美满霉素对帕金森病细胞凋亡模型保护作用的研究

目的探讨美满霉素(MC)对1甲基4苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病细胞凋亡模型保护作用的机制。方法将不同浓度(10、50、250、500μmol/L)MPP+加入培养的PC12细胞中,选择最适当浓度的MPP+建立多巴胺神经元凋亡模型(MPP+组);通过四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测经不同浓度(0、10、50、100、200μmol/L)MC预处理后多巴胺神经元凋亡模型的活性,以此筛选出具有最佳保护作用MC浓度建立MC+MPP+组;用电泳法、流式细胞术和逆转录聚合酶链式反应分别检测MPP+组、MC+MPP+组细胞的凋亡率,以及此2组细胞caspase3mRNA的表达,并与空白对照组比较。结果(1)在MPP+为10μmol/L时可见细胞凋亡最典型的梯状DNA条带,以此浓度建立多巴胺神经元凋亡模型(MPP+组);用100μmol/LMC预处理的MPP+组细胞活性最高(P<0.05),以此作为此后实验用MC浓度。(2)MC+MPP+组细胞凋亡率及caspase3mRNA的灰度比值分别为(22.83±2.10)%及68.08±1.14,极显著低于MPP+组的(45.89±2.28)%及86.50±1.43(均P<0.01),但仍明显高于空白对照组的(11.05±1.02)%及53.75±1.23(均P<0.05)。结论MC可能通过下调caspase3mRNA表达保护MPP+诱导的PC12细胞凋亡。     

雌激素对MPP+诱导的PC12细胞损伤过程中细胞凋亡相关基因的研究

目的　探讨雌激素 (Estrogen ,E)在 1-甲基 - 4 -苯基吡啶离子 (MPP+ )对PC12细胞损伤过程中对神经细胞的作用机制 ,特别是雌激素与细胞凋亡的关系。方法　用半定量逆转录PCR(RT PCR)检测细胞凋亡过程中促进细胞增殖基因Bcl x和促进细胞死亡基因白细胞介素 1β转换酶 (interleukin 1βconverten zyme ,ICE)的有效蛋白mRNA的表达水平 ,比较各组的差异。 结果　雌激素组的Bcl x的有效蛋白mRNA的表达水平显著高于对照组、MPP+ 组及E +MPP+ 组 (P <0 .0 5 ) ;ICE的有效蛋白mRNA的表达水平显著低于对照组、MPP+ 组及E +MPP+ 组 (P <0 .0 5 )。E +MPP+ 组Bcl x的有效蛋白mRNA的表达水平显著高于MPP+ 组 ;ICE的有效蛋白mRNA的表达水平显著低于MPP+ 组 (P <0 .0 5 )。E +MPP+ 组和对照组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　雌激素对于MPP+ 诱导的ICE增加和Bcl x降低可起一定的拮抗作用 ,从而在一定程度上抑制了凋亡的发生。     

MPP~+重新启动多巴胺能神经元细胞周期的作用及机制

目的研究1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)重新启动多巴胺能神经元细胞周期的作用及机制。方法使用MPP+处理神经元样分化的PC12细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测早期凋亡细胞和细胞周期分布,免疫细胞化学检测ERK/MAPK通路活化水平。结果经MPP+处理后,细胞活力呈浓度依赖性下降,经25、50、75、100、150 mmol/L MPP+处理24 h后细胞存活率分别下降至对照组的(97.32±2.41)%(、67.69±3.03)%、(56.00±3.12)%、(47.23±2.55)%、(40.00±2.46)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。经75 mmol/L MPP+处理后出现早期凋亡细胞,随处理时间延长,细胞凋亡率逐渐增加,其处理4、8、16和24 h后细胞凋亡率分别为(7.26±3.43)%、(8.34±3.55)%(、20.04±2.64)%和(28.46±2.35)%(P<0.01)。同时细胞周期中G0/G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多(P<0.01),细胞内ERK1/2通路活化。结论MPP+可通过活化ERK1/2通路重新启动多巴胺神经元的细胞周期,并诱导多巴胺能神经元凋亡。     

美满霉素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的在离体细胞培养中探讨美满霉素(Minocycline,MC)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )诱导的帕金森病细胞凋亡模型的保护作用.方法将MC或MPP 加入培养的PC12细胞中,建立多巴胺神经元凋亡模型,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞代谢活性,电泳法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果MPP 浓度为10μmol/L时建立多胺神经元凋亡模型;MC 100 μmol/L预处理可明显升高MPP 处理的PC12细胞活性;MC MPP 组细胞凋亡率显著低于MPP 组(P＜0.01),但仍明显高于阴性对照组(P＜0.05).结论MC对MPP 诱导的细胞凋亡有一定的保护作用.     

α-触核蛋白在帕金森病发病机制中作用的研究

目的　探讨α 触核蛋白的异常聚集在帕金森病发病机制中的作用。方法　以PC12细胞为多巴胺能神经元的细胞模型 ,应用Hoechst 332 5 8核染色法、流式细胞术 (FCM)、TdT末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)等方法 ,检测α 触核蛋白片段 (NAC ,thenon β amyloidcomponent)聚合物对PC12细胞凋亡的影响。 结果　NAC聚合物 10、15、2 0 μmol/L浓度组 ,Hoechst332 5 8核染色法可见染色质浓聚、核固缩和凋亡小体 ;FCM显示凋亡峰出现 ,3个组的凋亡率分别为 (19 75± 1 87) % ,(30 37± 2 35 ) % ,(4 3 1± 5 4 1) % ,较对照组 (3 5 2± 0 4 6 ) %显著增高 (P均小于 0 0 5 ) ,3个组两两之间也存在差异 (F =6 4 2 9,P <0 0 1) ;TUNEL可检测到凋亡细胞DNA发生双链断裂。对照组和 2 5 μmol/L浓度组未发现凋亡。 结论　一定浓度的NAC聚集物可以诱导PC12细胞发生凋亡 ,提示体内发现的α 触核蛋白异常聚集可能通过诱导多巴胺能神经元发生凋亡这一机制参与该病的发病。     

IGF-1对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法以250μmol/L的MPP+损伤PC12细胞作为帕金森病(PD)细胞模型,实验分组如下:空白对照组、MPP+组,IGF-1+MPP+组和抑制剂组。抑制剂组再分为:(1)空白对照组;(2)MPP+组;(3)IGF-1组;(4)IGF-1+MPP+组;(5)MPP++LiCL组;(6)IGF-1+MPP++LiCL组。孵育24h后采用AO-EB法检测细胞凋亡率;采用MTT法检测细胞存活率;孵育4h之后采用Western Blot免疫印迹法检测糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、phospho-GSK-3β蛋白表达。结果(1)100nmol的IGF-1对MPP+处理的PC12细胞有保护作用,减少了MPP+所致的细胞凋亡。(2)LiCL起到了与IGF-1相似的对PC12细胞的保护作用。(3)总GSK-3β含量各处理组没有太大改变,但磷酸化的GSK-3β含量IGF-1组高于与MPP+单独处理组。结论IGF-1可减少MPP+所致的细胞凋亡,其保护作用与上调磷酸化的GSK-3β的表达相关。     

Dieldrin对PC12细胞的增殖及酪氨酸羧化酶mRNA表达的影响

目的 :观察有机氯杀虫剂dieldrin对培养的PC12细胞增殖及对其酪氨酸羟化酶mRNA(THmRNA)表达的影响 ,探讨该毒物致帕金森病 (PD)的可能机制。方法 :以MPP+ 为阳性对照 ,用不同浓度 (10 -4 ～ 1mmol·L-1)的MPP+ 和dieldrin分别于预PC12细胞 2 4h后计细胞数 ,并采用半定量逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)方法测定THmRNA表达的改变。结果 :(1)MPP+ 和dieldrin对PC12细胞均有毒性 ,1mmol·L-1的MPP+ 可使细胞数减少至对照组的 45 % (P <0 0 1) ,低于此浓度的MPP+ 对细胞增殖无影响 ;但 0 1mmol·L-1的dieldrin就可使细胞数减少至对照组的 3 0 % (P <0 0 1) ,1mmol·L-1的dieldrin使PC12细胞全部死亡。 (2 )MPP+ 和dieldrin均可降低THmRNA的表达。 0 1mmol·L-1MPP+ 和dieldrin使细胞THmRNA的表达分别下降至对照组的 69 3 % (P >0 0 5 )和 61 7% (P <0 0 1)。结论 :Dieldrin不仅具有与MPP+ 相同的抑制培养的PC12细胞的增殖及THmRNA表达的作用 ,而且其对细胞的毒性强于MPP+ ,提示dieldrin是一种潜在的致PD物质 ,其与PD的关系值得进一步研究     

6—羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡及其可能分子机制

探讨神经毒素 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)诱导PC12细胞死亡本质及其可能分子机制。不同剂量 6 OHDA处理PC12细胞 2 4h后 ,分别用流式细胞仪、透射电镜、TUNEL染色和DNA电泳检测细胞凋亡 ;5 0 μmol/L 6 OH DA处理PC12细胞 2 0h后 ,用RT PCR检测caspase 3表达 ;用westernblot检测Caspase 3p32蛋白酶原的切割。结果如下 :①流式细胞仪检测PC12细胞凋亡百分率 ,对照组为 1.10 %± 1.14% ,30 ,4 0 ,5 0 μmol/L 6 OHDA处理组分别为 4 .73 %± 1.0 6% ,10 .15 %± 1.2 1%和 19.94 %± 2 .5 1% ,较对照组均有显著性差异 (P <0 .0 1)。 4 0 ,5 0 μmol/L 6 OHDA处理组透射电镜、TUNEL染色均证实存在大量凋亡细胞 ;5 0 μmol/L 6 OHDA处理组DNA电泳呈现一定间隔的“梯状”条带。② 5 0 μmol/L 6 OHDA处理组caspase 3mRNA水平增高约一倍 ,并且检测到Cas pase 3p2 0活性片段。本研究提示 6 OHDA能诱导PC12细胞凋亡 ,并呈剂量依赖性 ;激活Caspase 3蛋白酶可能参与 6 OHDA诱导PC12细胞凋亡过程     

促红细胞生成素对1-甲基-4-苯基吡啶损伤的PC12细胞的保护作用(英文)

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞变性损伤的保护作用及机制。方法用MPP+处理PC12细胞制作帕金森病细胞模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测暴露于不同浓度EPO后细胞的活性;流式细胞术与DNA断端原位标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTPnick end labeling, TUNEL)检测各组的细胞凋亡率;免疫印迹法检测不同处理组PC12细胞Bcl-2和Bax的表达,并采用荧光法观察不同处理组PC12细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)与线粒体膜电位水平以及caspase-3活性的变化。结果 MPP+可以使PC12细胞存活率下降,凋亡率增高;同时PC12细胞内ROS增多,线粒体膜电位下降。MPP+还可以明显地提高Bax/Bcl-2比值并激活caspase-3。而EPO可以抑制这些由MPP+引发的改变,并在1 U/mL时发挥最大保护作用。结论 EPO可抑制MPP+诱导的PC12细胞死亡,其作用机制可能与其自身抗氧化和抗凋亡的特性有关。     

肌苷减少高浓度锌损伤的PC12细胞坏死而不是凋亡

目的　探讨高浓度锌损伤后PC12细胞的死亡类型和肌苷对该死亡类型的影响。方法　用MTT比色法测定不同浓度氯化锌(50、100、200、400μmol/L)或肌苷(0. 1、0. 5、1. 0、2. 0mmol/L)作用PC12细胞12h后的存活率;用Hoechst33342 /PI荧光双染色、Annexin V结合实验及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测200μmol/L氯化锌、2. 0mmol/L肌苷作用PC12细胞12h后细胞死亡类型的变化。结果　锌从100μmol/L作用浓度开始可明显降低细胞存活率; 200μmol/L锌可引起(56. 5±7. 2 )%坏死、(24. 4±2. 5 )%的正常和(19. 1±7. 6 )%的细胞凋亡。肌苷从0. 5mmol/L作用浓度开始可显著提高锌损伤的细胞存活率;与单独锌作用相比, 2. 0mmol/L肌苷降低锌引起的坏死细胞数至(27. 9±2. 2)%,而使正常和凋亡细胞数分别增加到(33. 8±2. 8)%和(38. 4±4. 9)%。结论　随锌浓度的增高PC12细胞的存活率逐渐降低,肌苷可浓度依赖性地保护锌致伤的PC12细胞;高浓度锌可造成PC12细胞的坏死和凋亡,但肌苷能降低坏死而不是使细胞凋亡。     

β-七叶皂甙钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注后NF-κB、ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织缺血区不同时间点NF-κB、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达的变化,及β-七叶皂甙钠干预效果.方法 采用大鼠大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作局灶性脑缺血再灌注模型,用免疫组织化学方法观察大鼠脑缺血再灌注不同时间段,NF-κB、ICAM-1、VCAM-1蛋白的表达.并在大鼠于脑缺血前24h、1h及再灌注即刻分别腹腔给予β-七叶皂甙钠5mg/kg,2h MCAO,再灌注24h、48h后取脑,运用TTC染色测算脑梗死体积,免疫组化染色检测NF-κB、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达,分析β-七叶皂甙钠的干预效应.结果 (1)脑缺血后缺血区脑组织NF-κB及ICAM-1、VCAM-1表达均增加,NF-κB于再灌注后12～24h表达达高峰,ICAM-1于再灌注后24h表达达高峰,VCAM-1于再灌注后24～48h表达达高峰.(2)NF-κB的表达与血管内皮ICAM-1、VCAM-1的表达呈正相关.(3)β-七叶皂甙钠能显著降低脑缺血再灌注后24h和48h缺血区NF-κB、ICAM-1及VCAM-1的表达增加.(4)β-七叶皂甙钠能明显减轻脑缺血再灌注后的脑组织损伤,再灌注24h脑梗死体积减少41.8%.结论 (1)脑缺血再灌注后NF-κB、ICAM-1、VCAM-1大量表达,这可能是脑缺血再灌注损伤机制之一.(2)脑缺血后NF-κB的活化可能与微血管内皮细胞ICAM-1、VCAM-1蛋白表达调控有关.(3)β-七叶皂甙钠能够减轻脑缺血后的脑组织损伤,有神经保护作用.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注中1-磷酸鞘氨醇受体1的表达变化

目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注模型1-磷酸鞘氨醇受体1(S1P1)的变化,探索S1P1在脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组、缺血2h再灌注3h组、6h组、12h组、24h组、24h+安慰剂组和24h+FTY720组.应用"线栓法"实现大鼠右侧大脑中动脉闭塞,2h后拔出线栓进行再灌注,并在相应时间点处死大鼠.再灌注24h+安慰剂组和再灌注24h+FTY720组大鼠于再灌注前10min经尾静脉注入安慰剂或S1P受体激动剂FTY720[1mg/(kg·体重)].利用免疫组化方法观察S1P1蛋白表达水平的变化,对再灌注24h+安慰剂组和再灌注24h+FTY720组大鼠进行神经功能评分、梗死体积测定和TUNEL阳性细胞计数.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠梗死灶周围区皮质S1P1的蛋白表达水平明显升高(P<0.05),开始于再灌注后3h,12h达到高峰,24h开始下降.FTY720显著缩小梗死体积,改善神经功能评分,减少TUNEL阳性细胞数量.结论 S1P1在脑缺血再灌注过程中激活,减轻缺血再灌注损伤,发挥脑保护作用.     

糖尿病脑梗死大鼠血管内皮生长因子及其受体表达水平的变化

目的 研究糖尿病脑梗死(DMCI)早期半暗带等值区血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(FLT-1,FLK-1)表达水平的变化.方法 建立DMCI大鼠模型,在脑缺血后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h,采用原位杂交方法测定大鼠大脑缺血半暗带等值区VEGF、FLT-1、FLK-1 mRNA的表达水平;并与无糖尿病的脑梗死(NDMCI)大鼠比较.结果 DMCI组在脑缺血后各时间点脑缺血半暗带等值区VEGF mRNA的表达水平均显著低于NDMCI组(P＜0.05～0.01),FLK-1 mRNA表达水平在脑缺血后12 h显著低于NDMCI组(P＜0.01),FLT-1 mRNA表达水平在脑缺血后各时间点(除6 h)与NDMCI组差异无统计学意义.结论 DMCI早期VEGF和FLK-1 mRNA表达水平降低,这可能是DMCI血管、神经病变重的原因之一.     

Pin1和Bmi1在人类胶质瘤中的表达及其意义

目的 研究人类肽基脯氨酰异构酶(Pin1)和B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点基因(Bmi1)在人类胶质瘤中的表达,并探讨它们与胶质瘤分化程度的关系.方法 制作由WHO Ⅱ级胶质瘤组织30例、WHO Ⅲ级胶质瘤组织19例、WHO Ⅳ级胶质瘤组织21例与正常脑组织13例组成的组织芯片,免疫组化方法检测Pin1和Bmi1的表达情况.结果 Pin1和Bmi1在WHO Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤阳性率分别是(35±3.7)%,(63.7±3.9)%,(77.9±9.2)%和(20.1±5.1)%,(55.1±6.3)%,(61.7±2.7)%,均高于各自正常组(10.7±2.9)%和(7.9±1.3)%,均为P＜0.05.Pin1和Bmi1表达与胶质瘤等级呈正相关.结论 Pin1和Bmi1可能在胶质瘤发生过程中起重要作用.Pin1和Bmi1的表达检测可能成为胶质瘤的有效诊断指标.     

KISS-1和MTA-1在侵袭性垂体腺瘤中的表达

目的 研究肿瘤转移抑制基因KISS-1和转移相关基因MTA-1在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达情况,并分析两者与垂体腺瘤侵袭性的关系.方法 采用免疫组化SP法对31例侵袭性垂体腺瘤和28例非侵袭性垂体腺瘤组织标本KISS-1和MTA-1的蛋白表达进行检测,RT-PCR法对KISS-1和MTA-1mRNA的表达进行检测,分析它们在侵袭组和非侵袭组中的表达差异.结果 59例垂体腺瘤患者中,侵袭性垂体腺瘤组KISS-1的蛋白阳性率和mRNA表达均低于非侵袭性垂体腺瘤组(χ2=4.88,t=12.05,P<0.05),MTA-1的蛋白阳性率和mRNA表达均高于非侵袭性腺瘤组(χ2=5.43,t=12.99,P<0.05).结论 在侵袭性垂体腺瘤组织中KISS-1表达下调、MTA-1表达上调,提示可能与垂体腺瘤的侵袭性密切相关.     

The Tyr-MIF-1 family of peptides

A review of research on the Tyr-MIF-1 family of peptides is presented with emphasis on Tyr-MIF-1 and its structure, passage through the blood-brain barrier, and both opiate antagonist and agonist properties. Family members MIF-1, Tyr-W-MIF-1 and Tyr-K-MIF-1 are also included.     

The Tyr-MIF-1 family of peptides

A review of research on the Tyr-MIF-1 family of peptides is presented with emphasis on Tyr-MIF-1 and its structure, passage through the blood-brain barrier, and both opiate antagonist and agonist properties. Family members MIF-1, Tyr-W-MIF-1 and Tyr-K-MIF-1 are also included.     

Dickopff-1的真核表达载体构建及其对SHG44的作用

目的 构建Diekopff-1(DKK-1)的真核表达质粒,研究SHG44转染DKK-1并经BCNU处理后其生物学特性的变化.方法 将纯化扩增的人DKK-1与真核表达载体peDNA3.1连接后转化人大肠杆菌DH5α感受态扩增重组,以LipofectamineTM2000介导将重组质粒转染SHG44细胞,经G418筛选后进行鉴定.BCNU处理转染DKK-1基因后的SHG44细胞,流式细胞仪检测细胞特性变化.结果 扩增获得的816 bp特异片段,重组质粒经鉴定及测序分析结果 完全一致.重组载体转染SHG44细胞经G418筛选后,转染细胞在DNA、mRNA、蛋白水平均有DKK-1的表达.BCNU处理后的未转染、空质粒转染、重组质粒转染的三组SHG44细胞,平均凋亡率分别为1.0%、1.4%、8.0%.结论 本实验成功构建了pcDNA3.1-DKK-1真核表达质粒,并建立稳定表达DKK-1蛋白的胶质瘤细胞株(SHG44-DKK-1).转染DKK-1能增强SHG44对BCNU的敏感性,促进肿瘤细胞的凋亡.     

Magnetic resonance imaging - a method of studying the size and asymmetry of the planum temporale

The planum temporale is a triangular region on the upper surface of the temporal lobe. This area of the brain is important for language processing and shows a left-right asymmetry of size in most brains. Particular interest has been focused on the size and asymmetry of the planum temporale in brains of individuals with developmental dyslexia. Magnetic resonance imaging (MRI) is a method that produces excellent morphological details of organic structures. We have developed an MRI method of studying the size and asymmetry of the planum temporale in human brains. Because of considerable variation of anatomical landmarks in this cortical region of the brain, an evaluation of asymmetry is not possible in all brains. Furthermore, our experience with this method indicates that any indirect imaging technique of studying asymmetry of the planum temporale must be evaluated with caution. With this in mind, however, MRI may give valuable anatomical information about the planum temporale in individuals with anomalous language function.