骨髓基质细胞对多细胞因子介导人脐血单个核细胞体外扩增的影响*

背景：体外扩增脐血造血细胞的目的是促进脐血造血细胞的植入能力,细胞因子介导的脐血造血细胞能使细胞数有效扩增,但同时也耗竭了具有分化潜能的造血干细胞。 目的：观察骨髓基质细胞对多细胞因子组合介导人脐血单个核细胞体外扩增及扩增后黏附分子和CXCR4表达的影响。 方法：将分离的人脐血单个核细胞接种在预先建立的人骨髓基质细胞层上,分组培养：对照组仅含有脐血单个核细胞;多种细胞因子+脐血单个核细胞组;骨髓基质细胞+脐血单个核细胞组;骨髓基质细胞+多种细胞因子+脐血单个核细胞组。培养0,7 d检测有核细胞数, CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD62L+,CD34+CD49d+的细胞数。 结果与结论：单纯骨髓基质细胞和单用细胞因子组均可有效地扩增脐血造血细胞,并提高造血细胞上CD49d,CD62L及 CXCR4表达。而单用细胞因子组促进脐血造血细胞扩增能力较单纯骨髓基质细胞强,提高造血细胞CD49d,CD62L及 CXCR4表达能力较单纯骨髓基质细胞差。提示骨髓基质细胞虽可支持脐血造血细胞扩增,但难以实现造血细胞的大量扩增,但在骨髓基质细胞层的支持下,多细胞因子可有效地促进脐血造血细胞的扩增,并优于单用细胞因子及骨髓基质细胞,证实骨髓基质细胞可协同多细胞因子有效地促进脐血单个核细胞的扩增,促进造血干细胞的黏附和趋化能力。     

脐血贴壁层细胞和骨髓基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响★

目的：比较脐血贴壁层细胞和骨髓的基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响。 方法：实验于2005-02/07在吉林省肿瘤防治研究所完成。①对象：正常足月顺产儿脐带由长春市妇产医院提供；肋骨取自吉林省肿瘤医院外科手术患者，排除血液疾患。产妇及外科手术患者对治疗及实验均签署知情同意书，实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：采用红细胞裂解法制备有核细胞，以Ficoll-paque淋巴细胞分层液按密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞，体外培养24 h后去除悬浮细胞，收集脐血贴壁层细胞，加入到24孔板中，2×106 L-1/孔，再加入含12.5%马血清、12.5%胎牛血清、1×10-7 mol/L氢化考地松的IMDM培养体系1 mL。将肋骨剪成3 cm小块，冲洗髓腔收集细胞悬液，用淋巴细胞分层液分离出骨髓单个核细胞，同法进行骨髓基质细胞的培养。分别将两种细胞于37 ℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养3周后，各自加入到24孔板，2×106 L-1/孔，同时每孔再加入1×106 L-1脐血单个核细胞，培养7 d。以未添加脐血贴壁层细胞及骨髓基质细胞的脐血单个核细胞作为空白对照。③实验评估：倒置显微镜下观察脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的生长状态。采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞周期分布。甲基纤维素半固体培养法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位情况。 结果：①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的形态：培养2周时，多数脐血贴壁层细胞呈大小不等的圆形、椭圆形，少部分呈不规则形；骨髓基质细胞主要为梭形，细胞排列成漩涡状、辐射状或相互缠绕成束状。②细胞周期：与空白对照相比，经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预的脐血单个核细胞S+G2+M期所占比例均显著升高（P < 0.05）。③混合集落形成单位：经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预后的脐血单个核细胞，其混合集落形成单位的数量显著高于空白对照（P < 0.05）。 结论：①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞在形态上具有一定差异，但均能提高脐血单个核细胞体外增殖能力。②脐血贴壁层细胞可替代骨髓基质细胞作为脐血造血细胞体外扩增的辅助条件。     

人脐血单个核贴壁细胞与胃癌细胞的共培养：最适效靶比筛选***☆

背景：近年来大量研究关注脐血细胞可能对肿瘤细胞有杀伤和抑制作用,人们尝试利用脐血细胞移植抑制和杀伤肿瘤细胞,这为临床医生们提供了抗癌的新途径。目的：探讨人脐血单个核细胞与肿瘤细胞体外共培养后,对肿瘤细胞的抑制作用。方法：采用密度梯度离心的方法分离人脐血单个核细胞,流式检测细胞表面Marker表达,将单个核细胞与胃癌细胞进行共培养,倒置显微镜观察两种细胞共培养后细胞形态的变化,采用了乳酸脱氢酶法检测对肿瘤细胞的抑制作用,找出抗肿瘤细胞效果最好的效靶比。结果与结论：加入脐血的贴壁单个核细胞贴壁细胞2 d后,肿瘤细胞的脱落明显,贴壁细胞实验组肿瘤细胞排列不规整,细胞密度低。酸脱氢酶法显示部分脐血贴壁细胞确有较强的抗肿瘤能力,但个体间抗肿瘤的能力差异较大,最大可相差4倍。脐血单个核贴壁细胞对肿瘤细胞有直接的杀伤作用,其最适的效靶比为2:1。     

利用基因芯片分析碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血干细胞CD34+与CD133+细胞基因表达的差异*

背景：迄今为止,人们利用基因芯片对碱性成纤维细胞生长因子诱导CD34+和CD133+干细胞分化后细胞生物学性状、功能调控、基因变化及其表达差异等方面的认识尚不足,有待深入研究。 目的：利用基因芯片比较脐血CD34+和CD133+细胞基因表达的差异,并探讨碱性成纤维细胞生长因子体外诱导脐血CD34+和CD133+造血干/祖细胞分化的基因表达变化,及其对碱性成纤维细胞生长因子反应性差异。 方法：利用MiniMACS免疫磁珠法从脐静脉血单个核细胞中分离出CD34+和CD133+干/祖细胞,经含碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM/F12细胞营养液培养10~15 d,提取培养前后细胞总RNA,利用Oligo GEArray®芯片和GEArray表达分析软件进行芯片数据分析。流式细胞仪检测CD34+和CD133+造血干细胞回收率。碱性成纤维细胞生长因子诱导前后CD34+、CD133+细胞形态变化。变性琼脂糖凝胶电泳测定RNA浓度和纯度。基因芯片检测结果。 结果与结论：①对20份脐血分别进行CD34+和CD133+细胞分选,分选CD34+细胞纯度为(77.52±5.06)%,回收率为(2.74±1.59)%;CD133+细胞纯度为(79.16±3.37)%,回收率为(1.12±0.94)%。②新分选出的CD34+细胞呈球形,经碱性成纤维细胞生长因子培养15 d后,多数细胞形态未发现显著变化,部分细胞出现贴壁生长,可见突起和梭形细胞。CD133+细胞呈球形,经碱性成纤维细胞生长因子培养15 d后,细胞明显扩增,由圆球形变为不规则形,部分细胞出现贴壁生长。③CD34+干细胞培养前后总RNA提取质量分别为2 236 ng和1 796 ng;CD133+干细胞培养前后总RNA提取质量分别为2 518 ng和2 191 ng。④在所检测的263个干细胞相关基因中,脐血CD133+细胞与CD34+细胞基因表达差异2倍以上的基因有10种,其中5种基因表达前者高于后者,5种基因表达前者低于后者;碱性成纤维细胞生长因子诱导培养后,CD133+细胞有32种基因表达显著高于CD34+细胞,在检测的263个基因中,未见低于CD34+细胞的基因。证实脐血中新分离的CD133+细胞和CD34+细胞基因表达仅有少数基因存在差异;CD133+细胞对碱性成纤维细胞生长因子的反应性显著强于CD34+细胞,表现为细胞周期调节、信号转导和分化等基因表达增强。     

脐血单个核细胞治疗血管性痴呆的影像分析

目的 用SCT和MRI评价脐血单个核细胞治疗老年期血管性痴呆(VD)的疗效.方法 对18例多份人脐血单个核细胞静脉移植治疗VD患者细胞移植前后的SCT和MRI影像资料与临床资料进行对照分析.结果 脐血单个核细胞静脉移植治疗老年期VD的影像改变包括:脑梗死、脱髓鞘恢复差别有显著性(P＜0.05),脑萎缩恢复差别无显著性(P＞0.05).结论 脐血单个核细胞静脉移植治疗老年期VD能缓解大面积脑梗死、脱髓鞘情况,从而提高生活质量,脑萎缩不能缓解,但能延缓病情发展.     

骨髓单个核细胞移植对心肌基质细胞衍生因子1-CXCR4轴的影响

背景：心脏干细胞移植后心肌基质细胞衍生因子1-CXCR4轴表达及其作用越来越受到人们的关注。 目的：观察经心外膜注骨髓单个核细胞对心衰犬心脏基质细胞衍生因子1-CXCR4轴 mRNA表达的影响。 方法：16只杂种犬随机数字表法均分为移植组和对照组,植入永久起搏器。右室快速起搏三四周后建立心衰模型。移植组犬经心外膜多点注射骨髓单个核细胞悬液,对照组注射等量生理盐水。 结果与结论：快速起搏三四周后,各项超声参数及血流动力学参数较起搏前改变明显,差异有显著性意义。定量PCR检测细胞移植组基质细胞衍生因子1 mRNA及CXCR4 mRNA表达水平高于对照组(P < 0.01)。说明经心外膜注射的骨髓单个核细胞可提高心肌基质细胞衍生因子1 mRNA及CXCR4 mRNA表达水平。     

离心管贴壁细胞对人脐血单个核细胞体外培养成功率的影响

背景：在常规的脐血间充质干细胞密度梯度离心分离过程中,离心管壁有大量单个核贴壁细胞,这些早期的贴壁细胞是否与脐血间充质干细胞的体外培养成功率低存在一定的联系呢？ 目的：比较4种方法分离人脐血单个核细胞的体外培养成功率,观察离心管贴壁细胞对人脐血单个核细胞体外培养成功率的影响。 方法：取足月健康顺产新生儿脐血36份,随机分为4组,每组9份,于采集后6 h内分别采用甲基纤维素沉降法(A组)、密度梯度离心分离法(B组)、甲基纤维素联合密度梯度离心分离法(C组)、甲基纤维素联合改良密度梯度离心分离法(D组)分离出单个核细胞,锥虫蓝染色检测细胞活力,用细胞计数板进行细胞计数,调整细胞浓度为1×109 L-1~2×109 L-1,接种于含体积分数为10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中培养和传代,相差显微镜下观察脐血单个核细胞的形态。收集第3代脐血单个核细胞,采用细胞计数板进行计数,计算扩增倍数,采用流式细胞仪鉴定细胞免疫表型。 结果与结论：36份脐血中,成功分离33份脐血单个核细胞,B组有3份分离失败。33份中共22份原代培养中出现大量贴壁细胞,其中A组8份,B组2份,C组5份,D组7份。9份(27%)培养出能融合且可稳定传代的成纤维样细胞,其中A组3份,B组0份,C组1份,D组5份。4组脐血单个核细胞在原代培养5~7 d后均可见数量不等的贴壁细胞,呈梭形成纤维样细胞或(和)圆形巨核样细胞。A组与D组于原代培养三四周可见成纤维样细胞集落形成,细胞形态与骨髓间充质干细胞相似,呈较均一的长梭形,可稳定培养至60~90 d形态无明显变化。流式细胞仪免疫检测,第3代脐血单个核细胞不表达或弱表达CD34、CD45和CD106等造血干细胞和内皮细胞标志,但显著表达CD29、CD105等间充质干细胞表面标志。结果显示离心管贴壁细胞可显著提高脐血单个核细胞的体外培养成功率,而甲基纤维素联合改良的密度梯度离心分离法,可充分回收离心管贴壁细胞,利于脐血单个核细胞的体外扩增和稳定传代。     

系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞生长特性与相关细胞因子的表达

背景：骨髓造血依赖于干细胞所处的造血微环境，其中基质细胞及多种细胞因子在造血中发挥着重要的调控作用。系统性红斑狼疮具有淋巴细胞亚群及相关细胞因子表达，其基质细胞及细胞因子的异常可能导致造血微环境异常，损伤造血功能。 目的：观察体外培养系统性红斑狼疮基质细胞的生长特性及细胞因子白细胞介素6、白细胞介素8的表达，探讨细胞因子与系统性红斑狼疮活动的关系，阐明系统性红斑狼疮慢性病贫血可能的病理机制。 设计、时间及地点：细胞学体外培养，病例-对照观察，于2008-01/12在大连医科大学附属第二医院血液风湿科及血液学实验室完成。 对象：选择大连医科大学附属第二医院血液风湿科收治的活动期系统性红斑狼疮患者15例(实验组)，男1例，女14例，中位年龄32(20~55)岁；合并慢性病贫血者7例，无贫血者8例。另选健康个体10名作为对照，男9名，女1名，中位年龄46(38~57)岁。 方法：取系统性红斑狼疮患者及健康对照者的骨髓液分离单个核细胞培养。 主要观察指标：系统性红斑狼疮患者及健康对照者骨髓基质细胞生长特性及体外培养上清白细胞介素6和白细胞介素8的水平。 结果：系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞较健康对照生长及集落形成均延后，合并慢性病贫血的系统性红斑狼疮患者更加明显，集落内各细胞排列欠规整有序。与健康对照者相比，系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞体外培养上清细胞因子白细胞介素6、白细胞介素8的表达显著升高(P < 0.01)，并且与系统性红斑狼疮的疾病活动呈正相关。 结论：由于系统性红斑狼疮基质细胞可能存在功能的缺陷，并且高表达细胞因子如白细胞介素6、白细胞介素8，损伤了骨髓微环境，最终导致系统性红斑狼疮患者造血功能异常。细胞因子可能成为系统性红斑狼疮疾病活动的标志。     

异基因造血干细胞移植后EB病毒再激活的危险因素分析

背景：异基因造血干细胞移植后EB病毒再激活可导致致死性的移植后淋巴细胞增殖性疾病及相关疾病,目前国内尚未建立完整的EB病毒再激活及其相关性疾病的诊疗体系。目的：前瞻性研究异基因造血干细胞移植后患者EB病毒再激活的发生和相关危险因素。方法：纳入129例接受异基因造血干细胞移植的患者,采用实时定量PCR方法定期测定外周血中EB病毒载量,Kaplan-Meier模型分析其再激活的发生率,Logistic回归分析模型分析其再激活的相关危险因素。结果与结论：异基因造血干细胞移植后EB病毒再激活及其相关疾病发生率高,EB病毒再激活发生的危险因素有HLA配型不合、应用抗胸腺细胞球蛋白、Ⅲ~Ⅳ度急性移植物抗宿主病及年龄小于20岁。     

输入供体凋亡细胞对受体外周免疫耐受的影响

背景：预输注供者凋亡细胞能够诱导受者体内产生针对供者抗原发生的特异性免疫耐受，但其具体途径尚不清楚。 目的：观察供体凋亡淋巴细胞输注后受体外周血细胞因子的变化。 设计、时间及地点：细胞观察性实验，于2007-11/2008-05在南方医科大学附属珠江医院移植免疫实验室完成。 材料：供体C57BL雄性小鼠14只，8~10周龄，受体 Balb/c雄性小鼠 50只，6~8周龄。 方法：分离供体小鼠脾脏细胞，放置于紫外线灯距离20 cm处的摇床上照射1 h，紫外线诱导C57BL小鼠脾脏细胞凋亡。将受体Balb/c小鼠随机分为凋亡细胞组和活细胞组，分别将107个供体C57小鼠脾脏凋亡细胞、活细胞经尾静脉输注于受体小鼠。 主要观察指标：输注后0，1，3，6，12 h经心脏采血，Luminex技术液态芯片法检测外周血白细胞介素1β、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ、肿瘤坏死因子变化。 结果：只检测到白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ 5种细胞因子，其他细胞因子未测出。经紫外线诱导后小鼠脾脏细胞凋亡率达到93.86%。与0 h相比，外周血中干扰素γ和白细胞介素10分别在输注活细胞后6 h和3，6 h明显升高，其他细胞因子无明显变化。与0 h相比，输注凋亡细胞1，3，6，12 h后，外周血中各细胞因子无明显变化。活细胞组输注后1 h白细胞介素6和输注后3，6 h白细胞介素10浓度高于凋亡细胞组，其他细胞因子差异不显著。 结论：同种异源供者凋亡淋巴细胞输注对外周血细胞因子浓度无变化，提示其对受体外周免疫功能可能无明显影响，其诱导产生的免疫耐受可能主要在局部发挥作用。     

参考桩钉修正曲面断层片垂直向的测量值*

背景：牙周病的诊断和治疗过程中常需测量牙槽骨高度和牙根长度,用曲面断层片对其进行定量测量的可靠性一直存在争议。 目的：验证用参考桩钉修正曲面断层片垂直向测量值的可行性。 方法：采用20例正畸患者的寄存模,在模型中的磨牙区、双尖牙区、尖牙区和切牙区嵌入5.00 mm钢珠作为测量对象,并在与钢珠相应的位置放置10.0 mm桩钉作参照物。拍摄模型的曲面断层片,测量钢珠影像垂直径,用桩钉校准和修正测量结果,比较钢珠影像测量值和真实值的差异。 结果与结论：用单一部位的参照物和1组参照物的平均值来校准,不同区域和不同桩钉放置方法测量结果的失真率不同,部分区域的失真率≥5%。在测量区域相应的部位放置完全垂直于牙合 平面的参考桩钉来修正测量值,可提高各区域测量结果的准确性,其失真率皆<1%,修正后的结果不受参照物的影响。而用贴在模型牙槽骨表面的参考桩钉来修正测量值,所得结果不理想。     

Comparing the effects of two different strains of mycobacteria,Mycobacterium vaccae NCTC 11659 and M. vaccae ATCC 15483, on stress-resilient behaviors and lipid-immune signaling in rats

Stress-related disorders, such as posttraumatic stress disorder (PTSD), are highly prevalent and often difficult to treat. In rodents, stress-related, anxiety-like defensive behavioral responses may be characterized by social avoidance, exacerbated inflammation, and altered metabolic states. We have previously shown that, in rodents, subcutaneous injections of a heat-killed preparation of the soil-derived bacterium Mycobacterium vaccae NCTC 11659 promotes stress resilience effects that are associated with immunoregulatory signaling in the periphery and the brain. In the current study, we sought to determine whether treatment with a heat-killed preparation of the closely related M. vaccae type strain, M. vaccae ATCC 15483, would also promote stress-resilience in adult male rats, likely due to biologically similar characteristics of the two strains. Here we show that immunization with either M. vaccae NCTC 11659 or M. vaccae ATCC 15483 prevents stress-induced increases in hippocampal interleukin 6 mRNA expression, consistent with previous studies showing that M. vaccae NCTC 11659 prevents stress-induced increases in peripheral IL-6 secretion, and prevents exaggeration of anxiety-like defensive behavioral responses assessed 24 h after exposure to inescapable tail shock stress (IS) in adult male rats. Analysis of mRNA expression, protein abundance, and flow cytometry data demonstrate overlapping but also unique effects of treatment with the two M. vaccae strains on immunological and metabolic signaling in the host. These data support the hypothesis that treatment with different M. vaccae strains may immunize the host against stress-induced dysregulation of physiology and behavior.