脑缺血对大鼠皮层及海马铜蓝蛋白表达的影响

目的 探讨脑缺血对大鼠皮层及海马中铜蓝蛋白(Ceruloplasmin,Cp)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠60只,随机分为脑缺血1、3、7、28 d组和假手术对照组,每组各12只.实验组结扎双侧颈总动脉造成大鼠脑缺血,假手术对照组仅分离出双侧颈总动脉但不结扎.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测皮层及海马组织中Cp mRNA的表达,免疫组织化学观察皮层及海马组织中Cp的表达.结果 大鼠皮层和海马均表达Cp mRNA.皮层和海马Cp mRNA的表达随缺血时间的延长逐渐降低,缺血1、3、7、28 d组表达均低于假手术组(P＜0.01).脑组织脉络丛细胞、室管膜细胞、皮层和海马的星形胶质细胞、血管内皮细胞均表达Cp;而皮层和海马的锥体细胞和颗粒细胞均不表达Cp.缺血1 d组皮层及海马Cp表达与对照组差异不显著(P＞0.05);缺血3 d组皮层和海马Cp表达低于假手术组(P＜0.05);缺血第7、28 d组Cp表达减少极为显著(P＜0.01).脑缺血大鼠皮层和海马中铁含量与Cp的表达呈负相关,相关系数分别为-0.831(P＜0.01)和-0.809(P＜0.01).结论 脑缺血可诱导大鼠皮层及海马中Cp表达降低.脑缺血后Cp表达减少可能参与了脑缺血引起的铁含量升高及神经元铁沉积的过程.     

脑缺血小鼠额叶皮层和海马组织cAMP水平的变化

目的观测缺血性小鼠额叶皮层和海马组织环磷酸腺苷（cAMP）水平，探讨脑缺血发病的分子生物学机制。方法通过双侧颈总动脉线结、连续3次缺血一再灌注制作脑缺血动物模型。并设立假手术组；术后29、30d分别测试学习和记忆成绩；应用放射免疫法检测小鼠额叶皮层和海马组织cAMP水平。结果与假手术组比较，模型组学习和记忆成绩均降低（P〈0．05），且额叶皮层和海马组织cAMP水平也降低（P〈0．05）。结论额叶皮层和海马组织cAMP水平降低可能参与了脑缺血的分子生物学发病机制。     

沙鼠脑缺血再灌注后PHF-1和58K-9表达的变化及美满霉素干预的影响

目的研究沙鼠脑缺血再灌注后脑内磷酸化的Tau蛋白（PHF-1）和高尔基体表面蛋白标记抗体（58K-9）表达的变化及美满霉素干预对它们表达的影响。方法采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作沙鼠脑缺血再灌注模型；50只沙鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、美满霉素干预组（美满霉素干预＋缺血再灌注）；美满霉素干预组的沙鼠在实验前1d开始腹腔注射美满霉素（剂量为45mg／kg，Bid）；缺血再灌注组、美满霉素干预组分别在缺血再灌注（IR）后6h、1d、3d、7d的各时间点分批处死动物，快速取脑组织制作标本，采用免疫组织化学方法检测各组沙鼠脑内PHF-1、58K-9的表达水平。结果（1）正常对照组与假手术组沙鼠脑组织中可见少量PHF-1的阳性表达，2组比较无差别（P〉0．05），且阳性信号主要位于神经元和胶质细胞胞浆中；缺血10min分别再灌注3d、7d后脑组织中PHF-1表达增加，7d组表达高于3d组；3、7d组与正常对照组及假手术组比较差异有显著性（P〈0.01）；（2）正常对照组与假手术组沙鼠脑组织中可见大量58K-9的阳性表达，2组比较无差别（P〉0．05），且阳性信号主要位于神经元和胶质细胞胞浆中；缺血10min分别再灌注3、7d后脑组织中58K-9表达减少，7d组表达低于3d组；3、7d组与正常对照组及假手术组比较差异有显著性（P〈0．01）；（3）美满霉素干预组在缺血t0min再灌注6h、1、3、7d时沙鼠脑组织中PHF-1、58K-9表达趋势同缺血再灌注组，但3、7d组PHF-1阳性率明显低于缺血再灌注组，58K-9阳性率高于缺血再灌注组，相同时间点比较差异有显著性（P〈0.01）。结论（1）沙鼠脑缺血再灌注后脑组织PHF-1表达增高，提示Tau蛋白发生高度磷酸化改变；58K-9表达减少，提示高尔基体结构与功能的损坏；（2）美满霉素干预可使沙鼠脑缺血再灌注后脑组     

白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响

目的研究白藜芦醇（Res）对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响。方法采用戊四氮（PTZ）腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以Res（15mg／kg·d）灌胃干预10d;采用酶联免疫吸附法测定脑脊液、血清S100B蛋白含量,海马标本行Nissl染色。结果经28d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组（P〈0．05）。海马Nissl染色提示Res干预对大鼠海马CAl、CA3区神经元有保护作用（P〈0．05）,而对齿状回保护作用不明显（P〉0．05）。Res干预组大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量低于癫痫模型组、二甲基亚砜组（P〈0．05）。结论Res降低PTZ致痫大鼠脑脊液、血清SIOOB蛋白含量,或许减缓癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用。     

血管性痴呆大鼠学习记忆障碍及脑组织生长抑素的变化

目的探讨生长抑素（SS）参与血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆障碍的作用机制。方法采用双侧颈总动脉结扎法制备慢性前脑缺血动物模型，随机分为假手术组（S）、模型组（M）。造模2月后进行水迷宫试验，观察2组大鼠空间学习记忆能力的差异，应用免疫组化方法检测造模2月后VD大鼠海马及颞叶皮层生长抑素表达变化。结果与假手术组比较，大鼠水迷宫学习记忆能力在造模2月后差异有显著性意义（P〈0．05），大鼠海马及颞叶皮层SS表达在造模2月后降低（P〈0．05）。结论脑组织SS表达降低，导致血管性痴呆大鼠学习记忆障碍。     

局灶性脑缺血预适应后大鼠血浆皮质醇含量变化

目的探讨脑缺血预适应后糖皮质激素与皮层神经元损伤的关系。方法利用线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型，通过放射免疫方法测定脑缺血再灌注后各组大鼠再灌注3h、12h、24h和48h各时点的血浆皮质醇含量变化。结果缺血组和预缺血组在再灌注4个时点糖皮质激素含量均有增高，同对照组、假手术组相比有显著差异（P〈0．01）。预缺血组与缺血组相比，预缺血组在再灌注4个时点糖皮质激素含量低于缺血组（P〈0．05）。HE染色皮层神经元损伤显著，预缺血组明显轻于缺血组。结论脑缺血预适应导致缺血再灌注后血浆糖皮质激素含量降低，这可能是其减轻皮层神经元损伤的原因之一。     

阿斯匹林干预对沙鼠脑缺血再灌注后NF-κB、MCP-1表达的影响

目的 通过研究阿斯匹林干预对沙鼠脑缺血再灌注后NF-κB、MCP-1表达的影响，旨在进一步探讨阿斯匹林在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 将50只健康蒙古沙鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血再灌注组（I／R组）、阿斯匹林干预组；夹闭双侧颈总动脉10min后松夹，建立沙鼠全脑缺血再灌注模型；用免疫组化法检测缺血脑组织NF-κBp65、MCP-1的表达。结果缺血再灌注后6h～7d NF-κBp65的表达量显著高于正常对照组及假手术组（P〈0．01），且出现MCP-1阳性表达；同I／R组比较，阿斯匹林干预组在缺血再灌注后6h、1d、3d、7d NF-κBp65与MCP-1表达量均下降（P〈0．05）。结论 阿斯匹林能够下调NF-κB、MCP-1的表达而减轻脑缺血再灌注损伤。     

氟西汀预处理对大鼠脑缺血再灌注海马区BDNF和bcl-2表达的影响

目的探讨氟西汀对大鼠缺血后再灌注海马的影响及可能机制。方法将40只Wistar大鼠随机等分成4组：①单纯用药组（氟西汀灌胃20d）；②正常对照组（氯化钠灌胃20d）：③术前用药组（氟西汀灌胃20d制作脑缺血再灌注模型）；④单纯手术组（氯化钠灌胃20d制作脑缺血再灌注模型）．于实验终点进行苏木精-伊红染色及免疫组化检查．检测bcl-2和脑源性神经营养因子（BDNF）表达情况。结果与正常对照组比较，单纯用药组bcl-2检测指标无显著性差异（P〉0．05），BDNF表达显著性增多（P〈0．05）。术前用药组与单纯手术组比较，bcl-2表达无显著性差异（P〉0．05），BDNF表达显著性增高（P〈0．05）。结论氟西汀可以诱导增加BDNF表达．但不增加bcl-2的表达．从而减轻缺血后的再灌注损伤．产生神经保护作用。     

大鼠急性脑缺血时尼莫地平对内皮衍生因子的影响

尼莫地平是一种钙离子拮抗剂，现巳用于急性脑缺血的治疗。本文通过观察大鼠急性脑缺血模型及假手术组循环中及脑组织内一氧化氮（NO）、内皮素（ET1）水平，并观察尼莫地平对大鼠脑缺血模型循环中及脑组织的NO、ET1水平的影响，发现模型组循环中的NO水平较假手术组有下降趋势，但无明显统计学差异（P＞0．05），ET1的水平较假手术组显著升高（P＞0．05）;脑组织中NO、ET1含量均较假手术组显著升高（P＜0．05）。尼莫地平具有显著升高急性脑缺血大鼠循环中NO，显著降低循环中ET1，显著降低脑组织中NO、ET1的水平，说明尼莫地平具有促进脑缺血时大鼠的脑部供血，保护由于脑缺血引起的脑组织损害。     

Celecoxib对糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织NF-kB和ICAM-1表达的影响

目的探讨celecoxib对糖尿病大鼠脑缺血再灌注后脑组织中NF-xB和ICAM-1表达的影响。方法采用SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）和线栓法制作糖尿病大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型;大鼠分为假手术组（S组）、脑缺血再灌注生理盐水组（NS组）、celecoxib低剂量组（LCIR组）和高剂量组（HCIR组）,分别于缺血后30rain给予生理盐水或celecoxib溶液灌胃,再灌注后6、12、24、48h将大鼠断头取脑,免疫组化法检测脑组织中NF-kB和ICAM-1的表达水平。并对大鼠进行神经功能缺损评分。结果NS组、LCIR组、HCIR组大鼠神经功能缺损评分有显著差异（P〈0．05）;NS组、LCIR组、HCIR组NF-kB阳性细胞及ICAM-1阳性微血管主要表达于缺血周边区,较S组表达明显增强（P〈0．05）,LCIR组、HCIR组NF_KB阳性细胞表达率及ICAM-1阳性微血管数较NS组减少（P〈0．05）,LCIR组、HCIR组之间未见明显差异（P〉0．05）,每组不同时间点之间NF-gB阳性细胞表达率有明显差异（P〈0．05）以及它们之间的ICAM-1阳性微血管数也有明显差异（P〈0．05）。结论celecoxib可能通过抑制糖尿病大鼠脑缺血一再灌注后脑组织中NF-kB和ICAM-1的表达而减轻神经功能缺损,从而发挥脑保护作用。     

慢病毒介导bFGF基因修饰的骨髓基质细胞对脑梗死后血管新生的影响

目的探讨慢病毒介导碱性成纤维细胞生长因子（basic fibrobla stgrowth factor,bFGF）基因修饰的骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）对脑梗死后血管新生的影响。方法利用慢病毒载体介导bFGF基因修饰BMSCs,获得稳定转染bFGF的BMSCs。脑梗死后1d立体定向移植至梗死灶周围。在MCAO术前及术后1、3、7、14d进行神经功能评分。术后14d股静脉注射异硫氰酸荧光素右旋糖酐（FITC-dextran）标记微血管,结合共聚焦显微镜和3DDoctor3．5版软件分析梗死灶周围区微血管的直径、面积及血管分支数目。结果bFGF-BMSCs组术后3d神经功能恢复明显优于对照组与BMSCs组（P〈0．05）,BM—SCs组和bFGF-BMSCs组术后7d及14dmNSS评分显著低于对照组（P〈0．05）,而且bFGF-BMSCs组神经功能恢复好于BMSCs组（P〈O．05）。bFGF-BMSCs组微血管直径、分支数目及面积显著性高于对照组（P〈0．01）和BMSCs组（P〈0．05）。结论bFGF修饰的B^假瞄能更好地促进脑梗死后神经功能恢复及血管新生。     

线粒体通透性转换孔在缺血预处理脑保护中的作用及机制

目的观察线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)在缺血再灌注及缺血预处理脑保护中的作用。方法将体外培养8 d的海马神经元分为五组,正常对照组(A组),缺血再灌注组(B组),缺血预处理+缺血再灌注组(C组),苍术苷+缺血再灌注组(D组),缺血预处理+苍术苷+缺血再灌注组(E组)。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位,Western-blot检测Bcl-2,Bax的表达水平。结果与A组比较,其余四组线粒体膜电位均降低,神经元凋亡率升高(P<0.05);与B组比较,C组线粒体膜电位升高,神经元凋亡率升高,Bcl-2表达上调,Bax表达下调(P<0.05);与C组比较,E组粒体膜电位降低,神经元凋亡率升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05)。结论缺血预处理能有效减轻海马神经元缺血再灌注损伤,抑制缺血再灌注后神经细胞凋亡,其机制可能与抑制MPTP的开放有关。     

亚低温联合丁苯肽对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察亚低温联合丁苯肽对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法制备SD大鼠MCAO模型,梗死2 h后再灌注,并分为假手术组、模型组、丁苯肽组及亚低温联合丁苯肽组（联合组）,再灌注24 h后进行神经功能缺损评分检测脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）浓度、病理变化及大脑缺血面积并比较.结果 （1）丁苯肽组与联合组的神经功能缺损评分明显低于模型组,且联合组的神经功能缺损评分明显低于丁苯肽组（P＜0.01）.（2）与假手术组相比,模型组SOD活性降低,MDA含量增加（P＜0.01）;与模型组相比,丁苯肽组与联合组SOD活性增高,MDA含量降低（P＜0.01）,且联合组与丁苯肽组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.（3）模型组、丁苯肽组及联合组病理学检查均较假手术组差,但联合组好于丁苯肽组好于模型组（P＜0.01）.（4）模型组、丁苯肽组及联合组脑缺血面积较假手术组增大,而联合组＜丁苯肽组＜模型组,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 亚低温联合丁苯肽对脑缺血再灌注损伤有较好的保护作用.     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2表达及细胞凋亡的影响.方法 将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照Zea Longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元Bcl-2的表达通过免疫组化法来测定,并采用TUNEL法原住标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化.结果 缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P＜0.01),TUNEL阳性细胞数较假手术组显著增多(P＜0.01);给予胰岛素处理后,Bcl-2的表达较缺血组显著增强(P＜0.01),TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少(P＜0.01),但两者均显著高于假手术组(P＜0.01).结论 短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元中Bcl-2的表达增加,抗细胞凋亡;胰岛素可上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达,发挥神经保护作用.     

亚低温对局灶性脑缺血大鼠模型C3表达的影响

目的观察亚低温（32～35℃）对局灶性脑缺血后大鼠脑组织C3表达的影响。方法 100只大鼠随机分成假手术组、常温组和亚低温组,各组根据观察时间点分为术后6h、1d、2d、3d、7d五个亚组。建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,应用冰袋降温的方法使亚低温组大鼠肛温10min内降至（33℃±1℃）,维持低温6h后复温。假手术组和常温组大鼠保持肛温（37℃±0.5℃）。在各时间点采用神经缺陷评分对各大鼠进行神经功能评分后断头取脑,行苏木素伊红染色观察脑缺血病理学改变,免疫组织化学染色观察不同时间点C3表达情况。结果假手术组大鼠清醒后无神经功能障碍,常温组及亚低温组大鼠清醒后均出现左侧Horner征及不同程度右侧前肢为重的偏瘫,两组大鼠神经功能缺损3d时最明显,7d时均有所减轻。除6h外各时间点亚低温组大鼠神经功能缺损评分均较常温组低（P〈0.05）,各时间点亚低温组大鼠脑组织病理学损伤较常温组轻。在各时间点假手术组大鼠脑组织中C3可见少许表达,各组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。常温组和亚低温组大鼠缺血侧脑组织于缺血后6h补体C3阳性细胞数均开始增加,至3d均达到高峰,到7d时C3阳性细胞数明显减少,与常温组相比,亚低温组各时间点缺血侧脑组织C3表达明显减少（P〈0.05）。结论脑缺血时,缺血侧脑组织C3有表达,亚低温可使C3表达减少。亚低温可能通过降低C3的表达减轻补体级联反应起脑保护作用。     

替普瑞酮诱导AD模型大鼠海马HSP70表达及其神经保护作用的研究

目的 研究替普瑞酮（Geranylgeranylacetone，GGA）诱导阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）模型大鼠海马热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP70）表达及其对AD大鼠的神经保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为替普瑞酮组、模型组与生理盐水组，双侧海马注射Aβ1-42。建立阿尔茨海默病大鼠模型，替普瑞酮组给予替普瑞酮800mg·kg^-1·d^-1灌胃，余两组给予等量生理盐水灌胃；术后1d、7d、14d、21d并于Y迷宫行为学测试后处死大鼠；采用western-blot方法检测各组大鼠海马HSP70表达的变化，HE染色观察海马神经元形态学改变，TUNEL法检测海马神经元凋亡。结果术后14d、21d模型组大鼠学习记忆能力较生理盐水组明显减退（P〈0．05），替普瑞酮组较模型组明显改善（P〈0．05）；术后7d、14d、21d模型组大鼠海马HSP70表达较生理盐水组逐渐减少（P〈0．05），替普瑞酮组HSP70表达明显增加（P〈0．05）；术后21d模型组大鼠海马CA1区神经元结构紊乱，细胞减少，凋亡细胞较生理盐水组明显增加（P〈0．01），替普瑞酮组凋亡细胞较模型组显著减少（P〈0．05），细胞形态学改变减轻。结论替普瑞酮能够诱导AD模型大鼠海马HSP70表达，减少大鼠海马神经元凋亡而产生神经保护作用，改善大鼠的学习记忆能力。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因-1 mRNA的表达

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况。结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达。缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强。再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达最高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组。(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P<0.01。动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P<0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P<0.01。结论缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达。     

iASPP在大鼠脑缺血再灌注中的表达及其意义

目的 观察p53凋亡刺激蛋白（apoptosis stimulating protein of p53,ASPP）家族的抑制因子（inhibitorymember of the ASPP family,iASPP）在大鼠脑缺血再灌注后的表达及其意义。方法 48只清洁级、成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（8只）和脑缺血再灌注组（40只）。脑缺血再灌注组又分为缺血2h再灌注4h、12h、24h、48h和72h 5个时间点,其中每个时间点8只大鼠。苏木素-伊红染色测定脑梗死体积;原位末端转移酶标记技术检测半暗带细胞凋亡情况;免疫印迹法测定半暗带iASPP的表达变化。结果 脑缺血再灌注4h组和24h组的凋亡细胞阳性率与假手术组存在统计学差异（P <0.01）。脑缺血再灌注组的脑梗死体积百分比与假手术组相比具有统计学意义（P <0.05）。与假手术组相比,在脑缺血再灌注12h时iASPP表达开始下降（P <0.01）,再灌注24h降至最低（P <0.01）,再灌注48h开始回升（P <0.01）。结论 在脑缺血再灌注后,缺血半暗带凋亡细胞显著增多,iASPP表达下降,提示在脑缺血再灌注中iASPP的表达下降可能在细胞凋亡的发生中发挥重要作用,其表达上调可能具有神经保护作用。