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相似文献
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1.
目的 评估经小脑注射携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(rAAV)对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠神经元细胞骨架损伤是否具有保护作用.方法 将携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒(rAAV) 注射入 2周龄npc-/-小鼠的小脑,采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察该病毒对 npc-/-小鼠神经元细胞骨架损伤的保护作用.结果 (1)携带cdc2-siRNA的rAAV明显减少npc-/-小鼠轴突球状体的数量;(2)携带cdc2-siRNA的rAAV有效抑制磷酸化的神经丝(由SMI31识别)及磷酸化的Tau蛋白(由PHF-1识别)的表达. 结论小脑注射携带cdc2-siRNA的rAAV对npc-/-小鼠神经元细胞骨架损害具有保护作用.  相似文献   

2.
目的 观察细胞周期依赖性蛋白激酶特异性抑制剂Roscovitine对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠(npc^-/-)的治疗作用。方法 采用72、144、300和600nmol/d的Roscovitine对5周龄的npc^-/-小鼠(n=6~10)进行2周侧脑室灌注,以DMSO灌注的同龄npc^-/-小鼠(n=6~10)为对照;采用免疫组织化学染色、H&.E染色和小鼠衣架悬挂试验来进行检测。结果 Roscovitine能显著减少球状轴突的数量,延缓浦肯野细胞的死亡并改善npc^-/-小鼠的运动功能。结论 Roscovitine对NPC的神经系统变性有一定的保护作用。  相似文献   

3.
目的:观察抑制细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cdk5)的表达对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠(npc-/-)的治疗作用。方法:采用携带cdk5特异性小干扰RNA(cdk5-siRNA)的重组腺相关病毒rAAV-cdk5-siRNA-GFP,对出生三天内的npc-/-小鼠进行双侧侧脑室注射,以rAAV-GFP注射组及非手术的同龄npc小鼠为对照(n=6~10/组);采用免疫组织化学染色、HE染色和小鼠衣架悬挂试验来评价小鼠脑内的神经病理改变和运动功能。结果:rAAV2-cdk5-siR-NA-GFP能显著减少轴突球状体的数量,延缓浦肯野细胞的死亡并改善npc-/-小鼠的运动功能。结论:降低cdk5的活性对npc-/-小鼠的神经元有一定的保护作用。  相似文献   

4.
背景:细胞分裂周期2(cell division cycle 2, cdc2)在神经变性疾病如阿尔茨海默病的神经元变性过程中扮演了重要角色。以腺相关病毒为载体对cdc2基因进行沉默,可能对神经变性疾病的神经元起保护作用。 目的:包装携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)。 设计、时间及地点:空白对照实验,于2007-10/2008-08在武汉同济医院神经科实验室完成。 材料:Helper Free 腺相关病毒系统(pAAV-MCS-EGFP、p-RC、p-Helper)及AAV-293细胞为Stratagene公司产品。 方法:应用分子生物学方法构建生成pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP表达质粒;用磷酸钙法将该质粒和p-RC、p-Helper质粒共转染AAV-293细胞,包装生成携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒 (rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP)。病毒感染AAV-293细胞后行Western Blot 检测cdc2-siRNA对细胞内cdc2基因的沉默效果,并用斑点杂交方法测定该病毒的滴度。 主要观察指标:pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP质粒中插入片段U6-cdc2-siRNA的测序;3质粒pAAV- MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP、p-RC、p-Helper共转染AAV-293细胞; rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP感染AAV-293细胞后cdc2的表达。 结果:①DNA测序证明U6-cdc2-siRNA已成功构建到表达质粒pAAV-MCS-EGFP中。②AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白,共转染成功。③包装得到的重组腺相关病毒 (rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP)感染AAV-293细胞后能显著下调 AAV-293细胞cdc2基因的表达量。④rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP的滴度为1x1012 v.g/mL。 结论:携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒的包装获得成功,它具有沉默cdc2基因表达的功能。  相似文献   

5.
目的为探讨TNF-α在C型Niemann-Pick病(NPC)神经变性中的作用,构建携带小鼠TNF-α-siRNA的慢病毒载体并进行体外研究。方法设计3个TNF-α-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSIH1-H1-copGFP siRNA载体;重组质粒转染293T细胞,通过实时定量PCR检测筛选出干扰效果最佳的TNF-α-siRNA;筛选出的pSIH-siRNA、pSIH-negative分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成慢病毒;慢病毒感染BV-2细胞和星形胶质细胞,采用RT-PCR以及Elisa检测TNF-α-siRNA的沉默效果。结果成功构建携带TNF-α-siRNA的慢病毒载体,滴度达2×10^8ifu/L;慢病毒感染BV-2和星形胶质细胞,表达GFP且可下调TNF-α表达。结论TNF-α-siRNA能明显下调TNF-α的表达,为研究和治疗神经变性疾病以及TNF-α相关疾病提供了有力的工具。  相似文献   

6.
目的探讨不同血清型对成熟肌纤维的转导效率.方法我们用不同的血清型AAV(rAAV-1,rAAV-2,rAAV-3和rAAV-5)表达LacZ和GDNF基因研究在小鼠骨骼肌转导效率,转基因表达用组化方法或ELISA来评定. 结果在3周龄的小鼠中,LacZ组化染色显示rAAV5在慢和快的肌纤维中都有效的转导,而rAAV2和rAAV3优先在慢纤维中转导.在8周龄的小鼠(成年鼠)中,rAAV3和rAAV5在慢纤维和快纤维中都有效的转导.用rAAV3-LacZ或rAAV5-LacZ优先转导的慢纤维与rAAV2相比没有显著性差异.用8周龄的小鼠肌肉注射不同血清型的rAAV-GDNF后,结果显示rAAVl-GDNF表达最高;rAAV2、rAAV3和rAAV5在骨骼肌的表达也有效.结论在肌肉基因转导中,rAAV3和rAAV5介导的载体都是有效的,能克服rAAV2所受到的限制.  相似文献   

7.
目的 研究钙离子/ 钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)在跑步机训练改善帕金森病(PD)模型小鼠 记忆功能中的分子机制,为PD的治疗提供一个新的思路。方法 将6-羟基多巴胺立体定向注射至小 鼠左侧纹状体内制备偏侧PD小鼠模型,利用圆柱体实验筛选PD 模型。将造模成功的PD小鼠(n=32)随 机分为PD 非跑步机训练组(PD+no-Ex 组,n=8)、低速跑步机训练组(PD+Low-Ex,n=8)、中速跑步机训练 组(PD+Medium-Ex,n=8)和高速跑步机训练组(PD+High-Ex,n=8),并设Sham 组(n=8,在相同部位注射 生理盐水)作为对照。利用Morris水迷宫实验观察各组小鼠的学习记忆能力,并对其行为学结果进行分 析评价,选取Sham组、PD+no-Ex 组及PD+Low-Ex 组海马组织,利用Western blot 检测小鼠海马中环磷腺 苷效应元件结合蛋白(CREB)、酪氨酸羟化酶(TH)、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和CaMK Ⅱ的 磷酸化水平。结果 Morris水迷宫定位航行实验结果表明各组小鼠的平均逃避潜伏期随着训练时间的 延长呈逐渐下降趋势,低中高速跑步机训练都有利于PD 小鼠记忆功能的恢复(P< 0.05),但低速跑步机 训练组小鼠改善得更明显(P< 0.05)。空间探索实验结果则表明,与Sham组比较,PD+no-Ex 组小鼠穿 越平台次数明显减少,差异有统计学意义(P< 0.05);与PD+no-Ex 组比较,不同速度跑步机训练组小鼠 穿越平台次数明显增加,差异有统计学意义(P< 0.05)。Western blot 结果显示,与Sham 组比较,PD+no- Ex 组磷酸化CREB、ERK1/2、CaMK Ⅱ及TH水平明显降低,差异均有统计学意义(P < 0.05);与PD+no- Ex 组比较,PD+Low-Ex 组上述指标明显升高,差异均有统计学意义(P< 0.01)。结论 低速跑步机训练 对PD 模型小鼠学习记忆能力的改善作用更显著,其可能是通过上调海马中蛋白激酶A(PKA)介导的信 号转导通路,从而改善PD小鼠的认知功能。  相似文献   

8.
目的 探讨漆黄素对帕金森病的神经保护作用及具体机制。方法 采用MPTP腹腔注射复制亚急性PD小鼠模型,漆黄素灌胃给药,实验分为3组:control组、MPTP组、漆黄素+MPTP组。通过旷场实验、爬杆实验、悬挂实验等行为学指标评估小鼠的运动行为。采用Western blotting和免疫荧光技术检测纹状体中TH水平和黑质中TH阳性神经元数量。采用尼氏染色检测黑质区神经元的损伤状况。通过检测纹状体区GSH、SOD、T-AOC、MDA含量,评估脑组织中氧化应激水平。结果 与MPTP组相比,漆黄素+MPTP组,小鼠的运动总距离及运动速度提高(P<0.05);爬杆总时间及转头时间缩短(P<0.05)。悬挂实验评分提高(P<0.05)。尼氏染色结果发现,漆黄素可缓解MPTP小鼠黑质区神经元损伤(P<0.05)。TH免疫印迹及免疫荧光实验发现漆黄素可改善MPTP诱导的小鼠TH表达量水平下降及阳性神经元丢失(P<0.05)。同时,漆黄素处理后,提高了MPTP小鼠GSH、SOD、T-AOC水平,降低了MPTP小鼠MDA的含量(P<0.05)。结论 漆黄素能有效改善帕金森病模型小鼠的运动功能,缓解黑质-纹状体多巴胺能神经元损伤,其机制可能与漆黄素的抗氧化作用有关。  相似文献   

9.
目的:观察氦甲酰化促红细胞生成素衍生物(CEPO)对低氧所致小鼠海马损伤的保护作用。方法:成年雄性C57/B6小鼠置低氧(8%O2)分别处理0,5、1.5、3和6h,记录各组小鼠复氧后连续6及30d的Y迷宫训练错误反应次数。用免疫组化检测海马神经元核蛋白(NeuN)。在此基础上,将经Y迷宫训练筛选的小鼠低氧处理6h,并分为3组:CEPO组、促红细胞生成素(EPO)组和生理盐水组,隔日1次分别腹腔注射CEPO、EPO和生理盐水,共15次。第10和30天对小鼠进行Y迷宫测试,记录错误反应次数。用NeuN免疫组化检测给予药物干预2次(72h)后各组小鼠海马神经元的脱失状况。结果:①低氧处理的小鼠学习能力明显下降,以低氧3h组和6h组尤为明显;第30天Y迷宫测试时,低氧6h组的错误反应次数最高;NeuN免疫染色显示低氧后复氧3d的各组小鼠海马各亚区神经元均有明显脱失,以低氧6h组最为明显。②第10和30天Y迷宫测试显示,低氧小鼠经CEPO或EPO干预后Y迷宫的错误反应次数明显低于生理盐水处理的小鼠;NeuN免疫染色显示低氧小鼠给予CEPO或EPO处理后海马神经元脱失明显少于生理盐水处理的小鼠。结论:低氧处理6h的小鼠学习和记忆能力明显降低,海马神经元损伤严重。CEPO具有与EPO相似的减轻低氧所致学习和记忆损伤、减少海马神经元脱失的作用。  相似文献   

10.
目的 探讨贝伐珠单抗(Bev)联合高压氧(HBO)对小鼠胶质母细胞瘤(GBM)的治疗作用。方法 体外培养U251细胞,随机分为对照组、Bev组(Bev作用24 h)、HBO组(HBO治疗1次)和Bev+HBO组(Bev作用24 h后,接受HBO治疗1次),采用MTT法检测细胞增殖能力,采用划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力。取100只雄性BALB/c裸鼠,右侧纹状体注射U251细胞建立GBM模型,造模后7 d随机分为对照组(腹腔注射PBS,3次/周,连续2周)、Bev组(腹腔注射Bev,5 mg/kg,3次/周,连续2周)、HBO组(HBO治疗,1次/d,连续2周)、Bev+HBO组(同时接受Bev和HBO处理2周);每组取10只小鼠记录生存时间;每组取5只小鼠,HE染色测定肿瘤体积;每组取5只小鼠,CD34免疫组化染色测定肿瘤组织微血管密度(MVD);每组取5只小鼠,PCR检测肿瘤组织基质金属蛋白酶(MMP)9 mRNA表达水平。结果 Bev对U251细胞增殖能力无明显影响(P>0.05),明显增强U251细胞迁移和侵袭能力(P<0.01);明显降低肿瘤组织MVD(P<0.05),明显增加肿瘤组织MMP9 mRNA表达水平(P<0.05),但对荷瘤小鼠肿瘤体积及生存时间无明显影响(P>0.05)。HBO明显抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭能力(P<0.01 ),明显降低荷瘤小鼠肿瘤组织MMP9 mRNA表达水平(P<0.01),但对荷瘤小鼠生存时间、肿瘤体积及肿瘤组织MVD均无明显影响(P>0.05)。Bev联合HBO明显抑制U251细胞增殖、侵袭和迁移能力,明显降低荷瘤小鼠肿瘤组织MVD和MMP9 mRNA水平(P<0.05),明显缩小肿瘤体积(P<0.05),明显延长荷瘤小鼠的生存时间(P<0.01)。结论 单独应用Bev或HBO对GBM小鼠肿瘤体积及生存时间无明显影响,但Bev联合HBO明显抑制小鼠GBM生长,明显延长小鼠生存时间。  相似文献   

11.
目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默高半胱氨酸蛋白61/结缔组织生长因子/肾母细胞瘤过度表达基因5(CCN5)对人胶质母细胞瘤细胞系生长的影响。方法 Western blot方法检测胶质母细胞瘤患者脑组织CNN5蛋白水平的表达;合成CCN5 siRNA小片段,并,筛选最佳干扰片段;siRNA沉默CCN5在胶质母细胞瘤细胞系中的表达,噻唑兰(MTT)方法检测细胞的生长;CCN5沉默表达后,检测半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)的酶活性。结果胶质母细胞瘤患者脑组织中CCN5蛋白表达水平较正常人脑组织中高;siRNA沉默CCN5表达抑制细胞的生长并促进凋亡效应基因caspase-3活性升高。结论 CCN5基因沉默抑制人胶质母细胞瘤细胞系的生长,为探讨CCN5在胶质母细胞瘤细胞中的作用奠定基础,并为胶质母细胞瘤的基因治疗提供潜在的靶标基因。  相似文献   

12.
Niemann-Pick disease type C (NPC) is a fatal, autosomal recessive lipidosis characterized by a unique error in cellular trafficking of cholesterol. In the disease, unesterified cholesterol as well as sphingolipids accumulate in the late endosomes/lysosomes due to mutations in either of two recently isolated genes, NPC1 or NPC2. A metabolic and neurological disorder reminiscent of human NPC disease has been described in Balb/C mice, and it was recently shown that the mutation in the NPC mice resides in the orthologous murine Npc1 gene. Here we have followed the growth rate and applied behavioural methods in order to establish the onset and development of the major symptoms in the NPC mouse model. Wild type and NPC mice were studied during 28-59 days of age. Both male and female NPC mice displayed retarded growth at the age between 25 and 35 days. At the age of 35-45 days the weight was similar to controls and thereafter very rapidly decreased. The battery of coordination tests (vertical screen, beam balancing, coat hanger and rotating rod) established motor impairment of the NPC mice already at the age of 28-42 days, well before the onset of visually detectable ataxia. Decreased exploratory activity and lack of habituation was revealed in the NPC mice by open field test. The diseased mice were unable to learn and remember the location of the hidden escape platform in spatial water maze task suggesting cognitive impairment. In several tests the male NPC mice were more affected than the females. The present study represents the first behavioural analysis of the NPC mice. The battery of behavioural tests employed here should be valuable in the assessment of effective approaches to treat NPC, for which no preventive or curative measures have so far been established.  相似文献   

13.
目的观察聚乳酸—乙醇酸(Poly Lactic—co—glycolicacid,PLGA)支架对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能的影响。方法雌性成年Wistar大鼠随机分为正常组(n=15)、假手术组(n=15)、脊髓半横断(hemisectedspinal cord injury,hSCI)组(n=15)和脊髓半横断移植PLGA(PLGA)组(n=15),术后进行行为学评分:BBB评分(Basso Beattie Bresnahan locomotor rating scale)和斜板(inclined plane,IP)试验,并观察皮层运动诱发电位(motor evoked ptentials,MEPs)的改变。结果第4周时PLGA组BBB评分高于hSCI组(7.9±1.2 vs 7.1±1.5,P=0.042);在第4、8周时PLGA组IP评分高于hSCI组(56.0±2.0 vs 54.7±2.3,P=0.030;64.7±2.4 vs 62.3±2.3,P=0.038);在第12周时PLGA组MEPs波幅高于hSCI组(29.9±11.0μV vs 21.4±10.4μV,P=0.039)。结论 PLGA支架移植能促进脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能和电生理功能的恢复。  相似文献   

14.
目的观察重复经颅磁刺激对MPTP帕金森病模型小鼠的治疗效果。方法于雄性C57BL/6J小鼠皮下注射MPTP制备帕金森病动物模型,24h后进行重复经颅磁刺激(刺激频率1.00Hz、刺激强度1.00T、刺激时间25s/次,共刺激5个序列,1次,d)。Rotarod实验评价小鼠身体协调能力和连续运动能力,免疫组织化学染色观察重复经颅磁刺激前后黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目和纹状体区酪氨酸羟化酶阳性神经纤维变化,高效液相色谱.电化学法检测重复经颅磁刺激对帕金森病小鼠纹状体多巴胺表达水平的影响。结果重复经颅磁刺激组小鼠停留于旋转杆上的圈数(85.89±3.74)、黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目(36.67±3.82)和纹状体多巴胺表达水平(258.70±1.06)均高于单纯帕金森病模型组(59.71±8.33,31.67±3.35,152.35±1.64;均P:0.000)。结论重复经颅磁刺激可改善帕金森病小鼠运动协调能力,保护受损黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元及纹状体区酪氨酸羟化酶阳性神经纤维,提高纹状体多巴胺及其代谢产物水平。  相似文献   

15.
目的探讨A型肉毒毒素治疗痉挛型偏瘫型脑瘫患儿的临床疗效。方法选择痉挛型偏瘫型脑瘫儿童40例,随机分为A型肉毒毒素治疗组20例和单纯康复治疗组(对照组)20例。治疗组将A型肉毒毒素注射到患儿腘伸肌群和小腿三头肌群,注射后第2天开始进行康复训练(共6个月)。所有患者治疗前及治疗后2周、1个月、3个月、6个月进行腘窝角和足背屈角角度的测量、改良的Ashworth量表、粗大运动功能分级量表进行评价。结果治疗组的腘伸肌群和小腿三头肌群肌张力和粗大运动功能评分均比注射前改善明显(P〈0.05),治疗效果明显优于对照组(P〈0.01)。结论 A型肉毒素配合康复治疗可以有效降低患儿患侧的肌张力,有助于提高运动功能,缩短治疗时间。  相似文献   

16.
It is unknown why cerebellar neurons resist neurofibrillary tangle (NFT) formation. In Niemann-Pick disease Type C (NPC), NFT-mediated neurodegeneration occurs throughout brain, but the cerebellum degenerates conspicuously without NFT. To understand why, we have studied markers of NFT pathogenesis in cerebellum from 17 NPC cases, all having abundant NFT in forebrain. Remarkably, we found that NPC cerebella display several early markers of NFT formation, i.e., hyperphosphorylated tau and an array of cell cycle regulators, suggesting that cerebellar neurons in NPC undergo similar modifications as other neurons that develop NFT. However, cerebellar neurons are deficient in tau, the building block of NFT, and this may be one reason for their inability to form NFT. Even without NFT, cerebellar neurodegeneration may be triggered by the inappropriate activation of the cell cycle cdc2 kinase, and the npc-1 murine model provides an opportunity to test this hypothesis.  相似文献   

17.
α-Mannosidosis is a rare lysosomal storage disease with accumulation of undegraded mannosyl-linked oligosaccharides in cells throughout the body, most notably in the CNS. This leads to a broad spectrum of neurological manifestations, including progressive intellectual impairment, disturbed motor functions, and cerebellar atrophy. To develop therapeutic outcome measures for enzyme replacement therapy that could be used for human patients, a gene knockout model of α-mannosidosis in mice was analyzed for CNS pathology and motor deficits. In the cerebellar molecular layer, α-mannosidosis mice display clusters of activated Bergman glia, infiltration of phagocytic macrophages, and accumulation of free cholesterol and gangliosides (GM1), notably in regions lacking Purkinje cells. α-Mannosidosis brain lysates also displayed increased expression of Lamp1 and hyperglycosylation of the cholesterol binding protein NPC2. Detailed assessment of motor function revealed age-dependent gait defects in the mice that resemble the disturbed motor function in human patients. Short-term enzyme replacement therapy partially reversed the observed cerebellar pathology with fewer activated macrophages and astrocytes but unchanged levels of hyperglycosylated NPC2, gangliosides, and cholesterol. The present study demonstrates cerebellar alterations in α-mannosidosis mice that relate to the motor deficits and pathological changes seen in human patients and can be used as therapeutic outcome measures.  相似文献   

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