c-FOS基因在下咽鳞状细胞癌对诱导化疗药物敏感性中的作用研究

目的　通过分子生物学方法验证c-FOS基因与下咽鳞状细胞癌的TPF（顺铂+紫杉醇+5-Fu）化疗方案敏感性的相关性。方法　利用特异性小干扰RNA（siRNA）转 染Fadu细胞,获得下调c-FOS基因表达的体外培养Fadu细胞系。设置加入c-FOS-siRNA的实验组,正常Fadu细胞系为阴性对照组及空白对照组,应用MTT法检测细胞增殖能力,并计算各组细胞对TPF诱导化疗方案的半数抑制浓度（IC50）。对比正常细胞系及c-FOS下调细胞系IC50变化。结果  成功构建c-FOS敲减Fadu细胞系,敲减效率为78.77%。MTT实验结果表明沉默c-FOS基因表达后,细胞系对TPF药物的IC50值（顺铂0.148 μg/ml,紫杉醇0.223 μg/ml,5-Fu4.156 μg/ml）与对照组相比降低（顺铂0.0924 μg/ml,紫杉醇0.139 μg/ml,5-Fu 2.586 μg/ml）,表明c-FOS基因的表达可导致细胞对TPF化疗方案抵抗。结论 c-FOS基因在喉咽癌中与诱导化疗方案的敏感性有明显关系,可作为治疗方案选择的潜在分子标志物。     

GPR81与TOMM20在下咽癌中的功能研究

目的探索G蛋白偶联受体81（G-protein coupled receptor 81,GPR81）和线粒体外膜异位酶20（translocase of the outer mitochondrial membrane member 20,TOMM20）在下咽癌中的功能及临床意义。方法选取30例经病理检查确诊为下咽鳞状细胞癌患者的下咽癌组织和癌旁组织，对患者临床资料进行统计学分析，并运用免疫组织化学方法检测GPR81和TOMM20在癌组织及癌旁组织中的表达。经特定浓度的顺铂诱导Fadu细胞，分别诱导0、12、24及48h，经Real time PCR及Western Blot检测GPR81、TOMM20在mRNA和蛋白质水平的变化。采用流式细胞术检测顺铂刺激Fadu细胞后细胞凋亡情况。结果GPR81和TOMM20在下咽癌组织的表达水平显著高于癌旁组织，差异具有统计学意义（P<0.05）。在下咽癌中，临床分期为I、II期的下咽癌中GPR81、TOMM20显著低于III、IV期(P<0.05)。有淋巴结转移的下咽癌组织中GPR81、TOMM20的表达显著高于无淋巴结转移的下咽癌组织（P<0.05）。GPR81在中低分化的下咽癌中具有较高表达，在高分化下咽癌中表达较低，差异具有统计学意义（P<0.05）。不同分化程度的下咽癌中TOMM20的表达差异无统计学意义（P>0.05）。顺铂诱导Fadu细胞中GPR81及TOMM20的表达随时间呈现递减趋势，其mRNA水平及蛋白水平48h表达量与对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。顺铂刺激的Fadu细胞中细胞凋亡数约为(11.35±0.87)%，对照组中细胞凋亡数为（18.68±0.33）%，两者经比较差异具有统计学意义（P<0.05）。结论GPR81、TOMM20可能与下咽癌的发生有关，二者可能参与了下咽癌化疗抵抗。因此能量代谢相关蛋白靶向研究或许是治疗侵袭性肿瘤的一个方向。     

长链非编码RNA在下咽鳞状细胞癌发病机制中的作用[综述]

长链非编码RNA（long non-coding RNAs,lncRNA）几乎参与了细胞生物学的各个方面,异常表达的lncRNA可以导致多种人类疾病,包括癌症。下咽鳞状细胞癌是常见的头颈部恶性肿瘤之一,研究发现多种lncRNA在该肿瘤中异常表达,可作为下咽鳞状细胞癌早期诊断及评估预后的标志物。本文对国内外相关文献中报道与下咽鳞状细胞癌关系紧密的lncRNA进行综述,期望为找到下咽癌的生物标志物和基因靶向治疗提供依据。     

喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体基因过表达的研究

目的：研究喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体（EGFR）基因的异常表达与喉鳞状细胞癌发生的相关性.方法：应用RT-PCR方法检测50例喉鳞状细胞癌患者组织标本和喉癌Hep-2细胞系中EGFR基因mRNA表达水平.结果：在60%（30/50）喉鳞状细胞癌及喉癌Hep-2细胞系中检测到EGFR基因的过表达.结论：EGFR基因的过表达与喉癌发生及发展有关.     

Claudin-1与cyclinB1在下咽鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究Claudin 1与 cyclinB1在下咽鳞状细胞癌及癌旁组织中的表达情况，分析它们与下咽鳞状细胞癌各临床因素及患者预后之间的关系。方法①选取97例下咽鳞状细胞癌组织学标本及90例癌旁正常黏膜组织标本，采用免疫组化的方法比较Claudin 1和cyclinB1在下咽鳞状细胞癌及正常黏膜组织中表达的差异，分析两者在下咽鳞状细胞癌中的表达与临床因素及患者预后之间的关系；②选取30位下咽鳞状细胞癌患者术后的癌组织及癌旁正常黏膜，采用RT PCR方法，检测Claudin 1和cyclinB1的表达并定量分析，探讨两者的相关性。结果①Claudin 1与cyclinB1在下咽鳞状细胞癌中的阳性表达率均明显高于癌旁组织（P<0.05）；②Claudin 1蛋白表达与肿瘤的分化程度(P=0.004)和淋巴结转移(P=0.026)有关，与患者的生存率相关(P=0.003)；③CyclinB1蛋白表达与肿瘤的分化程度(P<0.001)有关；④Claudin 1与cyclinB1呈明显正相关关系(r=0.482,P<0.001)。结论Claudin l和cyclinB1具有协同作用,二者的高表达可能促进了下咽癌的发生与发展。     

细胞周期素D1和P16在下咽癌中的表达及临床意义

目的：探讨细胞周期素D1（CyclinD1）和p16在下咽鳞状细胞癌中的表达和临床意义。方法：应用免疫组织化学P-V二步法检测CyclinD1和p16在36例下咽鳞状细胞癌患者手术后标本及10例正常下咽黏膜标本中的表达。结果：①CyclinD1在下咽鳞状细胞癌中的表达高于正常黏膜（P〈0.05）,p16在下咽鳞状细胞癌中的表达低于正常黏膜（P〈0.05）;②CyclinD1的阳性表达与下咽鳞状细胞癌临床分期及淋巴结转移呈正相关（P〈0.05）,p16的阳性表达与下咽鳞状细胞癌淋巴结转移呈负相关（P〈0.05）;CyclinD1和p16表达与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤原发部位及组织学分化程度无相关性（均P〉0.05）;③下咽鳞状细胞癌中CyclinD1和p16的表达呈负相关（等级相关系数rs=-0.420,P〈0.05）。结论：CyclinD1高表达和p16低表达可能在下咽鳞状细胞癌的发生发展中起重要作用,可以作为判断下咽鳞状细胞癌中淋巴结转移的客观指标。     

下咽鳞状细胞癌中FHIT基因异常表达的研究

目的：分析下咽鳞状细胞癌中脆性组氨酸三联体FHIT基因转录本的表达，探讨FHIT基因与下咽鳞状细胞癌生物学行为的相关性。方法：应用nested RT-PCR及DNA测序技术检测24例下咽鳞状细胞癌组织及对应的正常组织标本中FHIT基因的表达情况。结果：24例正常配对下咽组织中23例有FHIT基因完整表达，1例未见任何转录本，9例（37．5％）下咽癌标本中检测出FHIT基因mRNA转录本的异常表达。高分化鳞状细胞癌FHIT基因转录本异常率为28．6％（2／7），中分化鳞状细胞癌为50．0％（4／8），低分化鳞状细胞癌为33．3％（3／9），各个病理分级之间的差异无统计学意义（r=-0．0198，P〉0．05）；无淋巴结转移下咽癌FHIT基因转录本异常率为33．3％（4／12），伴淋巴结转移癌组41．7％（5／12），差异无统计学意义（P〈0．01）。2例原发性下咽癌经测序发现，分别缺失exon8，exon7～9，所有缺失的起始处均为外显子之间的连接部位。结论：位于3P14．2的FHIT基因在下咽鳞状细胞癌中存在较高的缺失率，提示FHIT基因为下咽鳞状细胞癌的候选抑制基因，在下咽癌的发生、演化和进展中起着重要作用。     

组织蛋白酶D与下咽癌侵袭转移的相关性研究

目的研究组织蛋白酶D(CD)在下咽鳞状细胞癌组织中的表达与下咽鳞状细胞癌的侵袭转移之间的关系.方法用免疫组织化学法研究59例下咽鳞状细胞癌组织标本和9例正常的下咽黏膜中CD和ki-67的表达;分析CD在下咽鳞状细胞癌细胞中和间质细胞中的表达与肿瘤生物学特性之间的关系.结果CD在颈淋巴结转移阳性组肿瘤细胞中的表达率较阴性组织高,CD在肿瘤间质细胞中的表达在颈淋巴结转移阳性组的表达率较阴性组高.结论CD表达与肿瘤侵袭转移的生物特性密切相关,可以作为下咽鳞状细胞癌侵袭转移的预后指标.     

Livin shRNA稳定转染Hep-2细胞系的建立

目的构建靶向Livin基因干扰真核表达质粒,建立干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞系,下调Livin基因在Hep-2细胞系中的表达。方法针对Livin基因的mRNA序列设计干扰序列,分别构建1个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒,大肠杆菌扩增、酶切及测序鉴定,用脂质体介导转染Hep-2细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞系,用Real—timePCR和Westernblot检测Livin在mRNA和蛋白水平的抑制效果。结果经测序证实成功构建pGenesil-LivinshRNA真核表达质粒。干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞在荧光显微镜下观察,发出绿色荧光。重组质粒转染Hep．2细胞后,Livin基因在mRNA及蛋白水平明显下降,mRNA水平下调47．17％,蛋白水平下调34．25％。结论成功构建以Livin为靶向的LivinshRNA真核表达质粒。对喉癌Hep-2细胞中Livin的表达具有显著抑制效应,为研究Livin在Hep-2中的功能和喉癌的基因治疗奠定了基础。     

西妥昔单抗联合放化疗治疗头颈部鳞状细胞癌

全世界每年确诊为头颈部鳞状细胞癌的患者超过50万例,占全身恶性肿瘤的5％.且头颈部鳞状细胞癌患者高表达表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),西妥昔单抗作为一种抗EGFR的新型人鼠嵌合性单克隆抗体能有效抑制肿瘤细胞的生长,联合放疗较单纯放疗降低了局部晚期头颈部鳞状细胞癌患者的死亡率,并可提高包括顺铂在内的多种化疗药物疗效.     

靶向性基因导入系统介导p16基因对喉鳞状细胞癌抑制作用

目的 探讨一种新的靶向性非病毒型基因导入系统GE7-HA20介导P16基因对喉鳞状细胞癌的抑制作用。方法 建立喉癌裸鼠移植瘤模型;构建外源性基因(β-半乳糖苷酶报道基因及P16基因)和多肽载体系统复合物;在体内外观察P16基因对喉癌的抑制情况;LSAB法观察Hep-2细胞转染前后的P16表达。结果 靶向性多肽基因导入系统可将β-gal导入裸鼠移植瘤内呈阳性反应呈蓝染,LSAB显示转染后P16基因的表达明显升高,P16基因具有抑制肿瘤生长作用并有统计学意义(P<0.05)。结论 GE7-HA20系统借助于表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)可靶向性将目的基因导入喉癌中并得到高效表达;体内外导入p16基因后可显著抑制喉鳞状细胞癌。     

整合素β1在下咽鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的研究下咽鳞状细胞癌中整合素β1（Integrinβ1）表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在下咽鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组化PV-9000二步法,检测50例下咽鳞状细胞癌及20例癌旁黏膜组织中的Integrinβ1表达水平,应用Image-ProPlus图像分析软件测定免疫组化图像的平均光密度（mean optical density,MOD）。结果 Integrinβ1蛋白在下咽鳞状细胞癌及癌旁黏膜组织中的阳性表达率分别为78.00%和35.00%,两者比较差异具有统计学意义（P=0.001）,两组MOD值差异具有统计学意义（P〈0.05）;Integrinβ1的表达与不同临床分期、组织学分级和是否伴淋巴转移相关（P〈0.05）;Integrinβ1与年龄、性别、吸烟史和原发部位的下咽鳞癌组别间的表达无关（P〉0.05）。结论 Integrinβ1在下咽鳞状细胞癌组织中高表达可能介导了癌组织黏附和浸润,检测Integrinβ1可能对评估下咽鳞癌的生物学特性和临床特点有一定意义。     

诱导化疗及分子靶向治疗在局部晚期喉癌和下咽癌治疗中的应用[综述]

对于局部晚期喉癌和下咽癌传统治疗方案多以手术治疗辅以放疗或放化疗为主,然而患者的5年生存率未得到明显提高,且常以牺牲喉功能为代价,严重影响患者的生活质量和心理健康。因此非手术治疗逐渐成为研究热点,其中诱导化疗在器官保留及减少远处转移方面展现出明显优势,而分子靶向治疗特异性高、不良反应少,已逐渐应用到头颈鳞状细胞癌的治疗中。本文总结相关临床试验,探讨诱导化疗及分子靶向治疗在局部晚期喉癌和下咽癌中的应用,旨在总结比较不同的治疗方案,为临床决策提供参考。     

下咽鳞状细胞癌中Slit2的表达及其与微血管密度关系的临床研究

目的研究下咽鳞状细胞癌组织中神经迁移蛋白Slit2的表达及其与微血管密度的关系,探讨两者对下咽鳞状细胞癌的生物学行为的影响。方法免疫组织化学法检测Slit2蛋白的表达及微血管密度（MVD）,并应用RT PCR法检测新鲜组织中Slit2 mRNA的表达。研究其表达与肿瘤临床特征的关系。结果Slit2蛋白在下咽鳞状细胞癌和癌旁组织中的表达率分别为65.2%和40.5%,两者表达差异有统计学意义（χ2=6.329,P<0.05）;Slit2 mRNA在下咽鳞状细胞癌和癌旁组织中的表达,差异亦具有统计学意义（t=8.230,P<0.05）。Slit2蛋白的表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移显著相关;MVD计数与肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和淋巴节转移显著相关,两者与肿瘤的发病年龄、部位、临床病理分化程度均无关。肿瘤组织中Slit2阳性表达者MVD计数高于Slit2阴性表达者,其差异具有统计学意义（t=2.273,P<0.05）;并且两者表达呈正相关（rs=0.430,P<0.05）。结论下咽鳞状细胞癌组织中Slit2表达和MVD计数,与肿瘤的侵袭和淋巴结转移密切相关,其机制可能为Slit Robo信号系统介导了肿瘤新生血管的形成,从而影响了肿瘤的生物学行为。     

单羧酸转运蛋白家族与头颈部鳞状细胞癌的研究进展

单羧酸转运蛋白家族(MCTs)参与肿瘤代谢调节,对细胞的乳酸、丙酮酸、酮体等物质起转运作用,在不同的肿瘤细胞中表达出不同的亚型。家族内的MCT1和MCT4及其伴侣蛋白CD147、葡萄糖转运蛋白GLUT-1、缺氧生物标记碳酸酐酶9(CAIX)在鼻咽癌、喉癌、口腔鳞状细胞癌等头颈部鳞状细胞癌中均发挥了重要作用。针对头颈鳞状细胞癌中MCTs不同的亚型采取靶向治疗及与其他治疗方式联合治疗以取得更好的疗效是未来的研究方向。就MCTs在头颈部鳞状细胞癌发生发展的作用机制及以MCTs作为靶点进行治疗的研究现状做综述。     

细胞焦亡相关因子在下咽鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 探讨细胞焦亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Capase1）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）在下咽鳞状细胞癌中的表达及其相关性。方法 应用免疫组化法检测11例下咽鳞状细胞癌患者肿瘤组织及对应的9例癌旁组织（其中2例无切缘）病理标本中Capase1、IL-1β、IL-18的表达情况。结果 采用秩和检验分析,结果显示焦亡相关因子Capase1、IL-1β、IL-18在肿瘤组织的表达高于癌旁组织（P均<0.05）;采用Spearman秩相关分析方法,结果显示肿瘤组织中Capase1的表达与IL-1β、IL-18表达的相关系数均大于0.6,呈显著正相关（P均<0.05）。结论 细胞焦亡参与下咽癌的生物学进程,细胞焦亡相关因子可能成为下咽癌治疗的靶标,可以帮助治疗下咽癌或判断其预后。     

咽喉部鳞状细胞癌细胞系

咽喉部鳞状细胞癌是头颈外科常见恶性肿瘤,头颈部解剖结构复杂,原发部位不同的鳞状细胞癌发病率、诊疗方案不同,其发生的分子机制也可能存在差异。因此,选择适合的咽喉部鳞状细胞癌细胞系对于研究者选择适合的临床前研究模型,以及更好地理解肿瘤发生发展机制具有重要意义。总结了鼻咽、口咽、喉咽、喉四个解剖部位的鳞状细胞癌细胞系,以望对研究者选择适当的细胞系作为研究对象提供参考。     

下咽鳞状细胞癌组织claudin-1的表达及与微淋巴管生成的关系

目的 通过检测97例下咽鳞状细胞癌患者癌组织中claudin-1与D2-40蛋白的表达,分析claudin-1与微淋巴管密度（MLVD）之间的相互关系,探讨它们与肿瘤临床分期、病理学分级及患者临床预后之间的相关性,探索下咽鳞状细胞癌淋巴结转移的机制。方法 应用免疫组化法检测97例下咽鳞状细胞癌及90例癌旁组织标本中claudin-1与D2-40蛋白的表达,采用Pearson χ²检验分析标志物和临床病理特征之间的关系;采用Log rank实验方法进行生存分析。结果 Claudin-1在下咽鳞状细胞癌中呈高表达;claudin-1蛋白表达与肿瘤的分化程度（P=0.004）和淋巴结转移有关（P=0.026）;Kaplan-Meier分析显示claudin-1与患者的生存率相关（P=0.003）。癌巢周边区的MLVD与组织病理学分级、临床分期和淋巴结转移等指标显著相关,claudin-1与MLVD呈正相关（r=0.54,P=0.012）。结论 高表达claudin-1可能会诱导肿瘤淋巴管生成,从而促进淋巴结转移,可能成为下咽鳞状细胞癌治疗的一个新的靶点。     

CD105在下咽癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨CD105在下咽鳞状细胞癌组织中的表达,评价微血管密度(MVD-CD105)在下咽癌中的临床意义.方法 采用CD105单克隆抗体,用免疫组织化学方法检测47例下咽鳞状细胞癌组织中CD105标记的微血管密度(MVD)情况,并根据检测结果分析与下咽癌各临床病理因素之间的关系.结果 CD105标记的MVD在癌旁组织与下咽癌组织中的表达有显著性差异,在不同病理分化程度的下咽癌患者中的表达无显著性差异,T3+T4期的MVD表达值为(40.35±6.43)显著高于临床T1+T2期的MVD表达值为(25.39±5.87),颈淋巴结转移组平均MVD表达值(39.67±6.67)显著高于无颈淋巴结转移组MVD表达值(23.82±5.00).结论 CD105是肿瘤新生血管的标志,其标记的微血管密度(MVD-CD105)可以作为下咽癌肿瘤发生、转移的重要的参考指标.     

mAb-EGFR功能化修饰的金纳米棒靶向光热作用对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株和293T细胞株的细胞毒性分析

目的：探讨mAb-EGFR功能化修饰的金纳米棒靶向光热作用对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株和对非肿瘤细胞的细胞毒性,初步明确特定吸光度的金纳米棒在体外实验中所需剂量。方法：在CTAB体系下合成实验所需金纳米棒并且完成EGFR单克隆抗体功能化修饰,用紫外分光光度计及电镜表征,以体外培养的人咽鳞状细胞癌FaDu细胞和非肿瘤细胞293T细胞系为实验材料,用Western blot免疫印迹法定性比较两株细胞EGFR的表达,及明确细胞内吞金纳米棒。设定不同剂量金纳米棒浓度（15%、25%、35%）,乳酸脱氢酶法比较金纳米棒对FaDu细胞株和293T细胞株毒性差异及初步明确实验剂量。结果：金纳米棒对于FaDu细胞株的细胞毒性高于293T细胞株（P〈0.01）,在293T细胞株实验组中金纳米棒剂量浓度15%、25%两组间无明显差异,而这两组与35%剂量比较均差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：mAb-EGFR功能化修饰的金纳米棒在近红外激光照射时对人咽鳞状细胞癌细胞作用表现出比非肿瘤细胞更高的细胞毒性,对于特定吸光度功能化修饰的金纳米棒光热作用杀伤人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株的安全剂量浓度为15%~25%。