过敏性紫癜患儿血清嗜酸细胞阳离子蛋白检测及意义

目的：探讨嗜酸细胞阳离子蛋白（ＥＣＰ）在过敏性紫癜（ＨＳＰ）中的作用。方法：应用ＰｈａｒｍａｓｉａＣＡＰＳｙｓｔｅｍＥＣＰＦＥＩＡ荧光酶标法测定４２例ＨＳＰ患儿血清ＥＣＰ水平。结果：急性发作期患儿血清ＥＣＰ水平显著高于正常对照组（Ｐ＜０００１），也显著高于经激素治疗缓解组（Ｐ＜０００１）；伴肾脏受累患儿血清ＥＣＰ明显高于无肾脏受累患儿（Ｐ＜００１）；而缓解组与对照组则差异无显著性。结论：ＥＣＰ参与了ＨＳＰ疾病的病理生理过程，血清ＥＣＰ测定对ＨＳＰ尤其是紫癜性肾炎临床诊断、病情评估及指导治疗有一定帮助     

婴幼儿佝偻病血清诊断指标探讨

应用竞争蛋白结合法测定佝偻病血清２５（ＯＨ）Ｄ３浓度，同时测定了血清钙（Ｃａ）、磷（Ｐ）、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、尿羟脯氨酸与肌酐比值（ＴＨＰ／Ｃｒ）。结果显示：佝偻病患儿血清２５（ＯＨ）Ｄ３值降低，ＡＬＰ、尿ＴＨＰ／Ｃｒ值增高。相关分析显示，血清２５（ＯＨ）Ｄ３与Ｃａ、Ｐ无相关性（Ｐ＞００５）；与ＡＬＰ、ＴＨＰ／Ｃｒ呈负相关（Ｐ＜００１，Ｐ＜００５）。说明血清２５（ＯＨ）Ｄ３、ＡＬＰ、ＴＨＰ／Ｃｒ对佝偻病有诊断价值，血清Ｃａ、Ｐ对佝偻病诊断有参考价值。     

大剂量维生素C在新生儿再灌注损伤中的应用

观察了大剂量维生素Ｃ（ＶｉｔＣ）用于新生儿再灌注损伤的疗效。结果ＶｉｔＣ１ｇ／（ｋｇ·ｄ）的疗效明显优于０．５ｇ／（ｋｇ·ｄ）。前者首次用药后患儿血清丙二醛（ＭＤＡ）明显减少，总超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）明显增加（Ｐ＜０．００１），血液酸度无明显变化（ｐＨ：Ｐ＞０．１，ＨＣＯ３－：Ｐ＞０．０５，ＢＥ；Ｐ＞０．１）。而后者首次用药后患儿血清ＭＤＡ无明显减少（Ｐ＞０．０５），ＳＯＤ虽明显增加（Ｐ＜０．０１），但增加的幅度明显低于前者，提示ＶｉｔＣ作为自由基清除剂治疗新生儿再灌注损伤时，剂量以１ｇ／（ｋｇ·ｄ）为宜。     

HGFs联合对体外人脐血造血干细胞及SCID小鼠体内扩增作用的研究

本实验应用外源性重组人多种造血生长因子（ｒｈＨＧＦｓ）处理人ＨＳＣ／ＳＣＩＤ小鼠模型，以体外半固体培养法及ＦＣＡＳ检测ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ及ＣＤ３４＾＋细胞，从而评价ＨＧＦｓ对受鼠体内人造血干细胞的扩增作用。结果：人脐血及骨髓ＭＮＣ经孵育２４小时后ＣＤ３４＾＋细胞含量，ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ产率皆得到明显扩增（Ｐ〈０．０１）；且脐血组优于骨髓组（Ｐ〈０．０１）。输脐血ＭＮＣ＋ＨＧ     

肺炎支原体肺炎患儿细胞免疫的研究

采用ＡＰＡＡＰ法和ＥＬＩＳＡ法对３５例肺炎支原体肺炎（ＭＰＰ）患儿急性期和恢复期外周血Ｔ淋巴细胞亚群（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）及血清可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）进行测定。ＭＰＰ患儿急性期和恢复期ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８比值均明显低于对照组（Ｐ均＜０．０１）；ＣＤ８明显高于对照组（Ｐ均＜０．０５）；ＣＤ３与对照组无显著性差异。在ＭＰＰ的急性期和恢复期，ｓＩＬ－２Ｒ水平明显高于对照组（Ｐ均＜０．０１）。急性期ＣＤ８、ＣＤ４与ｓＩＬ－２Ｒ水平呈高度正、负相关。提示Ｔ淋巴细胞功能的紊乱及ｓＩＬ－２Ｒ水平的改变与ＭＰＰ的发生密切相关。     

N-甲基-D-天门冬氨酸受体及其调控的钙内流在大鼠感染性脑损伤中的变化

为探讨Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体及其调控的钙内流在感染性脑损伤发病机制中的作用，采用Ｆｕｒａ－２／Ａｍ荧光法检测大鼠大脑皮质突触体内游离钙浓度（［Ｃａ＋＋］ｉ）。结果表明，注射百日咳杆菌组的［Ｃａ＋＋］ｉ较对照组显著增加（Ｐ均＜０．０１），并与注菌时间呈正相关关系（４小时ｖｓ０．５小时和２４小时ｖｓ４小时，Ｐ＜０．０５和＜０．０１）。ＮＭＤＡ受体的非竞争性拮抗剂ＭＫ－８０１预处理组（ＭＢＰ）的［Ｃａ＋＋］ｉ、脑含水量和伊文思蓝含量均较注菌组显著减少（Ｆ值分别为７２．２５、１６．８９、１４．３６，Ｐ＜０．０１和＜０．０５），并以２４小时［Ｃａ＋＋］ｉ减少最为明显（Ｐ＜０．０１）。提示ＮＭＤＡ受体调控的神经元内钙超载在感染性脑损伤、尤其在迟发性脑损伤的发病机制中起着重要作用。     

先天性巨结肠症NPY,SOM,CGRP能神经改变的免疫组织化学观察

为了明确神经肽Ｙ（ＮＰＹ），生长抑素（ＳＯＭ）和降钙调节基因相关肽（ＣＧＲＰ）能神经与先天性巨结肠症（ＨＤ）的关系，采用Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ报道的免疫组织化学方法，了解到ＨＤ狭窄段内缺乏ＮＰＹ，ＳＯＭ和ＣＧＡＰ能神经元胞体，但三种纤维明显增生增粗，并出神经干，且ＮＰＹ，ＳＯＭ和ＣＧＲＰ能神经支配紊乱，与ＨＤ狭窄段痉挛及蠕动不良有关。     

罗钙全对肾病综合征患儿钙、磷及25-羟维生素D_3和甲状旁腺素水平的影响

目的探讨罗钙全（骨化三醇）短期口服冲击治疗对小儿肾病综合征（ＮＳ）的疗效。方法对１７例长期糖皮质激素（ＧＣ）治疗的ＮＳ患儿血钙、磷、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、骨碱性磷酸酶（ＢＡＬＰ）、２５－羟维生素Ｄ３［２５－（ＯＨ）Ｄ３］、甲状旁腺素（ＰＴＨ）水平进行了测定,并观察了罗钙全短期口服冲击治疗对上述指标的影响。结果ＮＳ患儿血钙偏低（Ｐ＜００１）,ＡＬＰ、ＢＡＬＰ、ＰＴＨ升高（Ｐ＜００１）,２５－（ＯＨ）Ｄ３下降（Ｐ＜００５）;经罗钙全治疗后血钙磷上升（Ｐ＜００１）,ＡＬＰ、ＢＡＬＰ下降（Ｐ＜００１）,ＰＴＨ水平降低（Ｐ＜００１）,２５－（ＯＨ）Ｄ３无明显变化（Ｐ＞００５）。结论罗钙全短期口服冲击治疗可有效地改善ＮＳ患儿钙磷代谢紊乱,抑制ＰＴＨ的异常过度分泌。     

心肌疾病抗ADP/ATP载体抗体与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的临床研究

目的探讨病毒性心肌炎（ＶＭＣ）和扩张型心肌病（ＤＣＭ）的自身免疫发病机制。方法采用免疫印转和放射免疫技术检测了３０例ＶＭＣ、１４例ＤＣＭ患儿血浆中抗心肌线粒体ＡＤＰ／ＡＴＰ运载蛋白（ＡＮＴ）抗体和粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）。结果ＶＭＣ和ＤＣＭ患儿抗ＡＮＴ抗体和ＧＭ－ＣＳＦ的阳性率分别为７３％和５７％，而２５例正常健康儿分别为０和１２％（Ｐ均＜０．０１），且抗ＡＮＴ抗体与ＧＭ－ＣＳＦ的血浆水平呈正相关（ｒ＝０．４０９１，Ｐ＜０．０５）。结论小儿ＶＭＣ和ＤＣＭ的发病与心肌的自身免疫损伤有关，抗ＡＮＴ抗体和ＧＭ－ＣＳＦ均参与了这一过程。抗ＡＮＴ抗体可作为小儿ＶＭＣ和ＤＣＭ的一种特异性诊断指标。     

新生大鼠缺氧缺血性脑病脑组织内脂质过氧化改变及丹参保护作用探讨

为探讨ＨＩＥ脑组织脂质过氧化的改变及丹参的保护作用,用生后七日ＳＤ大鼠制成ＨＩＥ模型,在模型后不同时刻检验脑组织内丙二醛（ＭＤＡ）及谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）的动态变化,利用丹参进行实验性治疗。结果显示（１）ＨＩＥ后 ２小时ＭＤＡ显著升高（１．７１±０．１９,Ｐ＜０．０１）,１２小时达高峰（１．９７±０．２９,Ｐ＜０．０１）７２小时后恢复正常（１．３２±０．０９,Ｐ＞０．０５）;ＧＳＨ－ＰＸ２小时显著降低（１．２９±０．４３,Ｐ＜０．０１）,以后渐升高,但 ４８小时（２．２２±０．８１）与对照组（３．３４±０．３４）相比仍有统计学差异（Ｐ＜０．０５）,７２小时恢复正常（２．４５±０．９０,Ｐ＞０．０５）;丹参治疗组ＭＤＡ显著降低（１．３９±０．３７,Ｐ＜０．０１）,ＧＳＨ－ＰＸ显著升高（２．４２±０．６２,Ｐ＜０．０５）。表明脑组织内脂质过氧化增强、抗氧化减弱参与ＨＩＥ的发病机制,丹参具有抗氧化作用,能减轻脑组织水肿、出血及坏死,有临床应用价值。     

嘌呤受体亚型P2Y2在先天性巨结肠中的表达及意义

目的 研究HD患儿各段肠管中ATP受体亚型P2Y2的表达情况.初步探讨P2Y2受体表达与HD发生的关系.方法 随机选取2000至2008年在我院行手术治疗的HD患儿结肠标本共30例,将HD患儿正常段肠管设为对照组,移行段及痉挛段肠管设为实验组,应用免疫组化及RT-PCR法观察ATP受体P2Y亚型P2Y2在各肠段的表达情况.结果HD患儿正常段肠管的神经节细胞中有大量P2Y2阳性细胞的表达,而在痉挛段肠管中没有P2Y2阳性细胞的表达,移行段组织中可见P2Y2阳性细胞的表达,但其数量明显少于对照组,差别具有统计学意义(P<0.05).RT-PCR结果显示mRNA水平的表达与免疫组化一致.结论 HD患儿痉挛段肠管中ATP受体P2Y2的表达缺失,P2Y2的表达缺失可能与HD的发生有关.     

先天性巨结肠神经生长因子及神经生长因子受体基因表达

目的探讨神经生长因子(nerve growth factor，NGF)及其神经生长因子受体(nerve growth factor receptor，NGFR)对先天性巨结肠(Hirschsprungs disease，HD)的调控作用。方法采用RT-P(永技术检测新鲜标本正常对照肠管、痉挛段、移行段和扩张段各22例NGF和NGFR mRNA的表达，分析并统计其与临床病理特点之间的关系。结果22例正常对照肠管21例NGF mRNA表达阳性(95．5％)，20例NGFR mRNA表达阳性(90．9％)；痉挛段5例NGF mRNA表达阳性(22．7%)，6例NGFR mRNA表达阳性(27．3％)；移行段9例NGF mRNA表达阳性(49．9％)，7例NGFR mRNA表达阳性(31．8％)；扩张段18例NGF mRNA表达阳性(81．8%)，19例NGFR mRNA表达阳性(86．4％)。NGF和NGFR mRNA正常肠管与扩张段肠管中表达高度一致；痉挛段和移行段均为NGF mRNA和NGFR mRNA低表达。结论NGF和NGFR与HD病理形态有相关性；HD的痉挛段和移行段肠管NGF及NGFR表达异常，提示NGF和NGFR基因可能与HD的发生有关。     

先天性巨结肠Cajal间质细胞的研究

目的　本研究通过观察Cajal间质细胞 (interstitialcellofCajal,ICC)在先天性巨结肠患者狭窄段、移行段、扩张段中的分布情况 ,探讨ICC在先天性巨结肠发病中的作用。方法　收集我院1999～ 2 0 0 2年 2 6例先天性巨结肠患儿标本。短段型 2 4例 ,长段型 2例。于手术中分别选取扩张段 ,移行段及狭窄段肠壁的全层组织。采用SP法 (过氧化物酶标记的链霉卵白素法 )免疫组织化学技术 ,对 2 6例先天性巨结肠的狭窄段、移行段及扩张段标本分别进行c kit免疫组织化学反应 ,观察Ca jal间质细胞分布情况。 结果　发现ICC的密度从扩张段→移行段→狭窄段是逐渐减低的。ICC与肌间神经丛关系密切 ,在扩张段ICC分布在神经丛的周边部和内部 ,且数量相对较多 ,在狭窄段ICC偶见于神经丛的周边部 ,在神经丛内部未见该细胞。光学显微镜下比较同一例患者扩张段和狭窄段神经丛中Cajal间质细胞的数目不同 (t=2 3.0 4 ,P <0 .0 5 ) ,有统计学显著性差异。结论　ICC的分布异常与先天性巨结肠的发生有密切关系。我们推测胚胎基质的某种缺陷不仅损害了神经嵴细胞的移行 ,也影响ICC的分化和成熟。我们可以推论 ,与HD肠壁神经节缺失一样 ,ICC分布异常导致HD病变肠管慢波节律和兴奋传导异常 ,从而引起或加重HD的发病。     

先天性巨结肠c-kit+肠间质细胞分布的免疫组织化学研究

目的：了解先天性巨结肠（HD）肠壁内神经节细胞与肠间质细胞（ICCs）分布的关系。以进一步研究HD的发病机制。方法：采用兔抗人多克隆c-kit抗体，通过免疫组化SABC法观察了58例HD患儿及12例正常儿结、直肠壁内c-kit^ ICCs的分布情况，患儿年龄3个月－10岁，男46例，女12例，短段型HD7例，常见型30例，长段型16例，全结肠型5例。结果：对照组肠肌层内及肌间神经节周围分布有中等量至大量的c-kit^ ICCs，并连接成网络状结构，而在肌间神经节和粘膜下神经内均无c-kit免疫反应性表达，在HD有神经节细胞段肠壁内c-kit^ ICCs的数目和分布与正常对照组无显著差异（P＞0．05），而在HD有神经节细胞段及正常对照组相比，差异有显著性意义（P＜0．01），结论：c-kit^ ICCs的异常分布可能与HD肠动力障碍的发生机制有关。     

Selective chemical ablation of the enteric plexus in mice

 Although genetically aganglionic mice such as piebald lethal and lethal spotted mice exhibit striking similarities to the human condition of Hirschsprung's disease (HD), the aganglionic segment is very short and always located in the distal part of the rectum. Topical application of benzalkonium chloride (BAC) to the rectum of rats has been reported to result in segmental aganglionosis. To induce chemical ablation of the enteric plexus in mice to produce an aperistaltic narrow segment simulating HD, 32 mice were divided into three groups: (1) abdominal (n=12), for sigmoid colon treatment; (2) rectal (n=10), for rectum treatment; and (3) controls (n=10). For groups 1 and 2, 0.1% BAC was applied to a 1-cm serosal surface of the bowel for 15 min. In the controls, isotonic saline was applied in this fashion. A detailed histologic examination was performed using hematoxylin and eosin staining and acetylcholinesterase histochemistry. Ten animals (9 in group 1 and 1 in group 2) died 1 to 9 weeks after BAC treatment. Autopsy revealed a narrow segment of bowel at the site of BAC treatment and marked dilatation of the bowel proximal to the narrow segment. The remaining animals were killed 12 weeks after BAC treatment. Histologic examination demonstrated normal myenteric and submucous plexuses in the controls, whereas there was a total lack of innervation in the BAC-treated segments. Topical application of BAC thus successfully produced a narrow aganglionic segment of bowel in normal mice. This model provides the basis for future studies to investigate the pathophysiology of HD and megacolon and for comparison with genetically aganglionic mice. Accepted: 18 April 2001     

先天性巨结肠HuD蛋白表达的实验研究

目的 HuD是神经元胚胎发育中生长锥、突起形成延伸及成熟神经元存活所必须的蛋白,其在肠神经系统发育及先天性巨结肠发生中作用机制尚不明确,国内外均未见相关报道。本文探讨HuD蛋白在先天性巨结肠不同部位肠壁组织中的表达,以了解HuD在先天性巨结肠发病中作用机制。方法分别取15例先天性巨结肠患儿手术切除的病变段、移行段、扩张段结肠壁全层及5例人正常结肠组织,采用免疫组织化学、Western免疫印迹分析对不同部位肠壁HuD蛋白表达进行检测,利用图象分析系统及统计软件进行结果分析。结果先天性巨结肠狭窄段粘膜下和肌间抗HuD蛋白抗体染色缺如,移行段显色程度及表达量都明显减少于扩张段和正常对照组（P〈0．01）;狭窄段和移行段的HuD蛋白水平明显少于扩张段和正常段（P〈O．01）。结论HuD在先天性巨结肠病变段粘膜下、肌间神经丛不表达提示HuD蛋白减少可能是使肠神经系统胚胎发育或成熟神经元存活出现障碍而导致先天性肠无神经节细胞的原因之一。     

婴儿先天性巨结肠与巨细胞病毒感染

为了解婴儿先天性巨结肠（ＨＤ）与巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的关系，对１９例２～１８个月的ＨＤ患儿（经病理证实）的血清、尿和组织块用病毒分离和ＤＮＡ探针杂交方法进行ＣＭＶ检测。结果：１９例ＨＤ患儿分离ＣＭＶ的１９份尿标本中２份污染，在１７份尿标本中７份阳性，阳性率为４１．２％；正常儿尿标本阳性率为１４．４％（Ｐ＜０．０５）。１９例ＨＤ血清中，ＣＭＶＩｇＭ抗体２例阳性，阳性率为１０．５％；正常儿阳性率为８．０％（Ｐ＞０．０５）。１９例ＨＤ痉挛段组织块中无一例ＣＭＶ阳性，但６例ＨＤ痉挛段组织块ＣＭＶ－ＤＮＡ探针杂交全部阳性，其中２例强阳性，阳性率为１００％。说明婴儿ＨＤ与ＣＭＶ感染关系密切，ＣＭＶ感染可能是包括ＨＤ在内的一些先天性畸形的重要致畸因素。     

先天性巨结肠与巨结肠同源病的Ret蛋白免疫组织化学研究

目的了解Ret蛋白在先天性巨结肠和具结肠同源病肠组织中的表达,并进一步研究Ret蛋白在先天性巨结肠和巨结肠同源病发病中的作用。方法采用鼠抗人Ret单克隆抗体通过免疫组化SABC法对15例先天性巨结肠,11例巨结肠同源病肠组织Ret蛋白的表达进行研究,10例正常结肠组织作对照。结果Ret蛋白在先天性巨结肠和巨结肠同源病的扩张段,对照组均呈现阳性反应（P〉0．05）,在先天性巨结肠狭窄段大多数表现为阴性反应,极少数出现阳性反应,而巨结肠同源病狭窄段可见Ret免疫反应蛋白阳性细胞,而且偶见巨大的阳性细胞;先天性巨结肠狭窄段分别与巨结肠同源病狭窄段和对照组比较均有统计学意义（P〈0．001）。结论Ret蛋白对先天性巨结肠的发生有重要作用,而与巨结肠同源病的发生无明确关系。     

SOX10mRNA在先天性巨结肠肠壁中的表达

目的研究性别决定区Y基因相关高可变区基因10（SRY related high mobilitvgroup—BoX gene10，SOX10）在先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease，HD）肠壁中的表达情况，以进一步了解HD在分子基础上的发病机制。方法分别取12例先天性巨结肠病例的手术标本狭窄段、移行段及扩张段，随机取12例非巨结肠手术病例（如结肠造瘘或关瘘手术）作为对照组，提取平滑肌组织总RNA，应用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）扩增目的基因和看家基因片段，观察病变段和正常段SOX10mRNA的表达，并与看家基因（B—actin）在病变段和正常段的表达比较，进行统计学分析。结果SOX10mRNA在HD患儿痉挛段呈低表达，在扩张段及正常对照组呈高表达。痉挛段SOX10mRNA的表达量与移行段、扩张段及正常对照组比较，差异均有统计学意义；而移行段、扩张段及对照组比较，差异无统计学意义。结论HD患儿结肠SOX10mRNA的异常分布显示SOXIO基因是出生后肠神经系统维持正常功能所必需的，SOX10mRNA表达减少可引起肠管痉挛，肠腔狭窄，造成肠功能障碍。     

Histochemical and immunohistochemical study of the intrinsic innervation in colonic dysganglionosis

Defective innervation of the neuromuscular junctions (NMJ) was recently described in intestinal neuronal dysplasia type B (IND B). The aim of the present study was to correlate the alterations in NMJs to other classically described parameters in dysganglionoses and to determine the relationship between NMJ abnormalities in IND B and clinical symptoms. The rectal biopsies and full-thickness colonic biopsy specimens of 17 patients were studied applying histochemical (acetylcholinesterase [AChE], lactic dehydrogenase [LDH], and succinic dehydrogenase [SDH] reactions) and immunohistochemical (neuronal-cell adhesion molecule [NCAM] and SY antibodies) methods. Thirteen patients had Hirschsprung's disease (HD). IND B was diagnosed in 11 (associated with HD in 8 cases, isolated in 2, and associated with hypoganglionosis in 1). In the aganglionic segment of HD there was very intense AChE activity; in contrast, NCAM- and SY-immunoreactive nerve fibers were markedly decreased. A spectrum of abnormalities was observed in IND B, usually more severe in the most distal segments: giant and immature ganglia in the submucous plexus were observed in all cases; heterotopic myenteric ganglia were frequent (72.7%); hyperganglionosis was observed in 6 (54.5%) and was not related to the patients' age; thick and tortuous NCAM- and SY- immunoreactive nerve fibers, irregularly distributed in the colonic wall, were observed in 81.8% of the cases. No relationship was observed between abnormalities of NCAM- and SY-immunoreactive nerve fibers and AChE activity, ganglion-cell maturity, heterotopy, or the clinical symptoms presented by the patients with IND B. In hypoganglionism, low AChE activity and a slight decrease in NCAM- and SY-immunoreactive nerves were observed. Thick and tortuous, irregularly-distributed intrinsic NCAM- and SY-immunoreactive nerves were observed in every colon layer in IND B. Our results do not support IND B as a NMJ disorder. Accepted: 12 May 2000