葛根素预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法健康成年雄性SD大鼠120只,随机分成5组（n=24）：假手术组（S组）,脑缺血再灌注组（IR组）,Pc-24h100mg组,Pc-24h200mg组,Pc-24h400mg组,其中Pc-24h组于脑缺血前24h给予相应剂量葛根素腹腔注射行单次预处理,采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,缺血90min,再灌注24h。大鼠清醒后进行神经功能缺陷评分,再灌注24h时处死大鼠,处死后取脑组织,测定脑梗死容积比（BIVP）、脑组织含水量及MDA水平。结果葛根素预处理可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能缺损评分,降低BIVP、脑组织含水量及MDA水平（P均〈20.01）。其中Pc-24h400mg组减低神经功能缺损评分、BIVP及脑组织含水量明显优于Pc=24h100mg及Pc-24h200mg组（P均〈0.01）,而Pc-24h100mg及Pc-24h200mg组之间无显著差异（P均〉0.05）。结论葛根素预处理可能通过抑制脑水肿及氧化损伤来减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。葛根素预处理的脑保护作用具有一定的量效关系。     

双氧水预处理对大鼠局灶性脑缺血损伤及氧自由基的影响

目的探讨双氧水预处理对大鼠局灶性脑缺血损伤及氧自由基的影响。方法实验一：20只雄性sD大鼠，随机分为单纯缺血再灌注组和双氧水预处理组（每组10只）。实验二：18只雄性SD大鼠分为空白对照组，单纯缺血再灌注组和双氧化预处理（每组6只）。预处理组动物于缺血前24h用微量泵1h内静脉内缓慢泵入3％的双氧水1ml。动物再灌注后24h，对实验一两组动物行神经功能障碍评分，并处死动物取大脑行TFC染色测量脑梗死容积；取实验二的所有动物的脑组织行超氧化物歧化酶（SOD）和神经元特异性烯醇酶（NSE）测定。结果双氧化预处理组神经功能损害评分和脑梗死容积明显较对照组低（P〈0．05）。缺血再灌注组SOD含量和NSE含量明显低于对照组和双氧水预处理组（P〈0.05）。结论双氧水预处理可诱导超氧化物歧化酶生成，降低自由基对大脑的损害，对大鼠局灶性脑缺血损伤具有明显的保护作用。     

16Hz 130dB次声预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的观察次声预处理对大鼠大脑中动脉阻闭（MCAO）模型致脑缺血的保护作用。方法SD雄性大鼠随机分为三组（每组10只）：对照组、假次声预处理组和次声预处理组。次声预处理组大鼠行16 Hz 130 dB的次声作用2 h/d,连续作用7 d;假次声预处理组大鼠每日放入次声仓但不接受次声,亦连续7 d;对照组大鼠正常饲养。最后一次预处理后24 h时,三组大鼠分别做MCAO模型,再灌注24 h后处死动物,观察脑梗死容积及神经功能学评分。结果与对照组相比,次声预处理组大鼠脑梗死容积明显减小（P〈0.05）,神经功能学评分明显提高（P〈0.05）。而假次声预处理组大鼠脑梗死容积和神经功能学评分与对照组相比无明显差异（P〉0.05）。结论16 Hz 130 dB次声预处理可明显减轻大鼠脑梗塞的容积,改善神经功能学评分。     

电针预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后EAAT2的表达研究

目的研究电针预处理对脑缺血再灌注损伤后大鼠缺血半暗带兴奋性谷氨酸转运体2(EAAT2)表达的影响,探讨EAAT2在电针预处理诱导脑缺血耐受中的作用。方法 18只SD雄性大鼠随机分为3组(n=6):分别为假手术(Sham)组、右侧大脑中动脉阻闭(MCAO)组、电针预处理(EA)组。假手术组仅分离血管,不进行阻闭,术后24 h检测;MCAO组用MCAO法致缺血120 min后于再灌注24 h检测;EA组大鼠予电针刺激30 min,刺激结束2 h后处理同MCAO组。3组大鼠在观察神经行为学变化后取材,通过2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色评估梗死面积,并检测EAAT2 mRNA及蛋白表达水平。结果电针预处理能明显降低脑梗死容积百分比(P0.01),提高MCAO大鼠神经行为学评分,诱导脑缺血耐受并抑制脑缺血再灌注损伤后24 h EAAT2表达的下降(P0.01)。结论脑缺血再灌注损伤后,EAAT2表达下降,而电针预处理能显著抑制缺血半暗带EAAT2的表达下调,诱导脑缺血耐受,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

电针预处理对脑缺血再灌注后SOD_2的表达影响

目的观察电针预处理对脑缺血再灌注后锰超氧化物歧化酶表达的影响。方法成年雄性C57小鼠随机分为假手术组(sham)、电针预处理组(EA)、大脑中动脉栓塞组(MCAO)、电针加大脑中动脉栓塞组(EA+MCAO),采用MCAO法诱导小鼠局灶性脑缺血再灌注模型。再灌2 h应用Western blot以及免疫荧光组织化学染色技术检测SOD2表达,再灌24 h评估神经行为学、测量脑梗死容积和神经细胞凋亡。结果脑缺血再灌注2 h,SOD2表达显著降低,而电针预处理可上调SOD2的表达,增加SOD2在神经元的免疫荧光强度。同时电针预处理可改善缺血再灌注后的神经功能障碍,减轻脑梗死容积率,减少末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞数目。结论电针预处理可上调脑缺血再灌注后SOD2表达,可能参与其诱导的脑保护作用。     

腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能的影响

目的观察腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经功能的影响。方法制作大鼠大脑中动脉缺血2h后再灌注损伤模型。SD大鼠36只,随机分为假手术组(F组)、缺血再灌注组(IR组)、腺苷预处理组(AP组),每组12只,依术后神经功能评分时间的不同,每组再分为4个亚组:2h、6h、24h和72h组(F2、6、24、72h,IR2、6、24、72h,AP2、6、24、72h)。用Zeal Longa 5级评分法进行神经功能评分。结果神经功能评分F组为0分,AP和IR各亚组1~3分,统计学处理后AP各亚组与F和IR各相应亚组比较差异显著(P<0.05),IR各亚组与F各相应亚组比较差异显著(P<0.05)。结论腺苷预处理能够减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤所引起的神经功能缺损症状。     

人参皂甙Rd对兔脊髓缺血性损伤保护作用的量效关系研究

目的探讨人参皂甙Rd对脊髓缺血性损伤保护作用的剂量效应关系。方法 40只雄性新西兰大白兔,随机分为5组（n=8）,采用肾下主动脉阻断法造成脊髓缺血（20min）。对照组：即单纯缺血再灌注组;保护组：即Rd-5组、Rd-10组、Rd-20组和Rd-40组,分别在缺血前1h从耳缘静脉注射人参皂甙Rd5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg;术后观察神经功能变化并记录再灌注4h、8h、12h、24h和48h神经功能学评分,再灌注48h处死动物后取脊髓（L5～7）标本行病理学观察。结果所有动物均存活,再灌注后48h,Rd-5组神经功能学评分和脊髓前角正常运动神经元计数与对照组相比均无显著性差异（P〉0.05）;Rd-10组神经功能学评分与对照组相比无显著性差异（P〉0.05）,但脊髓前角正常运动神经元计数明显高于对照组（P〈0.05）;Rd-20组、Rd-40组神经功能学评分和脊髓前角正常运动神经元计数均明显高于对照组（P〈0.01）,但这二组之间无显著性差异（P〉0.05）。且每组兔神经功能学评分与其对应脊髓前角正常神经元计数之间有显著相关性（r=0.769.P〈0.01）。结论人参皂甙Rd对脊髓缺血性损伤有保护作用,且呈一定的剂量效应关系。     

缺血预处理上调TROY表达诱导大鼠局灶性脑缺血耐受

目的研究缺血预处理（IPC）对局灶性脑缺血的保护作用以及对TNFRSF expressed on the mouse embryo（TROY）表达的影响。方法33只雄性成年SD大鼠，随机分为预处理6h组（IVC-6组，11只）、预处理72h组（IPC-72组，11只）和缺血组（CI组，11只）。利用线栓法建立大脑中动脉栓塞（MCAO）致局灶性脑缺血模型。MCAO 10min作为IPC,IPC-6和IPC-72组分别在IPC后6h和72h制作短暂性局灶性脑缺血模型。再灌注24h后，对所有动物行神经功能缺损评分（NDS），并处死大鼠取脑，应用2％TTC染色测定梗死容积、TUNEL染色研究细胞凋亡情况和免疫组化观察TROY表达变化。结果与CI组比较，IPC-72组显著改善局灶性脑缺血24h后大鼠神经功能损害[两组评分分别为2（1．5-3），1（0—2）]，减少脑梗死容积[（299．33±70．98）mm^3，（69．25±47．66）mm^3]，抑制细胞凋亡和增强TROY的表达（阳性细胞数分别为42±11，87±17）（P〈0．01）。结论IPC对其后局灶性脑缺血有明显的保护作用．能诱导脑缺血耐受，可能与TROY表达上调相关。     

高压氧预处理减少局灶性脑缺血后泛素化蛋白聚集

目的探讨泛素-蛋白酶体系统在重复高压氧（HBO）预处理导致的脑缺血耐受中所起的作用。方法采用大脑中动脉阻闭（MCAO）制备大鼠局灶性脑缺血模型,将33只SD大鼠随机分为假手术组（Sham）组、MCAO组和HBO组,分别观察各组大鼠脑梗死灶的大小和神经功能学评分,并用免疫组织化学染色检测再灌注2h、24h时相点大鼠脑组织CA1区异常泛素化蛋白聚集的变化。结果 HBO组脑梗死容积小于MCAO组,差异有统计学意义（P〈0.05）,其神经功能学评分也明显优于MCAO组（P〈0.05）。再灌注各时相点,HBO组泛素化蛋白聚集明显少于MCAO组（P〈0.05）。结论高压氧预处理所诱导的脑缺血耐受的机制可能与泛素化蛋白聚集降低有关。     

KATP开放剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂尼可地尔（nicorandil）对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤的保护作用及其机制。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为4组：A组（假手术组）、B组（脑缺血再灌注组）、C组（脑缺血再灌注＋尼可地尔组）及D组（脑缺血再灌注＋尼可地尔＋5-HD组），采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，各组于脑缺血2h后进行再灌注，再灌注22h后观察各组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、线粒体标志酶活性和脂质过氧化降解产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。结果（1）B、C、D组再灌注22h后神经功能评分显著低于A组，脑梗死体积、脂质过氧化物MDA含量均显著高于A组，线粒体标志酶活性SDH、CO表达显著低于A组（P〈0.01）；（2）与B、D组比较，C组神经功能评分明显升高，脑梗死体积、MDA含量明显减少，SDH、CO活性明显增高（P〈0.01）；（3）B组和D组各指标之间比较差异均无显著性（P〉0.05）。结论尼可地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可能与开放mitoKATP通道、维护线粒体功能、减少氧自由基产生有关。     

A forebrain ischemic preconditioning model established in C57Black/Crj6 mice

Although many kinds of rat and gerbil cerebral ischemic preconditioning models are available, only a focal ischemic preconditioning model in mice has been reported. As most genetic alterations have been performed in mice, it is urgent to develop mouse ischemic preconditioning models for investigating the molecular mechanisms of ischemic preconditioning in transgenic mice. In the present study, we developed a forebrain ischemic preconditioning model in C57Black/Crj6 (C57BL/6) mice. Forebrain ischemia was induced in C57BL/6 mice (8-10 weeks old) by bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) for 18 min. The conditioning ischemic insult lasting for 6 min was carried out 48 h before the 18-min BCCAO. On the seventh day after BCCAO, neuronal damage was visualized by microtubule-associated protein-2 immunohistochemistry and quantified by cresyl violet staining. Terminal deoxytransferase-mediated dUTP-nick end labeling (TUNEL) was performed 72 h after reperfusion to detect DNA fragmentation. Ischemia for 18 min resulted in injury to the striatum, cortex and hippocampus. In comparison to the hippocampus, striatal neuronal injury was more severe and reproducible. Although the conditioning ischemia itself caused neither noticeable striatal neuronal damage nor DNA fragmentation, it significantly reduced striatal neuronal damage and DNA fragmentation caused by the subsequent 18-min ischemia. These results indicate that striatal neuronal injury after transient BCCAO can be strongly reduced by a sublethal ischemic episode in C57BL/6 mice. As many kinds of gene-altered C57BL/6 mice are available, this preconditioning model may be useful for investigating the molecular mechanisms of ischemic preconditioning in transgenic mice.     

线粒体通透性转换孔在缺血预处理脑保护中的作用及机制

目的观察线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)在缺血再灌注及缺血预处理脑保护中的作用。方法将体外培养8 d的海马神经元分为五组,正常对照组(A组),缺血再灌注组(B组),缺血预处理+缺血再灌注组(C组),苍术苷+缺血再灌注组(D组),缺血预处理+苍术苷+缺血再灌注组(E组)。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位,Western-blot检测Bcl-2,Bax的表达水平。结果与A组比较,其余四组线粒体膜电位均降低,神经元凋亡率升高(P<0.05);与B组比较,C组线粒体膜电位升高,神经元凋亡率升高,Bcl-2表达上调,Bax表达下调(P<0.05);与C组比较,E组粒体膜电位降低,神经元凋亡率升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05)。结论缺血预处理能有效减轻海马神经元缺血再灌注损伤,抑制缺血再灌注后神经细胞凋亡,其机制可能与抑制MPTP的开放有关。     

血管性轻度认知功能损害对大鼠前脑神经元和胶质细胞的影响

目的：观察血管性轻度认知功能损害（VMCI）大鼠模型的前脑神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞数的变化。方法：用分次结扎大鼠双侧颈总动脉（BCCAO）40d建立VMCI模型（BCCAO组）,以假手术组（SHAM组）为对照,每组n=6。在模型建立前和建立后40d对大鼠进行感觉、运动神经功能和步态的评估,采用T型迷宫评估额叶皮质下环路相关的空间工作记忆和海马相关的空间及非空间相关记忆,免疫组化染色分别检测不同脑区的神经元和胶质细胞数的变化。结果：两组大鼠均无明确感觉和运动神经功能缺失,但BCCAO组的大鼠出现步态障碍。T型迷宫评估,BCCAO组的大鼠额叶皮质下环路相关的空间工作记忆和海马相关的空间及非空间相关记忆受损。两组大鼠海马CA1区β-tubulin阳性细胞面积百分比的定量分析差异无统计学意义（P〉0．05）。BCCAO组在CC区、ic区和opt区GFAP的阳性细胞面积百分比明显高于SHAM组（P〈0．05）;BCCAO组CC区、ic区和opt区和海马CA1区的CD11b阳性细胞面积百分比亦明显高于SHAM组（P〈0．05）。结论：VMCI模型大鼠表现为无运动障碍的步态损害和轻度的空间工作记忆障碍;VMCI早期可不表现为神经元数量的缺失,但其功能可能已经受损,病理特点还包括发挥神经毒性作用的小胶质细胞的活化和白质病变。     

依达拉奉对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复及海马病理形态学改变的影响

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血后神经功能恢复及海马病理形态学改变,评价依达拉奉的干预作用.方法 126只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组,6只),生理盐水组(B组,MCAO后6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d7时点,各6只),依达拉奉处理组(C组,同B组),术后即刻予以依达拉奉干预.行神经功能缺损评分测定;TTC染色观察脑梗死体积改变;用HE染色方法观察病理形态学改变.结果 术后进行神经缺损评分发现,由于麻醉和手术创伤的影响,假手术组术后出现6～24h神经功能减退.与假手术组相比,在6～24h时间段盐水组神经功能下降明显(P＜0.05).依达拉奉组神经功能明显好于盐水组(P＜0.05).术后7d盐水组和依达拉奉组神经功能基本恢复.同时,在依达拉奉组和盐水组中,缺血24h脑梗死体积最大;与盐水组相比,术后6～24h依达拉奉组脑梗死体积明显减小(P＜0.05).HE染色显示术后6h在脑缺血区神经元细胞无明显改变,6h后缺血区脑组织逐渐出现肿胀与坏死;在依达拉奉组,脑水肿和神经元坏死病理损害明显较轻,在假手术组,脑组织无明显改变.结论 依达拉奉具有改善神经功能缺损、缩小脑梗死体积和减轻缺血性病理损害程度的作用;研究还提示依达拉奉对缺血性脑卒中早期神经功能恢复具有十分重要的临床意义.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经损害与脑组织中丝裂原活化蛋白激酶表达的关系

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脑组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)表达变化及其与神经损害的关系。方法 C57BL/6小鼠随机分为:EAE组(n=12),采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)制备成抗原乳剂免疫小鼠;对照组(n=10),用生理盐水处理小鼠。每日观察两组小鼠的行为学变化,并进行神经功能障碍评分。于高峰期处死小鼠,冰冻处理脑与脊髓,行苏木精-伊红染色观察脊髓组织的炎症细胞浸润,LFB染色观察脊髓组织的髓鞘脱失,蛋白印迹法检测小鼠脑组织中MAPKs表达。分析EAE小鼠神经功能障碍改变与中枢神经组织MAPKs表达量的相关性。结果 EAE组与对照组比较:日均神经行为学评分增加(P0.01);脊髓炎症细胞浸润增多(P0.001),髓鞘脱失增多(P0.001)。P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达量均增多(P0.01、P0.05、P0.05)。神经功能障碍与P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达呈正相关。结论 EAE高峰期神经损伤程度与中枢神经组织中的P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达增加相平行,提示MOG35-55诱导的EAE中枢神经损伤可能与MAPKs所激活的信号通路有关。     

依托咪酯预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨依托咪酯预处理对脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法 18只雄性SD大鼠,随机均分为3组,即脑缺血-再灌注组、依托咪酯预处理组、脂微球对照组。采用颈内动脉线栓栓塞致大脑中动脉阻塞模型,监测肛温及血糖,并于再灌注24h后断头处死动物,取大脑切片行2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色,测量并计算脑梗死容积百分比。结果 依托咪酯预处理组脑梗死百分比明显低于脂微球对照组（P＜0.01）,低于缺血-再灌注组（P＜0.05）。但缺血-再灌注组与脂微球对照组相比差异无统计学意义。结论 依托咪酯预处理后可明显减小大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后的脑梗死面积。     

共聚物-1对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的探讨共聚物-1(Cop-1)免疫或致敏淋巴细胞移植对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺(DA)神经元的保护作用。方法选用雄性C57BL/6J小鼠随机分为Cop-1/BSA免疫组、Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组、MPTP模型组和正常对照组。Cop-1/BSA免疫组在注射MPTP之前10天接受Cop-1/BSA抗原免疫;Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组动物在MPTP末次注射后,立即接受Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植;MPTP模型组动物仅接受MPTP注射;正常对照组动物仅接受生理盐水注射。MPTP末次注射7天后处死动物,取脑。酪氨酸羟化酶免疫组化及体视学方法定量分析黑质DA神经元数。结果 MPTP注射显著地减少了模型动物黑质DA神经元数量。Cop-1免疫和Cop-1致敏淋巴细胞移植明显增加了MPTP模型动物黑质DA神经元数,对黑质DA神经元有保护作用。BSA免疫或BSA致敏淋巴细胞移植则没有表现出这种保护作用。结论在C57BL/6J小鼠,Cop-1免疫和Cop-1致敏淋巴细胞移植可有效对抗MPTP毒性,保护黑质DA神经元。     

Injury and strain-dependent dopaminergic neuronal degeneration in the substantia nigra of mice after axotomy or MPTP

We studied the effects of axotomy or neurotoxin on the survival of substantia nigra pars compacta (SNpc) neurons in two strains of mice, FVB/N or C57BL/6. Fluoro gold (FG) was injected into both striata of the mice to retrogradely label the nigrostriatal neuronal population. Ten days later, these neurons were axotomized in the medial forebrain bundle (MFB) unilaterally or N-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) was administered intraperitonealy for 2 days to produce bilateral degeneration. MFB transection or MPTP administration produced a progressive loss of FG-labeled and tyrosine hydroxylase immunolabeled (TH+) neurons in both strains. Relative to control, 72% of SNpc neurons died 4 weeks after axotomy in C57BL/6 mice and 50% died after axotomy in FVB/N mice. MPTP resulted in death of 80% of SNpc neurons in C57BL/6 mice but only 40% in the FVB strain 4 weeks after MPTP administration. In this more sensitive strain, MPTP cell death was associated with positive staining for terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) and nuclear condensation. In contrast, no TUNEL staining was detected in SNpc after MPTP in FVB/N mice. Further, while similar kinetics and extent of cell death accompanied axotomy, axotomy-induced cell death was TUNEL negative in both FVB/N and C57BL/6 mice. Double staining for TUNEL and microtubule associated protein 2 confirmed that the majority of the TUNEL positive cells were neurons. These data indicate that genetic factors and the type of lesion play an important role in determining death of dopaminergic neurons after injury.