流式细胞仪检测大鼠局灶性脑缺血再灌流后细胞凋亡的研究

本研究采用流式细胞仪（ＦＣＭ）检测大鼠局灶性脑缺血再灌流后凋亡细胞ＤＮＡ断裂百分率。结果表明：随再灌流时间的增加，ＤＮＡ断裂百分率逐渐增加，再灌流１ｄ时达高峰，再灌流３～７ｄ逐渐下降。结果提示：细胞凋亡在局灶性脑缺血再灌流损伤中呈动态过程且系神经细胞死亡的重要形式。     

不同剂量巴曲酶对大鼠局灶性脑缺血再灌流后细胞凋亡的影响

目的　探讨不同剂量巴曲酶对大鼠局灶脑缺血再灌流的保护作用。方法　采用线栓法制备大脑中动脉缺血再灌流模型。利用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果　与对照组相比，巴曲酶组DNA断裂百分率明显降低(P<0.01)，随着用药剂量增加DNA断裂百分率呈下降趋势。结论　巴曲酶对脑缺血有保护作用，其保护作用与剂量有关。     

局灶性脑缺血再灌流过程中凋亡细胞相关基因的研究

目的 为了研究NO在局灶性脑缺血再灌流过程中对神经细胞的作用机制。特别是NO与细胞凋亡的关系。方法 利用RT-PCR方法观察了细胞凋亡相关基因Bcl-x和ICE在NNLA干预后局灶性脑缺血鼠脑组织中的表达水平。结果 局灶性脑缺血再灌流模型中凋亡相关基因的检测结果显示：（1）Bcl-x的表达在手术侧缺血期呈下降趋势,在再灌流期呈升高趋势;非手术侧改变不明显。（2）小剂量NNLA具有抑制Bcl-x表达的作用。（3）ICE的表达在缺血期表现为下降,而再灌流期则改变不明显;非手术侧均有升高趋势。结论 在局灶性脑缺血再灌流过程中,Bcl-x通过其表达量的增加,具有抑制细胞凋亡的作用。同时Bcl-x还有可能通过抑制ROS激活ICE的过程或直接抑制ROS的生成达到抑制凋亡的作用。所以ICE的表达水平下降则可能与Bcl-x升高有关。NO在局灶性脑缺血再灌流过程中同时影响Bcl-x和ICE的表达,这种影响与其对病理改变的影响是一致的。     

大鼠局灶性脑缺血再灌流后Caspase-3激活与神经元凋亡的关系

目的探讨Caspase-3与局灶性脑缺血后神经元凋亡的关系。方法局灶性脑缺血再灌流大鼠模型,按再灌流时间不同随机分为5组。用半定量RT-PCR观察了脑缺血后不同时程Caspase-3mRNA表达及四肽荧光底物法检测Caspase-3蛋白酶活性;用TUNEL方法检测不同时程细胞凋亡。结果脑缺血2h再灌流2h组Caspase-3mRNA水干即已升高(P＜0.05)),蛋白酶活性轻度升高,再灌流6h后两者均明显升高(P＜0.05);脑缺血再灌流后不同时程细胞凋亡具有与Caspase-3相似的变化趋势。结论提示脑缺血后细胞凋亡的发生与Caspase-3的激活有关。     

不同脑缺血和再灌流过程中大鼠脑组织NO含量的动态变化

采用线栓法制成大鼠大脑中动脉梗塞 ( MCAO)模型 ,依 Hb O2 - NO法测定持续性脑缺血和缺血 /再灌流脑组织内 NO含量的变化 ,以探讨不同脑缺血和再灌流过程中 NO的变化规律及其意义。结果 :缺血 3小时受损脑组织 NO水平即增高 ,再灌流后 NO逐步升高 ,而持续性缺血状态下 NO则表现降低后再升高的变化。虽然两组 NO在 7天时均有明显降低 ,但仍高于缺血前水平。认为持续性脑缺血和缺血 /再灌流情况下 NO的变化规律有所不同 ,与缺血脑组织的缺氧及产生 NO所需底物供应缺乏有关 ,且可能与脑组织的损害密切相关     

高热对大鼠局部脑缺血再灌流损伤的影响

目的 研究短暂高热（脑温40℃）在脑缺血再灌流不同时间对脑损伤的影响。方法 采用自制的大鼠脑温调控装置,分别于大鼠局部脑缺血1b,再灌流2h,24h,48h,对大鼠进行短暂的高热或常温处理,高热或常温处理后24h对大鼠进行神经功能缺损评分。72h后测脑梗死体积。结果 大鼠脑缺血再灌流2h时,40℃高热可导致脑梗死体积显著增大,神经功能显著恶化,而再灌流24h或48h后高热对脑损伤的作用不明显。结论 脑缺血后,短暂高热仅在再灌流早期对缺血性脑损伤有加重作用。高热加重缺血性脑损伤的时间窗可能仅限于脑缺血再灌流后24h内。     

4003/全脑缺血再灌注大鼠大脑皮质XRCC1和Ku70时程表达及茶氨酸对其影响（自译）

目的：探讨大鼠全脑缺血/再灌注时不同时点DNA修复蛋白XRCC1和DNA修复酶Ku70的变化,茶氨酸对全脑缺血/再灌注时大鼠大脑皮质细胞凋亡及其对DNA修复蛋白XRCC1和DNA修复酶Ku70时程表达的影响。方法：健康清洁雄性SD大鼠108只随机平均分为假手术组（SH组）、缺血/再灌注组（IR组）和茶氨酸干预组（TH组）。采用四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血/再灌注模型,干预组经尾静脉注射茶氨酸。分别于再灌注2h、6h、12h、24h、48h和72h处死大鼠,提取大脑皮质。HE染色观察神经元细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡;Real-time PCR方法检测XRCC1和Ku70表达。结果： HE染色显示：假手术组神经元细胞形态完整;缺血/再灌注组神经元细胞形态不完整;茶氨酸治疗组介于上两组之间。流式细胞仪检测凋亡细胞显示：缺血/再灌注组神经元凋亡率高于假手术组（p<0.05）;干预组介于上两组之间（p<0.05）。Real-time PCR显示：假手术组各时点XRCC1、Ku70表达均高;缺血再灌注组降低（p<0.05）;茶氨酸干预组介于上两组之间（p<0.05）。结论：1）大鼠全脑缺血/再灌注时,早期的大脑皮质DNA修复蛋白XRCC1降低先于细胞明显凋亡的发生,XRCC1的表达随再灌注时间持续衰减,推论其导致DNA单链断裂无法修复,进而导致细胞凋亡。2）大鼠全脑缺血/再灌注时,大脑皮质DNA修复酶Ku70于再灌注2h开始下降,6h降至最低后开始回升,推论其通过DNA双链断裂修复失败,参与细胞的凋亡。3）茶氨酸可减少大鼠全脑缺血/再灌注时大脑皮质细胞凋亡,增加XRCC1与Ku70的表达,帮助DNA损伤的修复,对脑缺血/再灌注损伤有保护作用。     

人工合成E-选择素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨人工合成E-选择素对大鼠局灶性脑缺血/再灌注（I/R）损伤后脑组织一氧化氮合酶（NOS）及血清一氧化氮（NO）含量的影响.方法 采用改良的Zea Longa法建立脑I/R损伤模型.66只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和人工合成E-选择素治疗组（治疗组）.治疗组大鼠采用股静脉注射人工合成E-选择素10 mg·kg-1.应用硝酸盐还原法测定血清中NO含量和免疫组化法检测缺血区脑组织神经型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性细胞数.结果 ①NO：以对照组NO含量为正常生理数据,模型组脑缺血2h/再灌注2～24h NO含量呈上升趋势,24 h时达高峰,72 h有所降低但仍高于对照组,各时间点与对照组比较明显增高（P＜0.01）;治疗组NO变化趋势同模型组,NO含量较模型组减少（P＜0.05）,较对照组增多（P＜0.01）.②NOS：以对照组nNOS、iNOS阳性细胞数为正常生理数据,模型组nNOS阳性细胞在脑缺血2h/再灌注2h后开始表达,12h达高峰,至24h开始降低,各时间点与对照组比较明显增高（P＜0.01）;模型组iNOS阳性细胞在脑缺血2h/再灌注2h开始出现,并持续增多,随时间延长呈上升趋势,24h达高峰,至72 h出现下降,各时间点与对照组比较明显增多（P＜0.01）;治疗组各时间点nNOS、iNOS阳性细胞变化趋势同模型组,但较模型组减少（P＜0.05）,较对照组增多（P＜0.01）.结论 大鼠脑I/R损伤后脑组织NOS活性表达增多,NO浓度升高导致脑组织损伤;人工合成E-选择素通过降低NOS表达,减少NO释放、减轻炎症反应和脑I/R损伤,起脑保护作用.     

bFGF对脑缺血再灌流后HSP70及凋亡的影响

目的：研究外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对脑缺血再灌流后HSP70表达与细胞凋亡的影响,方法：线栓法制成大鼠大脑中动脉闭塞及再灌流模型,用免疫组化及原位末端标记的方法观察大鼠大脑中动脉闭塞2h后再通1－72h脑组织HSP70表达与凋亡细胞的分布,侧脑室注射外源性bFGF,并观察对它们的影响。结果：bFGF组与生理盐水组相比于6－48h各时间点的HSP70表达增高（P＜0．05）,凋亡细胞数明显减少（P＜0．05,P＜0．01）。结论：外源性bFGF可能诱导脑缺血再灌流后HSP70表达和抑制细胞凋亡。     

阿魏酸钠对大鼠脑缺血—再灌流后氧化性DNA损伤的保护作用

为研究脑缺血 再灌流后氧化性DNA损伤及阿魏酸钠的保护作用 ,采用线栓法制成大鼠大脑中动脉阻塞及再通模型。大脑中动脉再通时静脉注射阿魏酸钠 (15mg/kg) ,用免疫组织化学方法检测脑缺血 2h ,再灌流 4 8h后缺血再灌流组、阿魏酸钠组及对照组脑组织再灌流后氧化性DNA损伤产物 8 羟基脱氧鸟苷(8 OHdG)的表达。结果发现对照组脑区仅见少数散在微弱的 8 OHdG阳性表达 ;缺血再灌流组大脑中动脉阻塞侧额顶叶上部皮质和内侧尾壳核脑区有大量的 8 OHdG阳性表达 ,较对照组显著增加 (P <0 .0 1) ;阿魏酸钠组 8 OHdG阳性表达在脑区分布与缺血再灌流组相似 ,但较缺血再灌流组显著减少 (P <0 .0 1)。上述结果表明脑缺血—再灌流所致的氧化性DNA损伤主要存在于缺血半暗带 ,阿魏酸钠对氧化性DNA损伤具有保护作用。     

Reperfusion following focal cerebral ischemia alters distribution of neuronal cells with DNA fragmentation in mice

To clarify the role of reperfusion in DNA damage following focal cerebral ischemia, we determined the distribution of cells with DNA fragmentation following permanent or transient focal ischemia. Less DNA-damaged cells were observed in the permanent than in the transient group in the ischemic core, but there was no difference in the boundary zone. We conclude that reperfusion following transient ischemia may exacerbate neuronal death following DNA damage.     

NO对实验性局灶脑缺血再灌流神经细胞凋亡影响的定量研究

目的 研究ＮＯ在局灶性脑缺血再灌流过程中对神经细胞的作用机制，特别是ＮＯ与细胞凋亡的关系。方法 利用流式细胞仪检测法，测定Ｎ－硝基－左旋－精氨酸（ＮＮＬＡ）干预后局灶性脑缺血鼠脑组织中神经细胞的凋情况。结果 在缺血再灌流期间过多或过少的ＮＯ均对缺血区凋亡峰有明显影响，小剂量ＮＮＬＡ减少神经细胞凋亡的发生率，大剂量ＮＮＬＡ增加神经细胞凋亡的发生率。结论 局灶性脑缺血的不同区域，包括正常及病变组织中的     

选择性COX2抑制剂对脑缺血再灌注损伤的影响

目的 :观察脑缺血再灌注损伤中COX2的表达以及选择性COX2抑制剂SC5 812 5对脑缺血再灌注后脑梗死体积、PGE2 含量的影响。方法 :应用小鼠短暂性局灶性脑缺血模型 ;脑梗死体积的测定采用TTC染色法 ;ELISA测定PGE2 含量 ;DNA单链损伤的测定采用PANT染色。结果 :缺血前 3 0min和缺血后 2h用药组脑梗死体积显著缩小 ,缺血后 6h延迟用药组脑梗死体积无明显变化。脑缺血再灌注后PGE2 含量显著升高。SC5 812 5的治疗显著降低了PGE2 的水平。SC5 812 5并可显著抑制缺血后DNA单链损伤的程度。结论 :提示COX2参与了脑缺血再灌注损伤 ,选择性COX2抑制剂在小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的模型中起着重要作用     

Hypothermic prevention of nuclear DNA fragmentation in gerbil hippocampus following transient forebrain ischemia

The protective effect of hypothermia on DNA fragmentation following transient forebrain ischemia in mongolian gerbils was investigated. The DNA fragmentation demonstrated in situ in gerbil hippocampal CA1 was compared between intra- and post-ischemic hypothermia. Intra- ischemic hypothermia prevented the DNA fragmentation in hippocampal CA1 completely while severe DNA damage was observed in post-ischemic hypothermia group. The degree of DNA fragmentation of hippocampal CA1 in the post-ischemic hypothermia group was equal to that in the ischemic control group. The results suggest that hypothermia during a transient forebrain ischemia exerts a protective effect on the post-ischemic hippocampal damage by preventing the DNA fragmentation in CA1 neurons. [Neurol Res 1995; 17; 461-464]     

Inhibition of apoptosis by hyperbaric oxygen in a rat focal cerebral ischemic model.

The hypothesis was tested that hyperbaric oxygen therapy (HBO) reduced brain infarction by preventing apoptotic death in ischemic cortex in a rat model of focal cerebral ischemia. Male Sprague-Dawley rats were subjected to middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) and subsequently were exposed to HBO (2.5 atmospheres absolute) for 2 h, at 6 h after reperfusion. Rats were killed and brain samples were collected at 24, 48, 72 h, and 7 days after reperfusion. Neurologic deficits, infarction area, and apoptotic changes were evaluated by clinical scores, 2,3,7-triphenyltetrazolium chloride staining, caspase-3 expression, DNA fragmentation assay, and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated 2'-deoxyuridine 5'-triphosphate-biotin nick end labeling (TUNEL)-hematoxylin and eosin (H&E) costaining. In MCAO/R without HBO treatment animals, DNA fragmentation was observed in injured cortex at 24, 48, and 72 h but not in samples at 7 days after reperfusion. Double labeling of brain slides with NeuN and caspase-3 demonstrated neurons in the injured cortex labeled with caspase-3. TUNEL+H&E costaining revealed morphologic apoptotic changes at 24, 48, and 72 h after reperfusion. Hyperbaric oxygen therapy abolished DNA fragmentation and reduced the number of TUNEL-positive cells. Hyperbaric oxygen therapy reduced infarct area and improved neurologic scores at 7 days after reperfusion. One of the molecular mechanisms of HBO-induced brain protection is to prevent apoptosis, and this effect of HBO might preserve more brain tissues and promote neurologic functional recovery.     

全脑缺血再灌注兴奋性氨基酸、线粒体钙、钙调素含量的变化

目的：采用大鼠全脑缺血再灌注模型,观察海马组织兴奋性氨基酸、线粒体钙、钙调素含量的变化,研究分析脑缺血再灌注损伤中兴奋性氨基酸与钙平衡紊乱的变化和作用。方法：测定假手术组,缺血３０ｍｉｎ再灌注６０ｍｉｎ和缺血３０ｍｉｎ再灌注１２ｈ组,脑海马组织兴奋性氨基酸、线粒体钙、钙调素的含量。结果：缺血３０ｍｉｎ再灌注６０ｍｉｎ海马组织兴奋性氨基酸明显低于假手术组（Ｐ＜０．０１）,线粒体钙、钙调素含量显著性高于假手术组（Ｐ＜０．０１）,缺血３０ｍｉｎ再灌注１２ｈ组同假手术组比较没有显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：我们从鼠脑缺血再灌注时线粒体钙、钙调素含量升高证实钙平衡紊乱参于兴奋性氨基酸的缺血再灌注脑损伤过程