去甲肾上腺素抑制大鼠耳蜗螺旋神经元γ氨基丁酸门控氯通道电流

目的 研究去甲肾上腺素(noradrenaline,NA)对培养大鼠耳蜗螺旋神经元γ氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)诱发电流的作用.方法分离培养大鼠耳蜗螺旋神经元,采用制霉菌素穿孔膜片钳全细胞记录技术,记录NA对GABA诱发电流的作用.结果 大鼠螺旋神经元GABA诱发反应的反转电位为(-0.78±0.05)mV(n=8),与Cl-平衡电位一致.GABA在钳制电位为-50 mV时,可引起内向电流,EC50为(5.2±0.5)μmol/L,Hill系数为1.03(n=26),该电流可被GABA-A受体拮抗剂荷包牡丹碱抑制,NA对该电流具有抑制作用.结论 NA可以抑制螺旋神经元GABA-A受体介导的门控氯通道电流,该作用可能与交感神经系统对听觉的调控有关.     

补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元5-HT1B、2C受体表达的影响北大核心CSCD

目的探讨补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGN)中5羟色胺(serotonin,5-HT)1B、2C受体的表达及意义。方法 60只健康SPF级雄性大鼠随机分为正常组10只(生理盐水组),耳鸣模型组50只(采用水杨酸钠腹腔注射联合"饮水抑制"大鼠行为学实验方法建立大鼠耳鸣模型),耳鸣模型组造模成功后再分为水杨酸钠组10只、中药组30只(补肾活血化痰开窍方低、中、高剂量组各10只)、西药组(卡马西平组)10只,除水杨酸钠组给予生理盐水灌胃外,各组给予相应药物干预8周,造模成功后运用免疫组化法检测各组耳蜗SGN中5-HT1B、2C受体的表达。结果耳鸣造模成功并给予相应药物干预8周后,各组大鼠耳蜗SGN中均有5-HT1B、2C受体的表达,与生理盐水组相比,水杨酸钠组中5-HT1B表达减少,5-HT2C表达明显增多;与水杨酸钠组相比,中药各剂量组耳蜗SGN中5-HT1B表达增多,2C表达均明显降低。结论耳鸣大鼠耳蜗SGN中的5-HT1B受体表达减少、5-HT2C表达增加,应用补肾活血化痰开窍方后5-HT1B表达增多而5H2C表达降低,产生了拮抗作用,该方可能应用于耳鸣的治疗。     

水杨酸钠诱导大鼠螺旋神经节细胞发生程序性坏死的研究

目的探讨受体相互作用蛋白激酶-1(receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)/受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)/混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)通路介导的程序性坏死在水杨酸钠诱导大鼠螺旋神经节(spiral ganglion neurons,SGN)细胞损伤中的作用,以及程序性坏死特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)对螺旋神经节细胞损伤的保护作用。方法通过听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)筛选出ABR阈值<40 dB SPL的48只成年健康雄性大鼠,随机分为空白对照组(左耳经圆窗注入外淋巴液,腹腔注入生理盐水)、人工外淋巴液(artificial perilymph,APL)(左耳经圆窗注入含Nec-1人工外淋巴液)组、水杨酸钠(sodium salicylate,SS)组(腹腔注射水杨酸钠350 mg·kg-1·d-1)和Nec-1组(左耳经圆窗注入Nec-1后经腹腔注射水杨酸钠),每组12只。各组连续给药7天后检测ABR,然后,通过HE染色观察螺旋神经节细胞形态变化并计算细胞坏死率;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组大鼠螺旋神经节RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA表达水平;采用免疫组织化学染色检测各组大鼠螺旋神经节RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达。结果给药后水杨酸钠组ABR反应阈较对照组及APL组升高,Nec-1组ABR阈值较水杨酸钠组降低;HE染色示与对照组、APL组相比,水杨酸钠组SGN细胞变圆,细胞质肿胀,细胞界限不清;坏死细胞计数(47.8%±2.387%)最高(P<0.0001),Nec-1组SNG中坏死细胞计数(30.6%±1.14%)较水杨酸钠组降低(P<0.0001)。qRT-PCR和免疫组化结果显示,水杨酸钠组SGN中RIPK1、RIPK3和MLKL高表达,Nec-1组SGN中RIPK1、RIPK3和MLKL表达较水杨酸钠组降低。结论在水杨酸钠致大鼠SGN损伤中存在RIPK1/RIPK3/MLKL介导的程序性坏死,Nec-1抑制程序性坏死,对SGN细胞损伤有保护作用。     

水杨酸钠对大鼠下丘神经元L-型钙通道的影响

目的 了解L-型钙通道在水杨酸钠导致耳鸣的机制中所起的作用.方法 利用全细胞膜片钳技术研究水杨酸钠对急性分离的大鼠下丘神经元L-型钙通道的影响.结果 水杨酸钠抑制L-型钙通道电流(ICa,L),且具有浓度依赖性.水杨酸钠抑制ICa,L的半抑制浓度值为1.99 mmol/L.水杨酸钠不影响ICa,L的电导-电压曲线和稳态激活曲线,水杨酸钠将ICa,L的稳态失活曲线向超极化方向移动8 mV,并且延长ICa,L失活后恢复的时间.结论 水杨酸钠对ICa,L的抑制作用,可能通过减少下丘部位γ-氨基丁酸的释放,从而导致耳鸣.     

豚鼠耳蜗单离Hensen细胞钾电流特性及三磷酸腺苷对其影响

目的 研究豚鼠耳蜗单离Hensen细胞的钾离子电流及其特性以及三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)对Hensen细胞电生理特性的影响。方法 采用传统全细胞膜片钳技术，对单离Hensen细胞进行记录。ATP通过压力注射仪对单离Hensen细胞给药。结果 Hensen细胞的钾电流呈明显的外向整流性，只有延迟整流性钾电流(delayed rectification potassiu mcurrent，IK)，没有瞬间外向性钾电流(transient outward potassium current，IA)。低浓度(0．1μmol/L，1μmol／L，10μmol／L)ATP可以使Hensen细胞的钾电流的幅度明显降低，且呈浓度依赖性，浓度越高，降幅越大。高浓度ATP(100μmol／L，1mmoL／L，10mmol／L)可以引起Hensen细胞的内向离子流，呈浓度依赖性，浓度越高，升幅越大。ATP的这两种作用均可被ATP受体拮抗剂(100μmol／L舒拉明)所逆转。结论 对Hensen细胞不同电压的刺激可以诱发出延迟整流性钾电流，低浓度ATP对Hensen细胞的钾电流有明显抑制作用，且呈浓度依赖性。高浓度ATP可以引起Hensen细胞的非选择性内向离子流，为钾离子依赖性，而且是通过ATP受体起作用。     

水杨酸钠对大鼠下丘神经元电压门控性钠通道的抑制作用

目的:了解电压门控性钠通道在水杨酸钠导致耳鸣的机制中所起的作用。方法:利用全细胞膜片钳技术研究水杨酸钠对急性分离的大鼠下丘神经元钠通道的影响。结果:水杨酸钠抑制钠通道电流(INa),而且此抑制作用具有浓度依赖性(0.1～10.0mmol/L)。水杨酸钠抑制INa的50%抑制浓度(IC50)值为1.43mmol/L。水杨酸钠不影响INa的电导-电压曲线和稳态激活曲线,将INa的稳态失活曲线向超极化方向移动9mV。此外,水杨酸钠还延长INa的失活后恢复的时间。结论:水杨酸钠以浓度依赖的方式抑制INa,并且影响INa的稳态失活和失活后恢复的动力学特征,这可能与水杨酸钠导致耳鸣的机制有关。     

顺铂对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流的影响

目的:观察记录顺铂作用下急性分离新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)延迟整流钾通道的电流曲线,分析顺铂对SGNs钾电流激活动力学的影响,并初步探讨其耳毒性机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录SGNs外向延迟整流钾电流及顺铂对此电流的影响。结果:钳制电压为-60mV,刺激电压从-60mV到 80mV逐渐去极化,阶跃电压为10mV,持续时间为500ms,可在SGNs上记录到外向钾电流,该电流对TEA-Cl(4-乙基胺)敏感,具有延迟整流特性;在细胞外液中加入10μmol/L顺铂,能明显抑制SGNs延迟整流钾电流;顺铂对此电流的抑制作用与细胞外液中顺铂的浓度呈剂量依赖性;外液洗脱后SGNs电流可基本恢复正常。结论:钾通道与SGNs动作电位的产生密切相关,顺铂可抑制SGNs钾通道电流,导致听觉功能障碍。     

豚鼠耳蜗单离Hensen细胞钾电流特性及三磷酸腺苷对其影响

目的　研究豚鼠耳蜗单离Hensen细胞的钾离子电流及其特性以及三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate ,ATP)对Hensen细胞电生理特性的影响。 方法　采用传统全细胞膜片钳技术 ,对单离Hensen细胞进行记录。ATP通过压力注射仪对单离Hensen细胞给药。结果　Hensen细胞的钾电流呈明显的外向整流性 ,只有延迟整流性钾电流 (delayedrectificationpotassiumcurrent,IK) ,没有瞬间外向性钾电流 (transientoutwardpotassiumcurrent ,IA)。低浓度 ( 0 1 μmol/L ,1 μmol/L ,1 0μmol/L)ATP可以使Hensen细胞的钾电流的幅度明显降低 ,且呈浓度依赖性 ,浓度越高 ,降幅越大。高浓度ATP( 1 0 0 μmol/L ,1mmol/L ,1 0mmol/L)可以引起Hensen细胞的内向离子流 ,呈浓度依赖性 ,浓度越高 ,升幅越大。ATP的这两种作用均可被ATP受体拮抗剂 ( 1 0 0 μmol/L舒拉明 )所逆转。结论对Hensen细胞不同电压的刺激可以诱发出延迟整流性钾电流 ,低浓度ATP对Hensen细胞的钾电流有明显抑制作用 ,且呈浓度依赖性。高浓度ATP可以引起Hensen细胞的非选择性内向离子流 ,为钾离子依赖性 ,而且是通过ATP受体起作用     

α2-肾上腺素能受体在水杨酸钠诱导大鼠耳蜗螺旋神经节神经元兴奋毒性中的表达变化

目的 观察α₂-肾上腺素能受体(α₂-adrenergic receptor, α₂-AR)在大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neuron, SGN)中的分布，以及水杨酸钠(sodium salicylate, SS)作用SGN不同时间点后α₂-AR各亚型的表达改变，以探讨其在SGN兴奋毒性中的作用。方法 将新生SD大鼠随机分成：对照组、SS处理6 h组、SS处理12 h组和SS处理24 h组，每组2只。急性分离各组SGN后进行原代培养48 h,对照组用新的培养基培养，不做处理，余三组分别用5 mM水杨酸钠处理6 h、12 h、24 h,用免疫荧光染色技术检测SGN中α₂-AR各亚型的表达情况；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot方法检测SS作用不同时间后α₂-AR各亚型的mRNA和总蛋白表达改变情况。结果 (1)免疫荧光染色表明SGN上存在α_2A-AR、α_2B     

速尿对小鼠螺旋神经节神经元细胞钾、钠通道电流的影响

目的 探讨速尿对小鼠耳蜗螺旋神经节(spiral ganglion neuron,SGN)细胞延迟整流钾通道和钠通道电流的影响.方法 分离并酶解生后1~6 d的15只小鼠耳蜗SGN细胞,利用全细胞膜片钳技术记录外向延迟整流钾通道和内向钠通道,并观察速尿对钾、钠离子通道的影响.结果在SGN细胞外加入速尿以后,延迟整流钾电流可被阻滞到+200~+300 pA左右,钠电流可被阻滞到速尿作用前峰电流幅值的30%左右.在速尿作用稳定后的1、5、10 min时开始洗脱速尿,延迟整流钾电流和钠电流分别可以恢复到速尿作用前峰电流幅值的98%、64%、25%和96%、76%和54%.结论 速尿可在不同程度上阻滞SGN细胞的延迟整流钾通道和钠通道,并随着速尿作用时间的延长,其对离子通道的损害越大.     

Change in Serotonin Level in the Organism in Cases of Hypoxia

This study was performed on both volunteers and test animals subjected to different extreme effects, causing different types of hypoxia. It is found that at high initial values of blood serotonin, the organism is more resistant to hypoxia. In individuals in whom the serotonin level is increased after extreme impacts, the hypoxic state is less readily sustained. The results of this study are used for determining the individual reactivity of an organism to hypoxia and for selecting for hire persons who may be required to work in extreme conditions.