氮苯二羧基钒酸盐调控谷氨酸作用下海马神经元内钙离子的研究

目的：探讨第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因抑制剂氮苯二羧基钒酸盐（bpv）调控谷氨酸 （Glu）作用下海马神经元内Ca^2＋的作用及机制.方法：用孕12～14 d大鼠原代培养海马神经元,经bpv和Glu受体（GluR）阻断剂预处理后,通过激光共聚焦扫描检测高浓度Glu刺激后的细胞内Ca^2＋浓度变化.结果：Glu可诱导神经元细胞Ca^2＋ 内流,bpv可通过对Glu a-氨基羟甲基恶唑丙酸（AMDA）受体的作用而减少Ca^2＋内流.结论：bpv在脑创伤后对神经元的保护作用可能是通过抑制Glu所引起的Ca^2＋内流而实现的.     

20008/神经生长因子通过PTEN保护谷氨酸诱导的海马神经元凋亡

目的：探讨NGF保护谷氨酸（Glu）诱导海马神经元凋亡中PTEN的作用。方法：新生（< 24 hr）大鼠海马神经元培养7天后,随机分为对照组、谷氨酸组（0.2 mM）和NGF组（10、50、100、200μg•L -1）采用LDH和MTT法检测NGF对Glu损伤细胞活力的影响,采用DAPI染色法检测海马神经元凋亡,采用RT-PCR法和Western blot法测定PTEN mRNA及蛋白表达。结果：NGF可明显提高Glu损伤的海马神经元的细胞活力,减少海马神经元的凋亡和PTEN的表达。结论：NGF对Glu诱导的海马神经元损伤有保护作用,其机制可能与减少PTEN表达,抑制神经元凋亡有关。     

N-乙酰半胱氨酸抗谷氨酸诱导海马神经元损伤的研究

目的　观察N-乙酰半胱氨酸(N- acetylcysteine,NAC)对不同浓度谷氨酸(Glutamte,Glu)诱导海马神经元损伤的影响,探讨其作用机制,评价毒性作用。方法　采用台盼蓝活细胞拒染与TUNEL法比较不同浓度NAC预处理3d给药与细胞毒性暴露后快速给药对10 0μmol/ L、5 0 0μm ol/ L Glu诱导体外培养海马神经元损伤的影响,并与MK- 80 1比较;利用激光扫描共聚焦显微镜(L SCM)观测细胞内Ca2 浓度变化;采用台盼蓝活细胞拒染、原子力显微镜(AFM)及细胞内酯酶活性判定方法评价NAC毒性。结果　NAC可降低10 0μmol/ L Glu诱导的海马神经元死亡率,以预处理组为佳,1m mol/ L NAC预处理保护效果类似于10μmol/ L MK - 80 1;NAC对5 0 0μm ol/ L Glu诱导的海马神经元损伤无保护作用。1mm ol/ L NAC预处理抑制Glu诱导的神经元Ca2 内流。经10 0 mmol/ L NAC作用的细胞虽然形态完整,但台盼蓝染色蓝染,失去对Glu毒性的反应性;AFM扫描见神经元细胞膜皱缩;培养基Ca2 经Fluo- 3(AM)标记后L SCM下无激发荧光。结论　NAC对轻度Glu细胞毒性损伤有保护作用,预防性用药效果更优越。认为抑制Glu诱导的神经元Ca2 内流为其保护机制之一。高浓度NAC具有固定作用     

重组Bcl—2腺病毒对损伤运动神经元的保护作用

目的：观察携带Bcl-2基因的重组腺病毒（Ad/s-Bcl-2）对损伤运动神经元的保护作用，方法：采用培养脊髓运动神经元的谷氨酸损伤模型，评价重组Bcl-2腺病毒对损伤运动神经元的影响。指标是Bcl-2原位杂交和Bcl-2免疫组化染色，TUNEL阳性神经元计数，运动神经元[Ca^2 ]i的检测以及台盼蓝拒染法检测培养神经元存在。结果：（1）Ad/s-Bcl-2可转染原代培养的脊髓运动神经元并使其过表达Bcl-2。2）过表达Bcl-2可延长培养神经元的生存时间。（3）过表达Bcl-2可显著减少谷氨酸诱导的原代培养脊髓运动神经元的凋亡，并显著降低谷氨酸诱导的神经元[Ca^2 ]i的增高，结论：腺病毒中介Bcl-2基因表达对神经毒性损伤的运动神经元具有保护作用。     

刺五加多糖对H2O2诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的研究刺五加多糖（ASPS）对H2O2诱导的海马神经元凋亡的影响及其机制。方法采用H2O2诱导大鼠海马神经元凋亡。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法检测细胞凋亡率、免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达、逆转录PCR法检测caspase-3 mRNA的表达。结果H2O2作用后,海马神经元凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达水平均显著增高（P〈0.05）;给予ASPS干预后,均显著下降（P〈0.05）;而且,随ASPS剂量增加,作用效果显著增强（P〈0.05）。结论ASPS具有抑制氧化应激损伤诱导神经细胞凋亡作用,其机制与下调caspase-3 mRNA的表达有关。     

缺氧所致海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸2B受体和PTEN基因的表达

目的探讨OGD缺氧损伤后大鼠海马神经元NR2B受体和抑癌基因PTEN的表达量,以及NR2B与PTEN是否有生理性相互作用关系,为研究PTEN基因在脑缺血中的保护作用机制奠定基础。方法建立海马神经元体外OGD损伤模型,采用细胞比色分析(colorimetric assay)法和Western blotting检测神经元NR2B含量,RT-PCR和Western blotting测定PTEN基因的mRNA和蛋白表达水平,免疫沉淀和Western blotting研究NR2B与PTEN的相互作用。结果细胞比色分析和Western blotting结果显示神经元有大量NR2B表达,OGD损伤72h后NR2B含量表达量明显减少(P<0.05);Western blotting和RT-PCR结果显示OGD损伤后PTEN表达量略有下降但尚无统计学意义(P>0.05),免疫沉淀显示PTEN与NR2B在物理上连接形成复合物。结论海马神经元膜表面NR2B含量丰富,PTEN基因在海马神经元里有表达,OGD缺氧损伤再灌注引起NR2B受体和PTEN基因表达量下降,PTEN与NR2B有生理性相互作用。     

刺五加多糖对H_2O_2损伤的海马神经元表达c-fos和p53基因的影响

目的研究刺五加多糖(ASPS)对氧化应激损伤的海马神经元表达c-fos和p53基因的影响,进一步探讨ASPS对氧化应激损伤海马神经元的保护机制。方法从新生大鼠分离出海马,其神经元经培养后分为阴性对照组、损伤模型组(1 mmol/LH_2O_2诱导)和ASPS干预组(该组按ASPS 10、5、2.5μg/ml的终浓度又分为三个亚组)。采用H_2O_2建立海马神经元氧化应激损伤模型。用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测各组海马神经元活性,免疫组化法检测其c-fos和p53的表达。结果 ASPS干预组神经元活性显著高于损伤模型组(P0.05)。c-fos和p53在ASPS干预组神经元中的表达水平较损伤模型组明显降低(P0.05)。结论 ASPS能够减少受损海马神经元c-fos和p53基因的表达,增强其活性,对海马神经元有明显的保护作用。     

刺五加多糖对H2O2损伤的海马神经元表达Fas和Fasl的影响

目的探讨刺五加多糖（ASPS）对氧化应激损伤的海马神经元表达Fas和Fasl的影响,进一步研究ASPS抑制海马神经元凋亡的机制。方法从新生大鼠脑分离海马,其神经元经原代培养后分为阴性对照组、损伤模型组（1mmol/LH2O2）和ASPS干预组（该组按ASPS的干预剂量的不同又分为3个亚组,即终浓度为10、5、2.5μg/ml的3个亚组）。用H2O2建立海马神经元应激损伤模型（阴性对照组除外）。倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;免疫组化法检测其Fas和Fasl蛋白的表达,TUNEL法检测海马神经元凋亡,并计算各组的凋亡率。结果与阴性对照组比较,模型组细胞损伤严重,并高表达Fas和Fasl蛋白（P〈0.05）,神经元凋亡率明显升高（P〈0.01）。与损伤模型组相比,各药物干预组受损伤海马神经元Fas和Fasl蛋白的表达水平和凋亡率均明显降低（P〈0.05）,并表现一定的浓度依赖性。结论 ASPS能减少受损海马神经元细胞中Fas和Fasl蛋白的表达,抑制细胞的凋亡,对受损的海马神经元有明显的保护作用。     

褪黑素对癫痫状态大鼠海马Caspase-3 mRNA表达和脂质过氧化的影响

目的 探讨褪黑素（melatonin,Mel）神经元保护作用的机制.方法 采用匹罗卡品（pilocarpine,PILO）诱导大鼠癫痫持续状态（status epilepticus,SE）模型,用比色法检测海马丙二醛（malondialdehyde,MDA）、还原型谷光甘肽（glutathione,GSH）水平和谷光甘肽还原酶（glutathione reductase,GR）的活力,用RT-PCR技术检测海马caspase-3 mRNA的表达.结果 PILO组大鼠SE后6h～72h,海马MDA含量明显高于对照组（P＜0.01）;海马GSH含量和GR活力均明显低于对照组（P＜0.01）,SE后7d,海马MDA含量和GR活力基本恢复正常.PILO＋Mel组大鼠,在SE后各时相点海马MDA含量均明显低于PILO组大鼠（P＜0.01）;而海马GSH含量和GR活力均显著高于PILO组大鼠（P＜0.05）.SE后6h～72h,PILO组大鼠海马caspase-3 mRNA的表达明显高于对照组（P＜0.01）和PILO＋Mel组（P＜0.01）,提示给予Mel可明显抑制SE大鼠海马caspase-3 mRNA的表达.结论 Mel发挥神经元保护作用的机制是通过提高SE大鼠海马GSH水平和GR活力,来减轻脂质过氧化损伤;并通过抑制caspase-3 mRNA的表达,来干预细胞凋亡.     

蛇床子素对MPP~＋损伤PC12细胞的保护作用研究

目的观察蛇床子素（osthole）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP＋）诱导PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将MPP＋加入培养的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元损伤模型,加入不同浓度的蛇床子素预处理细胞（0.01、0.05、0.1mmol/L）。处理24h后用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性;以乳酸脱氢酶（LDH）活性测定反映细胞的损伤程度;采用Westernblot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达,分析Bax/Bcl-2比值变化,以及检测细胞色素C的改变。结果蛇床子素可以明显减少MPP＋诱导的PC12细胞活性的降低,LDH的释放,Bax/Bcl-2比值的增高以及细胞色素C的释放（P〈0.05）。结论蛇床子素对MPP＋诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

不同温度对谷氨酸诱发原代培养皮质神经元损伤的保护机制

目的探讨不同温度对谷氨酸诱发皮质神经元损伤的保护机制。方法体外培养新生24 h内Wistar大鼠的皮质神经元,毒性剂量的谷氨酸(200μmol·L-1)诱致皮质神经元损伤,随机分为37℃组(常温)和33℃组(亚低温),两组再根据谷氨酸持续作用时间点(10 min,3 h,6 h,24 h)分为4个亚组,标记为T1,T2,T3,T4。两组细胞均在损伤后24 h,通过激光扫描共聚焦显微镜测量细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)、线粒体内Ca2+浓度([Ca2+]m)及线粒体跨膜电位(ΔΨm)。结果 37℃组和33℃组的[Ca2+]i及[Ca2+]m均随损伤时间的延长而显著性增加,同时伴有ΔΨm显著下降(P0.05);33℃组较37℃组[Ca2+]i及[Ca2+]m的增加明显减少,同时显著减低ΔΨm下降幅度(P0.05)。结论 33℃可抑制谷氨酸诱发皮质神经元损伤时的[Ca2+]m内流,减少[Ca2+]m,维持ΔΨm。     

促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠模型海马神经细胞凋亡的影响

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对血管性痴呆(VaD)模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法:将经行为学筛选合格的Wistar大鼠分为假手术组、VaD组、EPO组,采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立VaD模型。应用TUNEL染色检测大鼠海马的凋亡细胞数;通过免疫组化学和RT-PCR方法,检测大鼠海马Bcl-2和Bax蛋白以及其mRNA表达水平的变化。结果:EPO能明显抑制海马神经细胞凋亡,上调Bcl-2表达,抑制Bax表达。结论:EPO可能通过调控VaD大鼠海马Bcl-2和Bax表达,从而抑制神经细胞凋亡。     

刺五加皂甙对皮质神经元缺血缺氧性损伤的保护作用

目的探讨刺五加皂甙(ASS)对皮质神经元缺血缺氧性损伤的保护作用。方法胎鼠皮质神经元经缺血缺氧和谷氨酸(Glu)作用模拟缺血性皮质神经元损伤模型。随机分成缺血缺氧组(HI组)、Glu组、ASS组和对照组;ASS组在实验前、中均加入终浓度为50mg/L的ASS。用流式细胞仪检测神经元凋亡率,用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的含量,用3[4,5二甲基磺胺噻唑]2,5二苯基四唑溴化物(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)释放量测定神经元活性,电镜下观察细胞形态学变化。结果(1)随着缺血缺氧时间延长神经元存活率逐渐下降,至缺血缺氧8h达到高峰;Glu作用的神经元,其存活率随作用时间延长而下降。(2)HI组及Glu组皮质神经元存活率显著低于正常对照组,LDH释放量、NO含量及凋亡率均显著高于对照组(均P<0.05);与HI组和Glu组比较,HI ASS组及Glu ASS组皮质神经元的存活率显著升高,而LDH释放量、NO含量及凋亡率均显著降低(均P<0.05)。结论ASS能提高缺血神经元存活率、降低凋亡率,抑制NO和LDH释放,从而起到神经保护作用。     

一氧化氮与一氧化氮合酶抑制剂对脑缺血后海马神经元的保护作用

目的 研究硝普钠、7-硝基吲唑(7-NI)和AMT对急性脑缺血后海马神经元细胞是否具有保护作用.方法 将80只SD大鼠随机分组,按照不同给药时间和给药方法制作全脑缺血再灌注模型,待全脑缺血15 min后再灌注,第5天行多聚甲醛灌注,石蜡包埋,尼氏染色观察海马CA1区神经元的存活情况.结果 在脑缺血再灌注后5 d,单次应...     

异丙酚和咪唑安定预处理对大鼠全脑缺血损伤的保护及递质机制

目的阐明异丙酚及咪唑安定预处理是否具有脑保护作用及其神经递质机制。方法雄性SD大鼠18只,随机分组,每组6只。建立清醒全脑缺血模型(4血管闭塞法)。收集清醒、缺血及再灌注后微透析标本。记录再灌注后的BIS变化,并观察反正反射恢复的时间。于缺血再灌注后进行运动功能双盲评定。全脑缺血3d后,迅速开颅取脑,10%甲醛固定后进行HE染色,并用TUNEL法进行细胞凋亡检测。双盲计数海马CA1区神经细胞及细胞凋亡率。结果异丙酚及咪唑安定预处理组与对照组相比,脑电BIS恢复较快;缺血期间谷氨酸递质浓度明显降低(P<0.01);反正反射恢复时间明显缩短(P<0.05);海马CA1区神经细胞计数明显增高(P<0.01);海马细胞凋亡率明显降低(P<0.01);两预处理组间无明显差异(P>0.05)。结论异丙酚及咪唑安定预处理脑缺血再灌注损伤具有脑保护作用,与减少缺血期间谷氨酸递质的释放有关;两组脑保护效能相同。     

慢性脑低灌注对2型糖尿病模型大鼠空间学习记忆能力的影响及胆碱能神经元损伤的机制探讨

目的探讨2型糖尿病（DM）是否加重慢性脑低灌注（CCH）大鼠胆碱能神经元及空间学习记忆能力损伤。方法SD大鼠24只,随机分为4组（均n=6）：①对照组（正常饮食＋假手术）;②DM组[高脂饮食＋链脲佐菌素（STZ）];③CCH组[正常饮食＋双侧颈总动脉永久性结扎（2-VO）];④DM-CCH组（高脂饮食＋STZ＋2-VO）。采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力;免疫组化学法检测海马区乙酰胆碱转移酶（CHAT）阳性细胞表达和免疫印迹法检测海马ChAT相对表达量。结果DM＋CCH组逃避潜伏期与对照组比较明显延长,第2-4天（P〈0．001）、第5天（P〈0．01）;目标象限时『目】百分比明显低干对照组（P〈0．01）、DM组（P〈0．05）和CCH组（尸〈O．05）。DM＋CCH组海马区ChAT阳性细胞表达明显减少,ChAT相对表达量较对照组显著减少（P〈0．01）、DM组（P〈0．05）和CCH组（P〈0．05）显著减少。结论DM可加重CCH大鼠的空间学习记忆能力障碍,可能与海马区胆碱能神经元损伤有关。     

二苯乙烯苷对大鼠癫痫引发的学习记忆功能的影响及保护作用

目的：研究二苯乙烯苷（tetrahydroxy stilbene glucoside, TSG）对癫痫大鼠脑损伤的保护作用及可能机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TSG干预组,应用立体定向脑室内微量注射的方法建立海人藻酸（KA）诱导的大鼠癫痫模型。5d后通过Morris水迷宫实验测定大鼠学习记忆功能;取脑行Nissl染色观察大鼠海马神经元的形态及数目改变。结果：与假手术组相比,模型组大鼠学习记忆能力明显降低,海马CA1区神经元大量丢失,结构紊乱。而TSG干预组可使癫痫引发的学习记忆能力降低的情况得到改善,抑制海马CAl区神经元的丢失,改善神经元结构。结论：TSG对癫痫引发的脑损伤,尤其是对海马区神经元迟发性凋亡具有明显的改善作用。     

有氧训练对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经细胞凋亡及再生的影响

目的:观察有氧训练对Aβ_25-35诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠海马神经细胞凋亡及再生的影响。方法:SD大鼠48只,随机分为3组（均n=16）:①假手术组（于大鼠侧脑室注射等量生理盐水+4周有氧训练）;②AD+有氧训练组(于大鼠侧脑室注射Aβ_25-35制作AD大鼠模型+4周有氧训练);③AD组(仅于大鼠侧脑室注射Aβ_25-35制作AD模型)。AD造模后第3天开始进行连续4周的无负重游泳训练,训练结束后各组大鼠分别行Morris水迷宫行为学检测认知行为能力、Hoechst染色观察海马神经细胞凋亡、BrdU/NeuN荧光双染观察齿状回（DG）区新生神经细胞分化及成熟。结果:①Morris水迷宫实验显示,与对照组相比,AD组逃避潜伏期显著延长（P<0.05）;AD+有氧训练组逃避潜伏期较AD组显著缩短（P<0.05）。②与对照组比,AD组齿状回区Hoechst阳性细胞显著增多（P<0.05）;AD+有氧训练组Hoechst阳性细胞较AD组显著减少（P<0.05）。③与对照组比,AD组齿状回Brdu、Brdu/NeuN双染阳性细胞明显减少（P<0.05）;AD+有氧训练组较AD组相比齿状回Brdu、Brdu/NeuN双染阳性细胞明显增多（P<0.05）。结论:有氧训练后,AD大鼠海马亚颗粒细胞区神经细胞的凋亡减少,齿状回神经再生增加,上述改变可能为有氧训练改善AD大鼠认知行为能力的机制之一。     

局部深低温停循环对大鼠血清NSE的作用

目的通过研究深低温停循环和顺行性灌注大鼠脑复苏对大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响，探讨深低温停循环和顺行性灌注对脑的治疗及保护效果。方法制造大鼠损伤模型，将大鼠随机分为对照组（9只）；实验组（9只），用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆中的NSE活性。结果实验组血清NSE活性在损伤后3、6、24h监测明显低于对照组（P〈0．01）。结论深低温停循环和顺行性灌注脑复苏技术通过降低NSE活性来增强脑细胞的自身保护作用可能是其抗神经细胞损伤的分子机制之一。