GABA对体外培养大鼠神经元GABA_A受体亚单位mRNA表达的影响

目的观察γ-氨基丁酸(GABA)对体外大鼠培养神经元GABAA受体亚单位mRNA表达的影响,探讨肝性脑病(HE)发病机制。方法采用原位杂交技术,观察GABA对体外培养新生大鼠神经元GABAA受体亚单位α1β1γ2mRNA表达的改变。结果与对照组相比,GABA组神经元GABAA受体亚单位α1及γ2(增幅14%,P<0.01)的mRNA表达显著上升,亚单位β1的mRNA表达显著减少(降幅11%,P<0.05)。结论GABA可通过影响GABAA受体亚单位的表达发挥其对肝性脑病的致病作用。     

氨中毒对体外培养大鼠神经元GABA_A受体亚单位mRNA表达的影响

目的观察氨中毒对体外大鼠培养神经元GABAA受体亚单位mRNA表达的影响,探讨肝性脑病(HE)发病机制。方法采用原位杂交技术,观察氨对体外培养新生大鼠神经元GABAA受体亚单位α1、β1及γ2mRNA表达的改变。结果与对照组相比,氨中毒神经元GABAA受体亚单位α1(增幅18%,P<0.05)、γ2(增幅23%,P<0.01)的mRNA表达显著上升,亚单位β1的mRNA表达无明显改变。结论氨可通过影响GABAA受体亚单位的表达发挥其对肝性脑病的致病作用。     

左旋多巴治疗对实验性帕金森病大鼠黑质纹状体TNF-α表达的影响

目的 研究左旋多巴(L-dopa)治疗对实验性帕金森病(PD)大鼠黑质纹状体肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响.方法 黑质定位注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备偏侧PD大鼠模型,经50～100 mg/kg体重L-dopa灌胃治疗4周后,检测双侧额叶皮质、黑质和纹状体区域TNF-α的表达.结果 6-OHDA损毁侧黑质和纹状体TNF-α含量和阳性细胞面密度分别显著高于健侧(均P<0.05).损毁侧与健侧TNF-α含量的比率随L-dopa治疗用量的增加而增高,且均显著高于对照组(P<0.05).结论 L-dopa治疗进一步加剧了PD大鼠黑质纹状体区域TNF-α的高表达.     

抗帕Ⅰ号方剂对帕金森病大鼠纹状体多巴胺受体的影响

目的探讨抗帕Ⅰ号方剂对帕金森病(PD)大鼠纹状体多巴胺D1(DR1)、D2受体(DR2)表达的影响.方法 6-羟基多巴胺损毁制备偏侧PD大鼠模型,PD大鼠分为4组,分别进行抗帕Ⅰ号方剂、左旋多巴甲酯/苄丝肼、左旋多巴甲酯/苄丝肼/抗帕Ⅰ号方剂和生理盐水灌胃治疗4周,观察大鼠行为学变化;RT-PCR检测纹状体DR1、DR2受体的表达.结果抗帕Ⅰ号方剂联合左旋多巴治疗使PD大鼠产生稳定的对侧旋转行为;左旋多巴治疗后使PD大鼠在盐酸去水吗啡诱发后产生逐步增加的对侧旋转行为;联合抗帕Ⅰ号方剂及左旋多巴治疗可使盐酸去水吗啡诱发的对侧旋转次数减少.联合左旋多巴及抗帕Ⅰ号方剂治疗后损毁侧纹状体DR1 mRNA表达较对照组、抗帕Ⅰ号方剂组增强(P<0.05),而DR2 mRNA表达较对照组、抗帕Ⅰ号方剂组减弱(P<0.05).结论联合抗帕Ⅰ号方剂及左旋多巴治疗可改善PD大鼠行为学,但单独应用抗帕Ⅰ号方剂对多巴胺受体表达无明显影响,且抗帕Ⅰ号方剂无明显受体激动剂的作用.     

深部脑刺激丘脑底核治疗帕金森病大鼠脑中钙调蛋白的变化

目的 研究慢性高频电刺激帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠丘脑底核治疗PD的机制.方法 通过6-羟基多巴立体定向注射至大鼠中脑前脑束建立偏侧PD动物模型,对造模成功的PD大鼠模型丘脑底核进行高频电刺激,观察高频电刺激对PD大鼠行为的影响,并用蛋白印迹法检测纹状体酪氨酸羟化酶(TH)、钙调蛋白Calbindin-28和突触前膜囊泡蛋白(synaptophysin)的表达情况.此外,对接受慢性高频电刺激的6-羟基多巴损伤纹状体双侧PD大鼠的脑片进行免疫组化染色,检测黑质Calbindin-28和突触前膜囊泡蛋白的表达情况.结果 (1)高频电刺激偏侧PD大鼠丘脑底核可使阿朴吗啡诱导的旋转行为减少31%;(2)偏侧PD大鼠损伤侧纹状体内已无TH表达,慢性高频电刺激同侧丘脑底核对纹状体TH缺失无逆转,但增加健纹状体内TH表达量78.6%±9.5%;(3)偏侧PD大鼠损伤侧纹状体内Calbindin-28表达量增加75.4%±15.0%,慢性高频电刺激使其表达量减少43.0%±7.1%;(4)慢性高频电刺激亦显著抑制双侧PD大鼠黑质Calbindin-28表达:假手术大鼠、PD大鼠以及慢性高频电刺激后PD大鼠黑质致密部Calbindin-28阳性神经元分别为74.5±10.2、75.7±15.6和33.1±7.8;(5)慢性高频电刺激未影响黑质和纹状体内突触前膜囊泡蛋白的表达.结论 深部脑刺激治疗PD的机制与调节黑质和纹状体内钙调蛋白Calbindin-28和TH表达量有关.     

左旋多巴治疗对实验性帕金森病大鼠黑质纹状体TNF—a表达的影响

目的　研究左旋多巴 (L - dopa)治疗对实验性帕金森病 (PD)大鼠黑质纹状体肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响。方法　黑质定位注射 6 -羟多巴胺 (6 - OHDA )制备偏侧 PD大鼠模型 ,经 5 0～ 10 0 mg/ kg体重 L - dopa灌胃治疗 4周后 ,检测双侧额叶皮质、黑质和纹状体区域 TNF-α的表达。结果　 6 - OHDA损毁侧黑质和纹状体 TNF-α含量和阳性细胞面密度分别显著高于健侧 (均 P<0 .0 5 )。损毁侧与健侧 TNF-α含量的比率随 L - dopa治疗用量的增加而增高 ,且均显著高于对照组 (P<0 .0 5 )。结论　 L - dopa治疗进一步加剧了PD大鼠黑质纹状体区域 TNF-α的高表达。     

偏侧帕金森病大鼠模型的行为,免疫组化和脑微透析的实验研究

评价6-羟多巴胺(6-OHDA)损毁大鼠单侧黑质制备的偏侧帕金森病动物模型。应用6-羟多巴胺损毁SD大鼠单侧黑质制备偏侧PD鼠模型。3周后根据药物诱发试验,TH免疫组化证实模型制作成功。进一步用脑微透析技术结合HPLC-ECD在体检测PD鼠纹状体多巴胺及代谢产物含量。结果:82只大鼠中有36只阿朴吗啡(APO)诱发的旋转次数>7转/min。6-OHDA注射侧黑质DA神经末稍已绝大多数被损毁。6-OHDA损毁侧纹状体多巴胺及代谢产物明显低于健侧(P<0.05,P<0.01)。应用6-OHDA制备的偏侧PD鼠模型是PD研究的理想模型之一。     

β-arrestin1参与MK-801治疗帕金森病异动症的研究

目的 探讨MK-801缓解帕金森病(PD)异动症的治疗机制。方法 建立PD运动并发症大鼠模型,25只大鼠随机分为3组：异动症(LID)组10只、MK-801处理组10只、PD组5只,另设假手术组5只为对照组。观察MK-801治疗左旋多巴诱导的异动症大鼠模型的行为学变化,并采用免疫组织化学方法和Western blot印迹法检测大鼠纹状体区β-arrestin1的表达情况。结果 MK-801处理后,LID大鼠模型异常不自主运动评分降低和剂峰旋转行为减弱。免疫组织化学结果显示LID组损伤侧β-arrestin1阳性细胞指数[(2.95±0.44) ×104]明显较未损伤侧[(3.78 ±0.37)×104]降低,差异有统计学意义(t =5.415,P＜0.05)。Western blot结果显示,PD模型组损毁侧与未损毁侧纹状体区β-arrestin1含量比值为81.02％ ±2.23％;LID组(64.88％±3.10％)蛋白表达量进一步减少,与PD组比较,差异有统计学意义(t=9.47,P＜0.01);而MK-801组蛋白表达量增高至89.26％±1.90％,与LID组相比,差异有统计学意义(t=14.82,P＜0.01)。结论 MK-801能缓解LID大鼠的行为学变化,其机制可能与β-arrestin1表达增多抑制了谷氨酸受体的过度活化有关。     

大鼠螺旋神经节神经元r-氨基丁酸A受体及N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位的表达

目的：研究大鼠耳蜗螺旋神经节神经元A型γ-氨基丁酸受体（Gamma-aminobutyric acid receptor GABAAR）和N—甲基—D—天门冬氨酸受体(N-methyl D-aspartat receptor,NMDAR)亚单位的表达及意义。 方法：原代培养大鼠螺旋神经节神经元，采用RT-PCR检测大鼠螺旋神经节神经元GABAAR和NMDAR亚单位的mRNA表达。 结果：大鼠螺旋神经节神经元mRNA表达GABAAR亚单位有α1-6,β1-3,γ1-3，且在α亚单位族中, α1，α3表达较高，差别无统计学意义（P>0.05）, α1,α3的表达量与其余亚单位表达量以及其余GABAAR亚单位之间表达量的差异有统计学意义（P<0.05），各亚单位表达量大小排列顺序是:α1/α3＞α6＞α5＞α4＞α2。β亚单位族中,β亚单位族中各亚单位表达量两两比较差异有统计学意义，表达量排列顺序β1＞β3＞β2（P<0.05）；γ亚单位族中各亚单位表达量两两比较差别有统计学意义（P<0.05），表达量排列顺序是γ2＞γ1＞γ3；NMDAR表达的亚单位有NR1,NR2A,NR2B,NR2C,NR2D,NR3A,NR3B，其中NR1亚单位的表达最高(P<0.05)。 结论：大鼠螺旋节神经元mRNA上表达GABAAR的主要亚单位α1-6,β1-3,γ1-3和NMDAR NR1,NR2-D,NR3A-B亚单位.     

左旋多巴诱发异动症大鼠模型纹状体神经元可塑性的研究

目的 研究左旋多巴诱发异动症(LID)大鼠模型纹状体区FosB和特异性神经肽基因表达的变化，探讨LID时纹状体神经元的可塑性。方法 分别用免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测大鼠纹状体区FosB和前脑啡肽原(PPE)及前强啡肽原(PDyn)基因的表达情况。用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪与免疫组织化学相结合的双重反应技术观测FosB的细胞分布状况。结果 帕金森病(PD)大鼠较正常大鼠损毁侧纹状体PPE mRNA表达明显增多而PDyn mRNA表达减少。LID大鼠较PD大鼠PPE mRNA无明显增多，但PDyn mRNA显著性增多。LID大鼠损毁侧纹状体区FosB阳性神经元明显增多，并且主要分布于纹状体黑质神经元内。结论 纹状体黑质神经元内即早基因FosB及其下游靶基因强啡肽的表达异常与大鼠LID的发生有关，表明LID的发生与直接通路的活动异常密切相关。     

褪黑素对癫痫大鼠海马GABA、GABAARα5表达的影响

目的 探讨褪黑素(Mel)抗癫痫作用的机制.方法 采用匹罗卡品(PILO)诱导大鼠癫痫持续状态(SE)模型,用免疫组化技术检测大鼠SE后4个时相点即6 h、48 h、72 h和7 d海马γ-氨基丁酸(GABA)和GABAA受体α5(GABAARα5)亚单位表达的动态变化,以及Mel对其变化的影响.结果 PILO组大鼠SE后6h,海马内GABA能神经元和GABAARα5亚单位表达均开始减少,尤其以SE后72 h～7 d改变最为明显,与对照组比较差异有极显著意义(P＜0.01);而Mel组大鼠在SE后72 h～7 d,海马各区的GABA能神经元和GABAARα5亚单位表达均显著高于PILO组大鼠(P＜0.05).结论 Mel可能通过上调GABA和GABAARα5亚单位的表达来发挥抗癫痫作用.     

脑深部电刺激对帕金森病二次手术的临床应用价值

目的探讨帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)毁损术后再行脑深部电刺激术(deepbrainstimulation,DBS)的可行性、靶点选择、术中电生理学特点和治疗结果。方法应用MRI和微电极记录技术进行靶点定位,对13例毁损术后的PD患者行DBS手术,其中7例曾行单侧苍白球毁损术(posteroventralpallidotomy,PVP),5例曾行单侧丘脑毁损术,1例曾行双侧丘脑及左侧苍白球毁损术。DBS的靶点包括单侧丘脑底核(subthalamicnucleus,STN)6例,单侧丘脑腹中间核(ventralintermediatnucleus,Vim)1例,双侧STN4例,一侧STN及对侧苍白球(globuspallidusinternus,Gpi)2例。结果DBS对毁损术后的PD患者症状有不同程度的改善,其中单侧毁损术后行双侧DBS效果最明显。术后3个月的UPDRS运动及ADL评分较术前明显减少(P<0.05或0.01),美多巴的用量明显减少(P<0.05),无新的手术合并症。结论曾行毁损术的PD患者如面临二次手术,可以选择DBS手术,以双侧STN的DBS效果最好,并可减少药物用量,不加重原有的术后并发症。     

帕金森病外科治疗中苍白球内侧部神经元电生理记录的有效针道方法

目的探讨微电极记录技术在帕金森病(PD)苍白球切开术(Pallidotomy)治疗中的实际作用及应用方法。方法对120例PD苍白球内侧部神经元的电生理特征进行记录和分析，术中同时行电刺激检测，随后行射频毁损，术后2周～3月内行MR确认毁损灶位置．1年后病情随访。结果苍白球内侧部(Gpi)运动相关细胞分布具有规律性：下肢运动神经元位于Gpi的背侧．面及咀嚼肌相关运动神绎元位于Gpi最腹侧，上肢运动神经元位于其中，此结果为最终毁损治疗提供了患肢部位的信息：微电极记录在PD手术治疗中的作用主要是用于提供Gpi内神经元信息，即对所行针道异常电生理信号及视束光反应的确认，而非一定要多针道对Gpi或STN生理空间制图或边缘定位，由此提出“有效针道”的方法。结论对于GDi靶点位置的确定，除影象学定位外，微电极记录和电刺激同样重要；微电极记录技术的有效针道方法操作简单，易于临床上对神经核团定位，对GDi靶点定位十分重要。     

癫痫持续状态大鼠模型的GABAA受体亚单位α1的mRNA表达及[^3H]Flunitrazepam受体配体结合的变化

目的本实验研究大鼠癫痫持续状态动物模型的海马等部位GABAA受体α1亚单位基因表达和受体一配体结合的变化。方法成年雄性大鼠经腹腔内注射320～340±5.87毫克/公斤毛果芸香碱(Pilocarpine)以制成癫痫持续状态动物模型，能在癫痫持续状态(定义为在皮质脑电图上显示痫性放电的至少40分钟的持续性痫性发作)下存活的大鼠在1小时和2小时后处于死，分别研究GABA受体基因表达和放射结合位点，用原位杂交方法来测定脑部mRNA水平，用［3H］flunirazepam标记GABAA受体benzodiazepam结合位点。结果动物痫性发作2小时后海马的CA1和CA3区域GABAA受体α1亚单位mRNA显著下降，但是齿状回的α1mRNA没有变化。［3H］flunirazepam标记受体-配体放射结合在持续2小时持续痫性发作后可见海马的CA1及CA3和齿状回中均见下降，1小时的持续痫性发作尚未引起海马区域的任何α1mRNA或［3H］flunirazepam受体-配体放射结合的任何改变，并用结晶染色1及2小时后的大脑海马部位。结论本研究结果提示大鼠的癫痫持续状态可诱发海马区GABAA受体α1基因表达的改变和［3H］flinirazepam受体-配体结合的下降，上述改变可能使大脑更容易形成慢性癫痫病灶。     

Developmental and degenerative modulation of GABAergic transmission in the mouse hippocampus

γ-Aminobutyric acid (GABA) is the main inhibitory neurotransmitter involved in synaptic plasticity. GABAergic transmission is also implicated in developmental and degenerative processes in the brain. The goal of the present study was to understand the developmental and degenerative regulation of GABAergic transmission in the mouse hippocampus by examining changes in GABA receptor subunit mRNA levels and GABA-related protein expression during postnatal development of the hippocampus and trimethyltin (TMT)-induced neurodegeneration in the juvenile (postnatal day [PD] 24) and adult hippocampus (PD 56). During postnatal development, the mRNA levels of GABA A receptor (GABA_AR) subunits, including α1, α4, β1, β2, and δ; GABA B receptor (GABA_BR) subunit 2; and the expression of GABA-related proteins, including glutamic acid decarboxylase, vesicular GABA transporter (VGAT), and potassium chloride cotransporter 2 increased gradually in the mouse hippocampus. The results of seizure scoring and histopathological findings in the hippocampus revealed a more pronounced response to the same administered TMT dose in juvenile mice, compared with that in adult mice. The mRNA levels of most GABA receptor subunits in the juvenile hippocampus, excluding GABA_AR subunit β3, were dynamically altered after TMT treatment. The mRNA levels of GABA_AR subunits γ2 and δ decreased significantly in the adult hippocampus following TMT treatment, whereas the level of GABA_BR subunit 1 mRNA increased significantly. Among the GABA-related proteins, only VGAT decreased significantly in the juvenile and adult mouse hippocampus after TMT treatment. In conclusion, regulation of GABAergic signaling in the mouse hippocampus may be related to maturation of the central nervous system and the degree of neurodegeneration during postnatal development and TMT-induced neurodegeneration in the experimental animals.     

神经导航下猴苍白球区电生理特性的实验研究

目的探讨猴苍白球区（Gp）电生理的特性.方法运用Brainlab神经导航系统通过微电极技术记录猴Gp不同部位的电活动.结果微电极可在Gp的不同部位记录到不同特征的电活动.苍白球外侧部（Gpe）背侧可测到低频的电活动,Gpe腹侧可测到高频的电活动;苍白球内侧部（Gpi）可测到高频、高幅的电活动.结论猴Gp不同部位电活动的频率、幅度、放电方式均有统计学意义,利用Gp不同部位的电生理特性可以帮助立体定向手术中的精确定位.     

Co-expression of glycine receptor beta subunit and GABAA receptor gamma subunit mRNA in the rat dorsal root ganglion cells.

We examined the expression of the beta subunit mRNA of the glycine receptor and the gamma subunit mRNA of the GABAA receptor in the rat dorsal root ganglion (DRG) using in situ hybridization histochemistry with oligonucleotide probes. About 44% and 37% of the all DRG neurons were labeled by the probes for glycine receptor beta subunit and GABAA receptor gamma subunit mRNAs. Labeled neurons were mostly large cells that simultaneously expressed both glycine receptor beta subunit and GABAA receptor gamma subunit mRNA as demonstrated using consecutive sections. Thus, we suggest the possibility that both GABA and glycine presynaptically regulate the activity of neurons involved in low-threshold mechanoreception at axo-axonic synapses in the spinal cord.