单侧迷路切除后γ-氨基丁酸A受体α1亚单位mRNA在大鼠小脑绒球中的表达

目的：阐明大鼠小脑绒球中γ-氨基丁酸A（GABAA）受体α1亚单位在前庭代偿过程中的作用。方法：以实时定量PCR技术对迷路切除后GABAA受体α1亚单位mRNA在前庭代偿早期大鼠小脑绒球中的表达进行研究。结果：GABAA受体α1亚单位在小脑绒球中有表达，但迷路切除后在损伤同侧和对侧绒球中其表达无统计学意义。结论：大鼠小脑绒球中存在GABAA受体α1亚单位，在前庭代偿的早期，GABAA受体α1亚单位mRNA表达的变化极可能没有涉及前庭代偿。     

单侧迷路切除后γ-氨基丁酸A受体α1亚单位mRNA在大鼠小脑绒球中的表达

目的:阐明大鼠小脑绒球中γ-氨基丁酸A(GABAA)受体α1亚单位在前庭代偿过程中的作用.方法:以实时定量PCR技术对迷路切除后GABAA受体α1亚单位mRNA在前庭代偿早期大鼠小脑绒球中的表达进行研究.结果:GABAA受体α1亚单位在小脑绒球中有表达,但迷路切除后在损伤同侧和对侧绒球中其表达无统计学意义.结论:大鼠小脑绒球中存在GABAA受体α1亚单位,在前庭代偿的早期,GABAA受体α1亚单位mRNA表达的变化极可能没有涉及前庭代偿.     

单侧迷路切除术后毒蕈碱受体亚型在大鼠小脑绒球中的变化

目的:观察左侧迷路切除术后大鼠小脑绒球内毒蕈碱受体M1、M3、M5亚型的表达变化。方法:利用RT-PCR的方法,切除大鼠一侧迷路,观察小脑绒球毒蕈碱受体M1、M3、M5亚型表达的变化,及其在前庭代偿中可能的作用。结果:单侧迷路切除术(UL)后可诱导双侧绒球内毒蕈碱受体M1、M3、M5亚型减少,术后1 d最少,此后3~7 d处于上升趋势,7 d时和假手术组比较表达差异无统计学意义。各组手术两侧比较均差异无统计学意义。结论:UL后可诱导绒球内毒蕈碱受体M1、M3、M5亚型减少,但其在前庭代偿中的作用尚有待研究。     

前庭代偿过程中Ⅰ组代谢性谷氨酸受体亚型在前庭内侧核中的变化

目的观察单侧迷路破坏术后前庭内侧核(medialvestibular nuclei,MVN)内I组代谢性谷氨酸受体亚型(group I metabotropic glutamate receptors,mGluR1)的表达变化。方法成年雄性Wistar大鼠28只,分为迷路破坏组(20只)和对照组(8只),前者破坏单侧迷路,对照组手术方式相同但保持迷路完好。单侧迷路破坏术后,通过免疫组织化学、原位杂交组织化学法检测不同存活时间(术后12h、36h、7d、30d)两组动物MVN内mGluR1的表达变化。结果单侧迷路破坏术后可诱导同侧MVN区I组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR1减少,术后12h最少,术后36h开始增加,至术后7d和30d后和对照组差异无统计学意义;对侧和术侧的变化趋势相同。结论单侧迷路破坏术后可诱导MVN区I组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR1减少。初级前庭传入或中枢前庭神经元的静息放电降低可能与I组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR1减少有关,但其在前庭代偿中的作用尚有待研究。     

单侧迷路切除后γ-氨基丁酸A受体亚单位在大鼠小脑绒球中的表达

目的观察单侧迷路切除术后大鼠小脑绒球内γ-氨基丁酸A(gamma-amino butyric acid A,GABAA)受体α3、β1、δ亚单位的表达变化。方法成年雄性Wistar大鼠24只,随机分为迷路破坏组(18只)和对照组(6只),前者破坏单侧迷路,对照组手术方式相同但保持迷路完好。通过免疫组织化学法检测术后不同存活时间(术后1、3、7天)两组动物小脑绒球内GABAA受体α3、β1、δ亚单位的表达变化。结果单侧迷路切除术后大鼠术侧小脑绒球内GABAA受体β1、δ亚单位增加,术后1天最多,此后3~7天处于下降趋势,7天时和对照组比较表达无差异。α3亚单位在小脑绒球的染色很弱,各组两侧比较及术后1、3、7天与对照组比较均无明显差异。结论单侧迷路切除后大鼠术侧小脑绒球内GABAA受体β1、δ亚单位增加;双侧前庭中枢神经元的静息放电的平衡可能与GABAA受体β1、δ亚单位绒球内的增加有关;α3亚单位可能并非GABAA受体在小脑绒球主要的结构与功能亚单位。     

前庭康复过程中Ⅰ组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR5在前庭内侧核中的变化

目的：观察单侧迷路破坏术后前庭内侧核（MVN）内Ⅰ组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR5的表达变化。方法：成年雄性Wistar大鼠30只,分为迷路破坏组（24只）和对照组（6只）,前者破坏单侧迷路,对照组手术方式相同但保持迷路完好。单侧迷路破坏术后,通过免疫组织化学、原位杂交组织化学法检测不同存活时间（术后12h、36h、7d）2组动物MVN内mGluR5的表达变化。结果：单侧迷路破坏术后可诱导同侧MVN区Ⅰ组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR5增高,术后12h最高,术后36h开始降低,至术后7d后和对照组差异无统计学意义;对侧和术侧的变化趋势相同。结论：单侧迷路破坏术后可诱导MVN区Ⅰ组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR5增高。初级前庭传入或中枢前庭神经元的静息放电降低可能与Ⅰ组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR5增高有关,但其在前庭代偿中的作用尚有待研究。     

NMDA谷氨酸受体NR1亚基在大鼠前庭终器的表达

目的研究NMDA谷氨酸受体NR1亚基在大鼠前庭终器的表达。方法运用RT-PCR技术检测大鼠前庭终器NR1亚基的基因表达。以大鼠脑组织RNA为阳性对照。结果在前庭终器中扩增出标志NMDA谷氨酸受体NR1亚基基因表达的PCR产物,并经测序证实与预计扩增的cDNA片断序列一致。结论NMDA谷氨酸受体NR1亚基在大鼠前庭终器有表达,为谷氨酸作为前庭重要的神经递质之一提供了证据。NMDA谷氨酸受体可能作为自身受体在前庭系统神经信息传递过程中起到正反馈调节作用。     

前庭代偿过程中GABAA受体α1亚型在前庭内侧核中的变化

目的 观察单侧迷路破坏术后前庭内侧核(medial vestibular nuclei, MVN)内γ-氨基丁酸A受体(gamma-aminobutyric acid A receptor, GABAA receptor)α1亚型的表达变化.方法 将24只大鼠随机分为术后1、3、7天组和假手术组,每组6只,前三组切除大鼠一侧迷路,第4组行假手术,利用免疫组织化学、原位杂交组织化学的方法,观察术后1、3、7天组前庭内侧核区GABAA受体α1亚型表达的变化,及其在前庭代偿中可能的作用 ,并与假手术组进行比较.结果 手术后1天、3天、7天组行为学上开始均有前庭静态症状,术后7天时前庭静态症状均消失,假手术组无相关症状出现.免疫组织化学、原位杂交组织化学方法前庭内侧核中各组手术侧与对侧比较及术后1天、3天、7天组与假手术组比较,GABAA受体α1亚型表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在前庭代偿的早期,GABAA受体α1亚型表达的变化可能没有涉及前庭代偿.     

原位杂交定位检测大鼠前庭末梢γ—氨基丁酸A受体亚单位α2mRNA

目的 了解γ－氨基丁酸（γ－aminobutynric acid,GABA)在前庭末梢神经传递中的作用。方法 采用大鼠内耳石蜡切片，地高辛标记的GABAAα2cDNA探针（549个碱基），抗地高碱性磷酸酶检测系统，BM Purple AP Substrate显色系统，原位杂交（in-situ hybridization)检测大鼠前庭末梢GABAα2mRNA受体的表达。结果 所有的大鼠前庭神经节细胞体及壶腹嵴上围绕I型毛细胞的神经杯状物表达GABAA受体α2亚单位mRNA。毛细胞和支持细胞不表达。作阳性组织对照的大鼠小脑皮质蒲肯野氏细胞和颗粒细胞的胞体和触突表达GABAAα2。OMP探针阴性对照，无探针的空白对照及无地高辛抗体空白对照的内耳及小脑切片均不表达GABAAα2。结论 GABAAα2受体位于前庭的传入神经末端和其胞体，强烈支持GABA作为前庭末梢的传入神经递质的结论。并提示其在前庭传入神经传递中具有重要作用。     

原位杂交定位检测大鼠前庭末梢γ-氨基丁酸A受体亚单位α2 mRNA

目的　了解γ 氨基丁酸 (γ aminobutyricacid ,GABA)在前庭末梢神经传递中的作用。方法　采用大鼠内耳石蜡切片 ,地高辛标记的GABAAα2 cDNA探针 (5 49个碱基 ) ,抗地高辛的碱性磷酸酶检测系统 ,BMPurpleAPSubstrate显色系统 ,原位杂交 (in situhybridization)检测大鼠前庭末梢GABAAα2 mRNA受体的表达。结果　所有的大鼠前庭神经节细胞体及壶腹嵴上围绕Ⅰ型毛细胞的神经杯状物表达GABAA 受体α2 亚单位mRNA。毛细胞和支持细胞不表达。作阳性组织对照的大鼠小脑皮质蒲肯野氏细胞和颗粒细胞的胞体和触突表达GABAAα2 。OMP探针阴性对照 ,无探针的空白对照及无地高辛抗体空白对照的内耳及小脑切片均不表达GABAAα2 。结论　GABAAα2 受体位于前庭的传入神经末端和其胞体 ,强烈支持GABA作为前庭末梢的传入神经递质的结论。并提示其在前庭传入神经传递中具有重要作用     

单侧迷路切除术后GABAA受体α3亚型在大鼠前庭神经核中的表达

目的观察单侧迷路切除术后大鼠前庭神经核复合体内GABAA受体α3亚型的表达变化。方法成年雄性Wistar大鼠24只,分为迷路破坏组(18只)和对照组(6只),前者破坏单侧迷路,对照组手术方式相同但保持迷路完好。单侧迷路切除术后,通过免疫组织化学、Western blot的方法检测不同存活时间(术后1 d、3 d、7 d)组动物前庭神经复合体内γ-氨基丁酸A受体α3亚型的表达变化。结果术后1 d、3 d、7 d组两侧比较及术后1 d、3 d、7 d组与对照组比较差异均无显著性意义。结论在前庭代偿的早期,前庭神经复合体内γ-氨基丁酸A受体α3亚型表达的变化极可能没有涉及前庭代偿。     

毒蕈碱受体在大鼠前庭神经核中表达的免疫组织化学与原位杂交研究

目的探讨毒蕈碱受体(muscarinic receptor ,M受体)在大鼠前庭神经核中(vestibular nucleus )的表达.方法以免疫组织化学及原位杂交组织化学的方法对M受体M1、M3、M4亚型在大鼠前庭神经核中的表达进行研究.结果免疫组织化学研究表明M1、M3、M4在前庭神经核中均有表达;原位杂交组织化学也证实了M3 mRNA在前庭神经核中的表达.结论本实验首次表明在大鼠前庭神经核中存在着多种M受体亚型,但它们在前庭神经核中如何发挥功能性作用还需要作进一步研究.     

天麻素对单侧前庭功能丧失大鼠绒球中谷氨酸免疫反应物、胶质纤维酸性蛋白、γ-氨基丁酸B2型受体表达及疗效的影响

目的　探讨天麻素促进前庭功能恢复及中枢代偿的机制。方法　成年健康SD大鼠随机分组,空白对照组（n=9）正常饲养,假手术对照组（n=18）鼓室内注射生理盐水,模型对照组（n=18）、模型治疗组（n=54）鼓室内注射氯仿。造模成功后,对照组肌肉注射生理盐水;模型治疗组再随机分为天麻素低、中、高剂量组（每组n=18）,每日分别肌肉注射低、中、高剂量天麻素,连续注射3d。观察绒球中谷氨酸免疫反应物（glutamate immunoreactivity,GLU-IR）、胶质纤维酸性蛋白（giial fibrillary acid protein,GFAP）、γ-氨基丁酸B2型受体（gamma-aminobutyric acid B2,GABA B2）表达。结果　模型对照组、模型治疗组GLU-IR表达明显下调,GFAP、GABA B2表达明显上调。经天麻素治疗后,模型治疗组与模型对照组比较,GLU-IR、GABAB2表达明显上调,GFAP表达明显下调,天麻素高剂量组均最为明显。结论　天麻素能够对中枢进行多靶点调控,加速代偿的进程与程度。     

毒蕈碱受体在大鼠前庭神经核中表达的免疫组织化学与原位杂交研究

目的探讨毒蕈碱受体(muscarinic receptor，M受体)在大鼠前庭神经核中(vestibular nucleus)的表达。方法以免疫组织化学及原位杂交组织化学的方法对M受体M1、M3、M4亚型在大鼠前庭神经核中的表达进行研究。结果免疫组织化学研究表明M1、M3、M4在前庭神经核中均有表达；原位杂交组织化学也证实了M3 mRNA在前庭神经核中的表达。结论本实验首次表明在大鼠前庭神经核中存在着多种M受体亚型，但它们在前庭神经核中如何发挥功能性作用还需要作进一步研究。     

单侧迷路切除术后大鼠前庭神经核γ-氨基丁酸A受体β1亚型表达

目的观察单侧迷路切除术后大鼠前庭神经核复合体内γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)A受体β1亚型的表达变化。方法成年雄性Wistar大鼠48只,分为实验组(36只)和对照组(12只),前者破坏单侧迷路,对照组手术方式相同但保持迷路完好。单侧迷路切除术后,分别用免疫组织化学法和免疫印迹法按照上述分组方式,检测不同存活时间(术后1、3、7天)组动物前庭神经复合体内GABAA受体β1亚型的表达变化。结果术后1、3、7夭组大鼠左右两侧比较及与对照组比较差异均无显著性意义。结论在前庭代偿的早期,前庭神经复合体内GABAA受体β1亚型表达无变化。     

前庭损伤后脑干相关神经元C-FOS的表达

目的观察大鼠内耳前庭损伤后，在静止和角加速度刺激状态下双侧前庭神经核C—FOS阳性表达的改变，初步探讨前庭代偿机制。方法将60只SD大鼠分为5组（12只，组）：（1）无手术组；（2）单耳前庭神经切断手术组；（3）单耳前庭神经切断手术对照组；（4）双耳前庭神经切断手术组；（5）双耳前庭神经切断手术对照组，每组一半动物给予角加速度刺激。用免疫组化ABC法观察C—FOS在前庭神经核、舌下神经前置核的神经元表达的改变。结果在静止状态下，正常鼠和手术对照组鼠的双侧前庭神经核、舌下神经前置核无C—FOS阳性神经元；给予旋转刺激后，双侧前庭神经核、舌下神经前置核皆有C—FOS阳性神经元。单耳手术组术后24小时．同侧前庭神经内核、对侧舌下神经前置核有C—FOS阳性神经元，旋转刺激后双侧前庭神经核、舌下神经前置核皆有C—FOS阳性神经元。双耳手术组24小时，在静止状态和角加速度刺激状态下，双侧前庭神经核、舌下神经前置核皆无C—FOS阳性神经元。结论一侧前庭损伤后，同侧前庭神经内核、对侧舌下神经前置核C—FOS阳性神经元在前庭代偿早期可能起启动突触联系的作用。     

反复发作性眩晕豚鼠前庭内侧核毒蕈碱受体M2、M3表达的研究

目的制造豚鼠迷路瘘管导致的反复发作的眩晕模型,观察不同时程豚鼠前庭内侧核(MVN)毒蕈碱受体M2、M3亚型的表达变化。以探讨前庭代偿的可能机制。方法选择成年实验用豚鼠88只,并随机分配为A组(假手术组,8只)、B组(单侧迷路损毁组,40只)、C组(迷路瘘管+耳镜鼓气组,40只)。B、C组手术后,依据豚鼠所需不同存活时间(术后1天、3天、1周、2周、3周)随机选取8只,A组作为对照组存活3周。所有豚鼠灌流后取脑干,用免疫组织化学染色,观察前庭内侧核毒蕈碱受体M2、M3亚型的表达变化,并与假手术组比较。结果 B、C组术后均可导致双侧MVN区毒蕈碱受体M2、M3亚型表达减少,术后1天表达最少,术后3天至术后7天表达有逐渐增加趋势,术后7天时B组和假手术组比较表达无差异,而C组和假手术组比较表达差异具有统计学意义(P<0.05)。直到术后2周,C组和假手术组比较表达无差异。B、C组术后各时期(术后2周前)相比,C组的表达弱于B组。各组对侧的变化趋势和术侧相同。结论1.豚鼠MVN存在毒蕈碱受体M2、M3亚型,且M3受体的表达可能不及M2受体的丰富。它们可能在前庭代偿的早期促进了前庭代偿的正常进行。2.前庭代偿除胆碱能系统参与外,可能还涉及到其他神经递质或化学物质的参与。3.进一步证明迷路瘘管导致的反复发作性眩晕模型的造模是成功的。     

γ-氨基丁酸受体γ1亚基在大鼠前庭终器的表达

目的：研究γ-氨基丁酸受体γ1亚基在大鼠前庭终器的表达。方法；运用RT-PCR技术检测大鼠前庭终器编码GABAA受体亚基因表达。以大鼠脑组织RNA为阳性对照。结果：扩增出标志GABAA受体基因表达的PCR产物。结论:GABA受体γ1亚基在大鼠前庭终器有表达，为证明GABA是前庭系统重要神经递质之一提供了支持。     

前庭代偿过程中前庭传出性和传入性神经系统的相互作用

目的 通过前庭代偿的动物模型，了解在前庭病变的情况下，前庭传出性和传入性神经系统的相互作用。方法 动物模型：A组(16只)为正常大鼠。B组(15只)左侧前庭损毁术后7d。C组(7只)术后3个月。D组(7只)前庭代偿后。检测两侧头长肌静息状态的肌电图。检测传出性前庭神经系统降钙素基因相关肽免疫组化。检测传出性前庭神经系统胆硷乙酰转移酶(choline acetyltransferase，AChT)免疫组化。检测传入性前庭神经系统Na-K-ATP酶活性。结果 损伤同侧肌群肌电活动减弱、对侧肌群增强，前庭代偿期恢复对称性。急性期传出性前庭神经系统降钙素基因相关肽阳性细胞双侧性增多，活性增高。传出性前庭神经系统损伤同侧AChT阳性反应细胞减少，两侧反应程度增加。前庭代偿期对侧反应程度显著增加。急性期同侧Na-K-ATP酶mRNA表达水平低，对侧前庭信号增强，在前庭代偿期，同侧Na-K-ATP酶mRNA表达水平增强，与对侧一致或略强。结论 传出性前庭神经系统可能抑制对侧前庭传入信息，调整同侧前庭中枢兴奋性，在前庭代偿的复杂机制中发挥作用。     

NMDA受体甘氨酸位点的调制参与脑干前庭信息整合

目的 通过分析大鼠前庭神经损伤后,分别在静止、角加速度刺激状态下,c-Fos/NR1(NMDA recep-tor 1)阳性神经元在脑干的前庭神经内核、舌下神经前置核分布的改变,初步分析NMDA(N-methyl-D-aspertate,N-甲基天冬氨酸)受体参与前庭代偿的机制.方法 用将60只Sprague-Dawley大鼠分为3组(20只/组):(1)无手术组;(2)单耳前庭神经切断手术组;(3)双耳前庭神经切断手术组.每组中一半动物在静止状态,另一半接受角加速度刺激.用NRI免疫组化和c-Fos免疫组化双染法,观察c-Fos/NR1阳性神经元分别在前庭神经核、舌下神经前置核区分布的改变.结果 在静止状态下的正常鼠、双耳手术组鼠和旋转刺激后的双耳手术组鼠,在双侧前庭神经内核、舌下神经前置核无c-Fos/NR1阳性神经元.单耳手术组鼠,在同侧前庭神经内核、对侧舌下神经前置核有c-Fos/NR1阳性神经元分布.旋转刺激后的正常鼠和单耳手术组鼠,在双侧前庭神经内核、舌下神经前置核有大量的c-Fos/NR1阳性神经元.结论 前庭损伤后,c-Fos标志的同侧前庭神经内核、对侧舌下神经前置核参与前庭代偿,NR1受体被激活,表明NMDA受体甘氨酸位点的调制参与前庭信息在脑干整合.