miR-204通过内质网应激抑制视网膜母细胞瘤生长作用及机制的研究

目的 探讨miR-204在视网膜母细胞瘤中的表达、对其生长的作用及其分子机制。 方法 通过RT-PCR检测miR204 在视网膜母细胞瘤(Y79)及正常视网膜细胞(ARPE-19)中的表达,并用miR-204 模拟物及抑制物转染Y79 细胞,CCK-8 及流式细胞仪检测Y79 细胞的生存率及凋亡情况, Western blot 法检测GRP78蛋白的表达。 结果 miR-204在视网膜母细胞瘤Y79细胞中呈现低表达,可显著抑制视网膜母细胞瘤的增殖,促进其凋亡,可上调 GRP78蛋白的表达,激活内质网应激途径。 结论 miR-204在视网膜母细胞瘤细胞中表达下调,miR-204可能通过激活内质网应激介导的调亡途径诱导视网膜母细胞瘤细胞发生凋亡。     

miR-485-5p在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的探讨miR-485-5p在鼻咽癌组织中的表达及临床意义。方法采用qRT-PCR检测76例鼻咽癌和28例鼻咽部黏膜组织中miR-485-5p的表达,并结合临床信息,统计分析其表达水平与鼻咽癌患者临床病理参数的相关性。结果miR-485-5p在鼻咽癌组织中的表达较鼻咽部黏膜组织显著下降（P<0.05）;同时miR-485-5p低表达与鼻咽癌患者的淋巴结转移密切相关（P=0.001）,而与鼻咽癌患者的年龄、性别、T分级和TNM分期无明显相关（P> 0.05）。结论本研究表明miR-485-5p为转移相关基因,可能在鼻咽癌转移中发挥了重要作用。     

miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的　探讨miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的调控机制。方法　运用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time f luorescence quantification polymerase chain reaction,qRT-PCR）法检测人支气管上皮细胞HBE、喉鳞状细胞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p、DIAPH2的表达;将miR-NC组（转染miR-NC）、miR-129-5p组 （转染miR-129-5p mimics）、anti-miR-NC组（转染antimiR-NC）、anti-miR-129-5p组（转染anti-miR-129-5p）、si-NC组（转染si-NC）、si-DIAPH2（果蝇形态同系物2,Drosophila Homologue of Diaphanous2,DIAPH2）组（转染si-DIAPH2）、miR-129-5p+pc DNA组（共转染miR-129-5p和pc DNA）、miR-129-5p+pc DNA-DIAPH2组（共转染miR-129-5p和pc DNA-DIAPH2）,用脂质体法转染HN4、TU177细胞;Western blot检测细胞中DIAPH2、细胞周期蛋白依赖激酶1（cyclinD1）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase-3）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（cleaved-caspase-9）的蛋白表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-129-5p与DIAPH2的结合力。结果　与人支气管上皮HBE相比,喉鳞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p 表达均显著降低,DIAPH2表达显著升高（P <0.05）;过表达miR-129-5p、敲减DIAPH2均可显著抑制HN4、TU177细胞增殖、促进凋亡、下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9;miR-129-5p可抑制野生型DIAPH2细胞的荧光活性,并负向调控DIAPH2的表达;过表达DIAPH2可逆转miR-129-5p对Hep-2细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论　miR-129-5p可抑制喉鳞状细胞癌的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向DIAPH2相关,将可为miR-129-5p靶向治疗喉鳞状细胞癌提供新的依据。     

长链非编码RNA KCNIP4-IT1通过靶向miR-181c-5p对喉癌细胞增殖和迁移的影响

目的　探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）KCNIP4-IT1/miR-181c-5p分子轴对喉癌TU177细胞增殖和迁移的调控作用。方法　采用qPCR检测30对喉癌组织和癌旁组织、喉癌细胞系（TU159、TU686、AMC-NH-8、TU177、TU138）和支气管上皮细胞系（16HBE）中KCNIP4-IT1表达水平。通过RNA干扰技术将KCNIP4-IT1的小干扰RNA转染到TU177细胞（si-KCNIP4-IT1组）,建立KCNIP4-IT1低表达细胞系,另设置阴性Ctrl组（Ctrl组,转染阴性对照序列）。MTT法、划痕愈合实验检测敲低KCNIP4-IT1后TU177细胞增殖和迁移的变化。双荧光素酶报告基因实验验证KCNIP4-IT1与miR-181c-5p之间的靶向调控关系。qPCR检测细胞中miR-181c-5p和人纤溶酶原激活物抑制剂1（SERPINE1）mRNA的表达水平。Western blotting检测细胞迁移蛋白（β-catenin、N-Cadherin）和增殖蛋白（CDK3、PCNA）的表达水平。结果　KCNIP4-IT1在喉癌组织中表达水平高于癌旁组织（t =9.297,P<0.01）。KCNIP4-IT1在喉癌细胞系中表达水平高于16HBE细胞（t分别为4.620、7.502、4.944、8.665、9.139,P 均<0.01）,以TU177细胞中KCNIP4-IT1表达水平最高（F =17.819,P<0.01）。与Ctrl组相比,敲低KCNIP4-IT1显著抑制TU177细胞增殖（P 均<0.05）和迁移（t=3.740,P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实KCNIP4-IT1靶向调控miR-181c-5p（t=5.838,P<0.01）。与Ctrl组相比,敲低KCNIP4-IT1明显上调miR-181c-5p的表达水平（t=6.214,P <0.01）,下调SERPINE1基因的表达水平（t =8.190,P<0.01）。与Ctrl组相比,敲低KCNIP4-IT1明显下调细胞迁移蛋白（β-catenin、N-Cadherin）和增殖蛋白（CDK3、PCNA）的表达水平。结论　KCNIP4-IT1在喉癌组织和细胞系中呈高表达状态,敲低KCNIP4-IT1抑制喉癌TU177细胞的增殖和迁移,其分子机制可能与靶向调控miR-181c-5p并抑制SERPINE1表达有关。     

miR-182-5p调控FHIT对喉鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-182-5p调控脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)对喉鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法选取喉鳞癌组织和癌旁正常组织标本各39例,将anti-miR-NC、anti-miR-182-5p、miR-NC、miR-182-5p载体质粒分别转染至FD-LSC-1喉鳞癌细胞中,分别记为anti-miR-NC组、anti-miR-182-5p组、miR-NC组、miR-182-5p组;将anti-miR-182-5p质粒分别与si-NC、si-FHIT载体质粒共转染至FD-LSC-1细胞中,分别记为anti-miR-182-5p+si-NC组、anti-miR-182-5p+si-FHIT组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测喉癌组织、癌旁组织中的FHIT及miR-182-5p表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)法检测FHIT、细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测miR-182-5p和FHIT的靶向关系。结果与癌旁组织相比,喉鳞癌组织中miR-182-5p表达水平显著升高,FHIT表达水平显著降低。抑制miR-182-5p表达可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,提高细胞凋亡率,降低CyclinD1、Bcl-2、MMP-2表达水平,提高p21、Bax、E-cadherin表达水平。miR-182-5p可靶向调控FHIT,抑制FHIT能逆转抑制miR-182-5p对喉鳞癌细胞FD-LSC-1增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡促进作用。结论抑制miR-182-5p表达可抑制喉鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与FHIT表达相关。     

喉癌细胞来源外泌体通过微小核糖核酸-21-5p促进巨噬细胞M2极化的作用及机制研究#br#

目的　研究喉癌患者术前及术后血清来源外泌体及其微小核糖核酸-21-5p（miR-21-5p）的变化,探讨喉癌细胞通过miR-21-5p促进巨噬细胞M2极化的机制。方法　收集正常人群血清以及喉癌患者术前和术后1个月及6个月血清样本,分离外泌体,纳米流式细胞仪揭示粒子粒径和数量,BCA和Western blot分析外泌体的含量和标记分子表达。建立人喉癌细胞系AMC-HN-8和巨噬细胞共培养体系以及外泌体处理巨噬细胞体系,流式分析巨噬细胞极化情况,qRT-PCR检测外泌体和细胞中miR-21-5p水平。结果  喉癌术前和术后1个月及术后6个月血清来源外泌体CD9、CD63和CD81阳性表达,术前喉癌血清来源外泌体数量和蛋白浓度均高于对照组,而患者术后血清来源外泌体数量和蛋白浓度均比术前低。细胞水平发现AMC-HN-8与巨噬细胞共培养或者其来源外泌体处理巨噬细胞均降低了M1型巨噬细胞比例,提升M2型细胞比例。分子水平检测发现术前喉癌血清来源外泌体中miR-21-5p水平升高,术后则明显下降,AMC-HN-8与巨噬细胞共培养或其来源外泌体处理巨噬细胞均能升高巨噬细胞中miR-21-5p水平。抑制AMC-HN-8中miR-21-5p水平,其分泌的外泌体中miR-21-5p也受到抑制,处理巨噬细胞后,巨噬细胞中miR-21-5p水平和M2型细胞比例下降,而M1型细胞比例有所恢复。结论  喉癌患者血清外泌体含量以及miR-21-5p水平较高,喉癌细胞可通过外泌体传递miR-21-5p作用于巨噬细胞,促进巨噬细胞M2极化。     

miR-205-5p靶向HMGB1/TLR4途径对变应性鼻炎免疫功能的作用研究

目的 研究微小RNA-205-5p(miR-205-5p)靶向高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4(HMGB1/TLR4)途径改善变应性鼻炎(AR)免疫功能的作用。方法 选取60只雄性大鼠,分为正常对照组(A组)、变应性鼻炎组(B组)、变应性鼻炎+miR-205-5p agomir组(C组)、变应性鼻炎+miR-205-5p antagomir组(D组)共4组,每组各15只,A组不做任何处理,B、C、D组均采用卵清白蛋白鼻腔强化致敏建立AR模型。模型建立完成后,C组尾部注射300μg miR-205-5p agomir, D组尾部注射miR-205-5p antagomir, A、B组均注射生理盐水。1周后评价各组行为学、免疫相关指标[干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、免疫球蛋白E(IgE)]、鼻黏膜炎性反应、上皮细胞间紧密连接、内质网形态及紧密连接蛋白、HMGB1/TLR4途径蛋白表达量。miR-205-5p与TLR4的靶向关系使用双荧光素酶报告实验分析。结果 4组行为学评分、IL-4、IgE、HMGB1、TLR4、...     

β-榄香烯影响糖尿病大鼠视网膜中IL-1β、ICAM-1表达分析

目的 研究β-榄香烯对糖尿病大鼠视网膜病变中白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达变化的影响,以期为β-榄香烯应用于糖尿病视网膜病变临床防治提供理论依据。 方法 选取40只成年SD健康大鼠,随机分为正常对照组、糖尿病组、β-榄香烯治疗组(40 mg/kg)和β-榄香烯治疗组(80 mg/kg)。采用链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射大鼠给予构建糖尿病模型,对β-榄香烯治疗组大鼠实施β-榄香烯溶液灌胃,持续治疗12周。在给药12周末对各组大鼠进行处死,将大鼠的视网膜组织进行分离,同时收集大鼠房水与血清,使用ELISA法测定IL-1β、ICAM-1蛋白在大鼠视网膜组织、房水与血清中的表达情况;免疫组织化学检测大鼠视网膜组织中IL-1β、ICAM-1蛋白表达水平;蛋白质免疫印迹法检测大鼠视网膜组织中IL-1β、ICAM-1蛋白的表达量。 结果 ELISA 法检测结果显示,与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血清与视网膜中IL-1β、ICAM-1 蛋白含量升高;但β-榄香烯治疗组(40 mg/kg)和β-榄香烯治疗组(80 mg/kg)大鼠血清与视网膜中IL-1β、ICAM-1 含量低于糖尿病组,其中β-榄香烯治疗组(80 mg/kg)对血清与视网膜IL-1β、ICAM-1蛋白的降低作用较β-榄香烯治疗组(40 mg/kg)作用更强;各组房水中IL-1β、ICAM-1蛋白比较差异无统计学意义。正常对照组视网膜IL-1β蛋白微量表达,β-榄香烯治疗组(40 mg/kg)和β-榄香烯治疗组(80 mg/kg)IL-1β均较糖尿病组表达低;与正常对照组比较,糖尿病组视网膜IL-1β、ICAM-1蛋白表达量升高;β-榄香烯治疗组(40 mg/kg)和β-榄香烯治疗组(80 mg/kg)视网膜IL-1β、ICAM-1蛋白表达量均低于糖尿病组,且β-榄香烯治疗组(80 mg/kg)视网膜IL-1β、ICAM-1蛋白表达量低于β-榄香烯治疗组(40 mg/kg)。 结论 β-榄香烯可以抑制糖尿病大鼠血清及视网膜组织中的IL-1β、ICAM-1炎性因子的产生,且β-榄香烯剂量越大,抑制效果越明显,提示β-榄香烯可能用于糖尿病视网膜病变的防治。     

Cell proliferation and p27Kip1 expression in endophytic schneiderian papillomas

OBJECTIVE: To clarify epithelial cell proliferation and p27Kip1 expression along the stepwise histological changes from endophytic schneiderian papillomas to associated carcinomas. STUDY DESIGN: Retrospective investigation involved surgical specimens from 58 patients. METHODS: Immunohistochemical assessment involved the nuclear Ki67 antigen expressed in proliferating cells. Further, the cyclin-dependent kinase (cdk) inhibitor p27Kip1 was assessed. Binding of p27Kip1 to the cyclin E-cdk2 complex inhibits this kinase, which results in cell cycle arrest. The expression rates of both proteins were compared between nonpapillomatous nasal mucosa, endophytic schneiderian papillomas, carcinoma in situ, and invasive squamous cell carcinomas. Statistics involved the Wilcoxon and Mann-Whitney u tests. Significance was set at P <.05. RESULTS: Comparable cell proliferation rates were observed between non-papillomatous nasal mucosa and cylindrical cell papillomas. Significant increases in cell proliferation were found along the stepwise series of histological changes involving non-papillomatous nasal mucosa, columnar epithelium in inverted papillomas, transitional and squamous metaplasia in inverted papillomas, and dysplastic inverted papillomas (P <.05, respectively). A tendency toward increased cell proliferation in carcinoma in situ compared with dysplastic inverted papillomas was present; however, this was not statistically significant. The expression rates of p27Kip1 were comparable between non-papillomatous nasal mucosa and all histological subtypes within nondysplastic endophytic schneiderian papillomas. Significantly reduced p27Kip1 expression was found in surface cells in dysplastic compared with non-dysplastic inverted papillomas, as well as in the total number of cells in carcinoma in situ compared with dysplastic inverted papillomas (P <.05, respectively). CONCLUSIONS: Inverted papillomas but not cylindrical cell papillomas show increased cell proliferation compared with nonpapillomatous nasal mucosa. Stepwise increases in cell proliferation accompany the consecutive histological changes within inverted papillomas. Among them, increased cell proliferation along with the development of dysplasia and carcinoma in situ is associated with reduced p27Kip1 expression.