能机制。方法选取45只雄性SD大鼠,分为假手术组(5只)、脑缺血再灌注组(20只)、褪黑素干预组(20只);脑缺血再灌注组和褪黑素干预组根据时间点第6小时、第1天、第3天、第7天分为4个组,每组5只。采用Longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用HE染色检测脑组织的病理改变,TUNEL染色检测神经细胞的凋亡,免疫组织化学(免疫组化)法及蛋白质印迹法(Western Blotting)观察大鼠脑组织内c-fos表达情况。结果在脑缺血再灌注组的各时间点的HE染色显示,胶质细胞呈现程度不一的增生,神经元出现坏死;褪黑素干预能减轻脑缺血再灌注后胶质细胞增生及神经元的坏死。在TUNEL染色凋亡检测中,脑缺血再灌注组各时间点的神经细胞凋亡升高;褪黑素干预组各时间点的细胞凋亡数低于脑缺血再灌注组(P <0.05)。在免疫组化及蛋白质印迹检测中,脑缺血再灌注组c-fos表达增加,在第1天时达到高峰,之后表达逐步降低;在褪黑素干预组,c-fos表达趋势与缺血再灌注组一致,但表达水平比缺血再灌注组相应时间点低,差异有统计学意义(P <0.05)。结论褪黑素能够减轻脑缺血再灌注后神经元的损伤,降低c-fos的表达,表明褪黑素可能通过调控c-fos的表达在脑缺血再灌注中发挥神经保护作用。     

Effects of fastigial nucleus electrical stimulation on lateral ventricle nestin expression after focal cerebral ischemia/reperfusion in adult rats**★

BACKGROUND： Previous studies have confirmed that fastigial nucleus electrical stimulation can induce endogenous neuroprotective mechanisms and produce wide and long-lasting neuroprotective effects. Nevertheless, the precise mechanisms remain poorly understood. OBJECTIVE： This study was designed to observe the effects of fastigial nucleus electrical stimulation on nestin-positive cell expression in adult rat lateral ventricle after focal cerebral ischemia/reperfusion, as well as neurological functional changes as a function of time. DESIGN： A randomized controlled animal experiment. SETTING： Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University; Chongqing Key Laboratory of Neurology. MATERIALS： This study was performed in the Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University and Chongqing Key Laboratory of Neurology from September 2004 to February 2006. A total of 180 healthy, adult, male Wistar rats, aged 8 weeks old, were provided by the Laboratory Animal Center of Chongqing Medical University. The main reagents and equipments were as follows： rabbit anti-rat nestin monoclonal antibody （Wuhan Boster Company, China）. METHODS： The included male Wistar rats were randomly divided into 5 groups： normal control, sham-operated, model, fastigial nucleus sham-stimulation （sham-stimulation for short）, and fastigial nucleus electrical stimulation （stimulation for short） groups. Six time points （1 hour of ischemia and 1, 3, 7, 14, 21, and 28 days of reperfusion, 6 rats per time point） were allotted to each group. Cerebral ischemia/reperfusion was performed by occlusion to the right middle cerebral artery with suture, followed by suture removal. In the stimulation group, subsequent to reperfusion, the rat left cerebellar fastigial nucleus was immediately subjected to 1 hour of stimulation. After anesthesia, the rat left cerebellar fastigial nucleus was stimulated for 1 hour using a square-wave electronic stimulator with a current in     

硫酸镁对脑缺血再灌注大鼠脑组织Bcl-2表达的影响及神经保护作用

目的探讨硫酸镁对脑缺血再灌注大鼠脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响及脑保护作用。方法将32只大鼠随机分为缺血组(n=15)、硫酸镁组(n=15)和正常对照组(n=2)。采用改良的Pulsinelli法建立脑缺血再灌注大鼠模型;制模后分别给予缺血组和硫酸镁组大鼠腹腔注射生理盐水(1.5 ml/d)及硫酸镁(90 mg/kg.d)。缺血再灌注第1、3、7 d分别观察各组大鼠海马CA1区病理学改变和Bcl-2的表达水平。结果正常对照组大鼠海马CA1区神经细胞数量多,排列整齐。缺血再灌注1 d时,缺血组及硫酸镁组大鼠海马CA1区神经元均未见明显死亡;3 d时,缺血组海马CA1区神经元可见少量死亡,残存神经细胞呈较严重缺血性改变,硫酸镁组海马CA1区神经元无明显死亡;7 d时,缺血组海马CA1区神经元大部分死亡,伴有小胶质细胞增生,硫酸镁组仅见部分神经元死亡。与缺血组相比,硫酸镁组神经元受损程度较轻,坏死区较小。硫酸镁组缺血再灌注各时间点大鼠Bcl-2阳性细胞较缺血组均明显增加(均P<0.05)。结论硫酸镁能上调脑组织Bcl-2的表达,对缺血再灌注大鼠的脑组织有明显的保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl-2蛋白在大脑皮质的表达

目的观察bcl-2蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注(FCIR)后表达的变化。方法大脑中动脉内线栓法(MCAO)建立缺血再灌注(IR)模型,用免疫组化(SP)法观察bcl-2蛋白不同时间的表达。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化。结果脑缺血2h再灌注2hbcl-2表达升高(P<0.01),IR6h达到高峰,IR12h开始下降。结论随着脑缺血再灌注时间延长脑损伤加重,bcl-2蛋白表达减少,bcl-2蛋白表达增加对细胞存亡有重要意义。