模拟微重力条件下昆明小鼠早期胚胎体外发育及其G6PD基因表达

目的 研究模拟微重力条件下培养的小鼠早期胚胎体外发育与1g重力条件下体外发育的差异。方法 检测葡萄糖代谢关键酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PD）在昆明小鼠早期胚胎体外不同重力条件下培养各个时期基因的转录与表达。结果 模拟微重力培养条件下，胚胎体外发育受到明显的抑制，模拟微重力不利于小鼠胚胎的体外发育。用CZB＋10％FCS进行培养，2-细胞期培养的囊胚率为零，显著低于常规培养的23．92％；4-细胞期培养的囊胚率为18．44％，显著低于常规培养的80．12％。利用G6PD的内、外两对引物，检测昆明小鼠早期胚胎体外发育各个阶段的G6PD基因的转录与表达。从2-细胞期开始体外常规培养的胚胎，发育至4-、8-细胞胚胎、桑椹胚、囊胚及退化囊胚都有G6PD基因的转录与表达。在模拟微重力条件下，从2-细胞期开始培养的胚胎，发育至4-细胞期、桑椹期、囊胚期胚胎和退化桑椹胚皆有G6PD基因的转录和表达，而退化的2-细胞胚胎没有检测到G6PD基因的转录与表达。结论 两种培养方式之间，G6PD基因的转录与表达不存在差异，说明早期胚胎都存在磷酸戊糖途径。     

体外制备的牛胚胎移植后获得孪生犊牛

据Lu等(1987)报道,体外成熟和受精的牛卵泡卵母细胞在绵羊输卵管内培养一周后,多数胚胎发育到桑椹期和囊胚期。每头受体牛移植两枚这种胚胎,妊娠率达67％。本试验中—牛细胞胚培养到桑椹胚和囊胚的体外培养方法,使体外受精胚胎制造适于移植的牛胚的系统更方便了。在此之前,尽管用过各种培养基和培养方法作体外培养,但成绩不好。显然,胚胎在8细胞期时发育受     

牛、绵羊早期胚胎的体外分裂:利用滋养层囊泡混合细胞培养促进早期胚胎发育

虽然一些学者(Wright和Bondioli,1981)对不同类型的培养液和培养条件进行了研究,但大多数体外培养的早期胚胎(1—8细胞)发育至8—16细胞期即停止发育。对于绵羊,体外培养的单细胞期胚胎很少有发育到囊胚期的。而其他动物胚胎的体外培养都不能产生正常的卵裂,仓鼠卵在2—细胞时发育受阻,采自远系杂交的小鼠卵也     

培养液成分对胚胎体外发育的影响

牛体外受精、棱移植或转基因的早期胚胎需体外培养到桑椹胚或囊胚后才能非手术移植到受体母牛受孕。本文综述了体外培养液中能量培养基,血清、牛血清白蛋白（BSA）和聚乙烯醇（PVA）,生长因子、胞浆因子和细胞外基质分子,pH值,EDTA、NaN3和2,4-二硝基苯酚等对胚胎体外培养的影响。     

不锈钢罐孵育系统对绵羊胚胎体外发育效果的影响

实验旨在测定绵羊植入前胚胎在304不锈钢罐孵育器内的发育能力,为建立稳定的胚胎体外培养环境提供研究基础。本试验以绵羊孤雌激活胚胎和体细胞克隆重构胚作为测试样品,以不锈钢罐和MIC-101孵育器为研究对象进行比较。在不锈钢罐中培养效果同MIC-101相比,孤雌激活胚胎第7 d囊胚发育率达26.45%vs 24.84%(P>0.05);重构胚第7 d囊胚发育率达16.07%vs 16.84%(P>0.05)。结果表明,在密闭的304不锈钢罐内,气体环境和湿度水平保持稳定,符合绵羊早起胚胎体外培养所需环境。304不锈钢罐组合标准混合气体和恒温箱,是一种价格适宜、环境稳定、有效的、可供选择的早期胚胎体外培养孵育系统。     

用无蛋白质培养液培养牛卵母细胞

许多实验室通常以体外成熟、体外受精(IVM/IVF)的牛卵母细胞中获得桑椹胚及囊胚。然而,培养液中仅添加血清时,大多数胚胎在8～16细胞期或之前停止发育。用含有卵丘细胞或输卵管单层细胞的培养液培养,可以克服这种发育阻断。另一方面,输卵管细胞在无细胞培养液,典型的有TCM-199,加血清中培养24～48小时后,同输卵     

绵羊胚胎体外非协同培养成就和前景

几种家畜的合子(1细胞胚胎)常能在相对简单的培养液中培养发育至胚泡期这一事实,对于早期胚胎在输卵管环境发育的属性提出了质疑。本文综述了绵羊胚胎不用协同培养,在简单培养液中发育的一些最新成果。证据表明,胚胎对于培养液中的成分变化相对来说不甚敏感,而且合子发育至胚泡期的发育率与体内培养所获得的发育率相同甚至更高。然而体外培养也带来了一些发育异常现象,包括细胞质破碎,囊胚腔提早形成,及每个胚泡中核数目减少。体外培养5天的胚胎,移植后妊娠50天时的活力比体内培养胚胎的活力降低(分别为48.2％和59.4％,P<0.1)。同样在类似的体外培养时期,经显微操作(原核基因注射)的胚胎活力也显著地降低,初步观察还表明,体外培养与平均妊娠期延长,羔羊出生时平均体重增加。及死亡数增多间有一定关系。这些异常现象有可能是植入前胚胎体外培养导致发育缺陷所致。本文对于这些结果的意义及培养系统中加入体细胞支持培养的潜在益处也作了讨论。     

小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究

本文系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律 ,卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻 ,结果如下 :①注射hCG后 1 2～ 2 0h受精卵发育至原核期 ,42～ 48h为 2 -细胞期 ,48～ 6 0h为 4-细胞期 ,6 0～ 6 8h为 8-细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75～ 78h为桑椹胚 ,78～ 80h为致密桑椹胚 ,90～92h为早期囊胚 ,92～ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中 ;②培养液中添加激素 ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育率 ;③在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 -细胞阻断 ,其 2 -细胞胚的发育率达 1 0 0 % ,8-细胞胚的发育率达55%以上 ;牛、羊上皮细胞培养上清也能有效克服 2 -细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞的发育率显著提高 ;④以D -PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D -PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9.3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 .4%。以上研究为建立小鼠胚胎库提供了基础     

黄牛体外受精的研究

本实验主要探讨黄牛卵母细胞体外成熟、受精及其受精后胚胎的体外培养。结果表明,卵母细胞在体外培养22小时后:80％以上的卵母细胞发育至中期Ⅱ(MⅡ)阶段。当培养液中添加促卵泡素(FSH,10国际单位/毫升)和雌二醇(E_2 1微克/毫升)时,其培养成熟的卵母细胞不仅受精率提高(83%),而且受精后卵裂率显著提高(67％,P<0.01)。 输卵管细胞单层和细胞上清液不仅能有效地克服牛胚胎的8-细胞阻断,而且对胚胎的发育具有显著的促进作用,二者在培养效果上差异不显著。2—8-细胞阶段胚胎,在输卵管细胞单层、输卵管细胞上清液和对照组(TCM199+10%小牛血清)中培养5天后,分别有77％、74％和27％的早期胚胎发育到桑椹或囊胚。     

用定时电影照相术观察牛正常的解冻囊胚从透明节脱出过程

Renard、Menezo等(1976)曾以牛囊胚在体外脱出透明节的能力为标准,以测定其短期发育的潜力及培养条件是否适当。本研究是用连续定时电影照相术在体外观察牛的囊胚形成和脱出,并用同一方法对早期囊胚解冻后胚胎的行为进行了研究,以测定其在体外恢复扩展和脱出的能力。