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1.
类固醇受体辅活化子-3基因敲除小鼠的繁殖与鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:繁殖并鉴定类固醇受体辅活化子(steroid receptor coactivator,SRC) - 3基因敲除(SRC - 3-/-)小鼠.方法:通过SRC - 3-/-雄性小鼠与杂合子(SRC - 3+/-)雌鼠杂交,繁殖出SRC - 3+/-及SRC - 3-/-两种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR 法进行鉴定,并进一步提取肝、脾组织总蛋白,采用Western blot进行蛋白表型鉴定.结果:成功繁殖并准确鉴定出更多数目的SRC - 3-/-小鼠.SRC - 3+/+小鼠脾组织SRC - 3蛋白表达水平显著高于肝组织,而SRC - 3-/-小鼠的肝、脾组织均未见SRC - 3蛋白表达. 结论:雄性基因敲除小鼠与雌性杂合子杂交是获取大量SRC - 3-/-小鼠的有效途径,PCR法是其子代简单准确的鉴定方法.  相似文献   

2.
目的 研究心脏特异性骨形态形成蛋白受体IA(BMPR1 A,又名ALK3)基因敲除小鼠心肌组织中的细胞凋亡情况,探讨ALK3基因在心肌细胞凋亡过程中的作用及细胞凋亡与室间隔缺损的关系. 方法 实验分为纯合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-),杂合子小鼠(α-MHCCre+/-,ALK3 F/+)和野生型小鼠(C57)3组,每组取5只.20只雌性α-MHCCre+/-,ALK3+/-小鼠和20只雄性ALK3 F/F小鼠交配获得心脏特异性ALK3基因敲除的纯合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-)和杂合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+);雌性和雄性C57小鼠各10只交配获得子代野生型小鼠;均取13.5d胚胎.提取胎膜DNA,PCR鉴定基因型.光镜下HE染色显示心脏组织形态,透射电镜观察心肌细胞的超微结构和凋亡情况,并以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡率. 结果 光镜显示α-MHC Cre+/-,ALKS F/-小鼠存在室问隔缺损现象,α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+小鼠和C57小鼠心脏形态正常;透射电镜和TUNEL提示α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-小鼠心肌细胞凋亡现象较α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+小鼠和C57小鼠严重. 结论 ALK3基因在调控心脏发育和心肌细胞凋亡过程中起重要作用.心脏特异性ALK3基因敲除小鼠中,室间隔缺损可部分归因于心肌细胞的过度凋亡.  相似文献   

3.
目的 观察miR-143在遗传性ob/ob肥胖小鼠与正常对照组C57/BL6J小鼠肝脏、骨骼肌中的差异表达,初步探讨miR-143在肥胖及相关脂代谢紊乱发生中的作用.方法 选择16周龄的ob/ob小鼠与C57/BL6J小鼠各12只,采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测两组小鼠肝脏、骨骼肌中miR-143的表达水平.结果 miR - 143在ob/ob小鼠肝脏中的表达水平明显高于C57/BL6J小鼠(P<0.05),但在骨骼肌中的表达水平两组无显著性差异(P>0.05).结论 miR-143可能参与了ob/ob小鼠肝脏脂质代谢紊乱的发生.  相似文献   

4.
目的 探讨表达神经纤毛蛋白质1(Nrp1)的T细胞(Nrp~+ T细胞)对体内外反应性淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响.方法采用流式细胞术分选近交系C57BL/6j小鼠脾脏中的Nrp1~+ T细胞作为调节细胞,在刀豆蛋白A(Co-hA)的刺激下与标记了羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)的C57BL/6j小鼠脾脏单个核细胞等比例共培养5d,对比观察反应细胞的增殖情况.采用流式细胞术分选C57BL/6j小鼠脾脏的Nrp1~+T细胞、CD4~+ CD25~+ Treg细胞和CD4~+ CD25~- T细胞各1×10~6个,分别经尾静脉注入到以Balb/C小鼠作为供者,以C57BL/6j小鼠作为受者行皮肤移植的小鼠体内,另外建立供、受体均为C57BL/6j小鼠的同品系对照组(注入等体积的RPMI 1640培养基).对比观察各组移植皮肤的存活情况.结果 加入Nrp1~+ T细胞的实验组增殖指数为50.92%±2.30%,明显低于未加入调节性T细胞的对照组(90.31%±1.83%,P=0.0169).实验组移植皮肤存活时间注入Nrp1~+ T细胞者为20.66±1.1ld,注入Nrp1~- T细胞者为13.20±0.76d,注入CD4~+ CD25~+ Treg者为17.67±1.0d,均明显高于对照组(9.70±1.23d,P<0.01).结论 Nrp1作为一种新型的T细胞表面分子,在淋巴细胞增殖体系中起着重要作用;与注入CD4~+ CD25~+ Treg相比,注入Nrp1~+ T细胞可明显延长小鼠移植皮肤的存活时间.  相似文献   

5.
目的建立微卫星DNA标记技术检测基因突变的方法。方法对C57BL/6J近交系小鼠腹腔注射乙基亚硝基脲(ENU)溶液后,分析其外观和精子畸形状况,应用41个在不同品系小鼠间表现多态性的微卫星位点,通过STR扫描技术检测ENU诱变后不同组织的微卫星多态性。结果个别ENU诱变小鼠背部出现白斑;精子畸形率在80%左右,显著高于对照组(P〈0.01);有4个微卫星位点在不同组织表现出多态性。结论微卫星DNA标记技术可检测到基因突变,初步建立了微卫星DNA检测ENU致C57BL/6J小鼠基因突变的方法。  相似文献   

6.
目的探讨真核细胞起始因子(e IF6)基因对M2型巨噬细胞纤维化相关因子分泌及重要蛋白酶表达的影响。方法采用e IF6野生型(e IF6+/+)及敲降型(e IF6+/-)C57BL/6雄性小鼠,腹腔灌洗获得巨噬细胞,通过白介素4(IL-4)诱导形成M2型巨噬细胞。应用基因芯片比较e IF6+/+与e IF6+/-小鼠M2型巨噬细胞基因表达谱的差异,并通过RT-PCR及ELISA对芯片检测结果进行验证。结果基因芯片检测结果显示,与e IF6+/-小鼠组比,e IF6+/+小鼠M2型巨噬细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)基因表达显著下调,基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因表达显著上调。RT-PCR及ELISA检测结果显示,与e IF6+/-小鼠相比,e IF6+/+小鼠M2型巨噬细胞中VEGF、TIMP-2 m RNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05),而MMP-2 m RNA及蛋白表达水平明显上升(P<0.05)。结论 e IF6可能通过抑制VEGF生成而防止血管及肉芽组织过度增生,同时通过调节MMP-2/TIMP-2的比例以平衡细胞外基质的降解与沉积,从而缓解瘢痕形成。  相似文献   

7.
目的:观察miR-143在具有肥胖及糖尿病表型的ob/ob小鼠与正常对照组C57/BL6J小鼠肠系膜脂肪、肝脏组织及骨骼肌中的表达情况。方法:选择16周龄的ob/ob小鼠与C57/BL6J小鼠各12只,采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(qRT-PCR)检测两组小鼠肠系膜脂肪、肝脏组织及骨骼肌的表达水平。结果:miR-143在ob/ob小鼠肠系膜脂肪、肝脏组织中表达上调(P<0.05),而在骨骼肌中无显著性差异(P>0.05);ob/ob小鼠肠系膜脂肪miR-143的表达与HOMA-IR呈正相关。结论:miR-143可能参与了ob/ob小鼠肥胖及胰岛素抵抗(IR)的发生。  相似文献   

8.
目的 探讨细胞核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在1型糖尿病模型INS2AKTTA小鼠颈动脉中的表达及意义.方法 取INS2AKTTA雄性小鼠和同窝出生的野生型C57BL/6雄性小鼠各10只,分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组.在两组小鼠第16周龄时麻醉处死,处死前检测空腹血糖、测量体重.处...  相似文献   

9.
目的:探讨6周高强度间歇运动(high-intensity interval training,HIIT)对小鼠体成分和骨骼肌自噬活性的影响,以及AMPKα2在运动影响小鼠体成分和运动调节小鼠骨骼肌自噬过程中的作用。方法:4周龄C57BL/6雄性小鼠36只,其中包括AMPKα2+/+,AMPKα2+/-,AMPKα2-/-三种基因型小鼠各12只,各基因型小鼠随机分为安静对照组(Control组)和高强度间歇运动组(HIIT组),每组6只。各运动组小鼠给予6周HIIT干预,HIIT包括2分钟85%VO2max强度与1分钟50%VO2max强度的跑台运动交替进行12个循环,1次/天,5次/周。6周运动干预结束后对各组小鼠分别进行体重、身体质量指数(BMI)、总体液量、体脂含量等身体指标测定;采用Western blot法检测小鼠骨骼肌组织AMPKα2,p AMPK-Thr172,LC3Ⅱ/Ⅰ,Beclin1及p62蛋白表达水平。结果:(1)与Control组同基因型小鼠相比,运动开始前各组小鼠体重无显著差异,运动结束后,HIIT组小鼠体重较安静对照组小鼠显著降低(P<0.05);HIIT组中,AMPKα2+/+和AMPKα2+/-小鼠的BMI水平显著下降(P<0.01或P<0.05),而AMPKα2-/-小鼠与Control组相比BMI水平无明显变化(P>0.05);三种基因型小鼠总体液量均无显著性差异(P>0.05);HIIT组小鼠中,AMPKα2+/+和AMPKα2+/-小鼠体脂含量下降显著(P<0.05),AMPKα2-/-小鼠体脂含量下降但无显著性(P>0.05);(2)HIIT干预后AMPK+/+和AMPK+/-小鼠骨骼肌组织较安静对照组p AMPK-Thr172,LC3Ⅱ/Ⅰ,Beclin1表达上调而p62表达下降(P<0.05),而在AMPK-/-小鼠上述蛋白表达变化无显著性。结论:HIIT通过提高骨骼肌组织AMPKα2磷酸化水平有效降低小鼠体重、体脂含量和BMI等健康指标,并显著增加骨骼肌细胞自噬活性。  相似文献   

10.
目的比较C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠放射性肺损伤进程的异同。方法采用20Gy^60Coγ射线照射C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠复制动物模型,应用天狼猩红染色、羟脯氨酸含量测定、免疫组织化学等方法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原分布、羟脯氨酸含量、纤连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和α-平滑肌肌动蛋白(α—SMA)表达变化。结果照后1、3和6个月C57BL/6J小鼠肺组织病变经历炎症期、增生期和纤维化期,胶原沉积增多,照后1和3个月FN表达明显高于对照组(P〈0.01),照后6个月逐渐减少,LN表达在照后呈渐进性增加,α-SMA表达比C3H/HeN强;照后1、3和6个月C3H/HeN小鼠肺组织主要表现为间质性炎症改变,FN表达于照后1、3和6个月与对照组相比无明显变化,LN表达于照后1和3个月明显增强,6个月逐渐减少。结论20Gy^60Coγ射线照射成功复制易,抗放射性肺纤维化动物模型。C57BL/6J小鼠发生放射性肺纤维化,以胶原沉积增多出现早且显著为特征;C3H/HeN小鼠未发生放射性肺纤维化。  相似文献   

11.
Purpose: A French multicenter registry was set up to confirm the safety and efficacy of large calibrated tris-acryl gelatin microspheres for embolization of symptomatic fibroids.Methods: Technical recommendations included embolization using large microspheres (>500 µm) with no secondary embolization agent. Postprocedural pain, clinical improvement and adverse events were prospectively evaluated during a follow-up period of at least 6 months.Results: Eighty-five women complaining of fibroid-related symptoms entered the study. In seven women, a secondary embolization agent was used in addition to microspheres. Complete resolution of menorrhagia was achieved in 84% of women at 24 months and significant uterine and fibroid volume reductions were noted after 6 months (37% and 73%, respectively). Three women experienced definitive amenorrhea (4%) and two women required hysteroscopic resection of a fibroid. Eight women were treated by hysterectomy because of treatment failure. In seven of these women, treatment failure was explained by an additional cause of symptoms including diffuse adenomyosis, endometrial hyperplasia or ovarian artery supply to the fibroids.Conclusion: Limited uterine artery embolization using large microspheres has good clinical success rate with low postprocedural pain and complications. Women can expect excellent midterm results with a high level of symptom control and significant fibroid volume reduction. Confidence in the end-point recommended here may require the experience of several cases.1;*See Appendix for list of members. Correspondene to: J.-P. Pelage; email:  相似文献   

12.

Purpose

To investigate the feasibility and diagnostic value of a whole prostate qualitative approach to combined magnetic resonance imaging and spectroscopy (MRI + MRS) in the detection of prostate cancer in patients with elevated PSA.

Materials and methods

Three hundred and fifty six subjects (mean serum PSA 11.47 ng/ml, range 0.40-133 ng/ml) were examined with fast-T2-weighted images (MRI) and 3D-magnetic resonance spectroscopy (MRS). Both modalities were qualitatively analyzed on a whole prostate basis by a single radiologist using a 4-point diagnostic scale. Prostate cancer was histopathologically proven in 220 patients and non-evidence of cancer was determined after at least 12 months clinical follow-up in 136 subjects.

Results

Receiver operating curve analysis revealed a significantly better diagnostic performance of MRI + MRS (Az = 0.857) than MRI alone (Az = 0.801) and MRS alone (Az = 0.810). The sensitivity, specificity and accuracy of MRI + MRS for detection of prostate cancer were 72.3%, 92.6%, and 80.1%, respectively.

Conclusions

Spectral evaluation with a whole prostate qualitative approach is feasible in routine clinical practice. The combination of MRI and MRS yields superior diagnostic results than either modality alone.  相似文献   

13.
目的建立准确、灵敏、可靠的LC/MS/MS方法,定量检测家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物浓度,并用于家兔给予咪哒酚衍生物滴眼后血浆及房水中药代动力学研究。方法血浆及房水样品经蛋白沉淀前处理,内标选用Amms,液相色谱柱为TOSOHTSKgel Amide,流动相为含0.1%甲酸的甲醇∶水(80∶20,体积比),仪器选用Finni-gan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪,采用电喷雾离子化电离源(ESI),选择反应离子监测(SRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 381→308(咪哒酚衍生物)和m/z 285→138(Amms)。结果在本实验条件下,咪哒酚衍生物与内标Amms分离良好,保留时间分别为1.48和1.55 min,血浆和房水中药物浓度分别在5~2000和10~10 000 ng/ml范围内线性关系良好,相关系数(r2)分别为0.9971和0.9999,定量下限分别为5和10 ng/ml,回收率均大于80%,日内、日间精密度均小于15%(n=5)。结论该方法快速、准确、灵敏度高,专属性好,可用于咪哒酚衍生物在家兔体内的药物代谢动力学研究。  相似文献   

14.
目的:研究五酯胶囊对茚地那韦(IDV)药代动力学影响.方法:实验动物为比格犬,本实验采用自身对照法,6只比格犬按单给硫酸茚地那韦片和连续给五酯胶囊后再给硫酸茚地那韦片分为单用茚地那韦组和五酯胶囊组.给药(硫酸茚地那韦片)前禁食不禁水12 h,给药前及给药后按设定时间点于比格犬前肢静脉采血800 μl,分离出血浆,血浆经乙酸乙酯萃取2次,合并上清,氮气吹干,复溶,使用LC/MS/MS法检测比格犬血浆中茚地那韦浓度.结果:IDV在比格犬血浆中的药物浓度线性范围为20~10 000 μg/L,线性关系良好(r>0.99),最低定量限为20 μg/L.比较单用硫酸茚地那韦片和连续给药五酯胶囊后给药硫酸茚地那韦片的药代动力学参数,连续给药五酯胶囊7 d后给药茚地那韦片时茚地那韦的AUC0-t及Cmax均有显著性提高.结论:本方法灵敏度高,特异性好,适用于血浆样品检测.结果显示五酯胶囊会影响茚地那韦在比格犬体内药代动力学过程.  相似文献   

15.
目的:研究3′-二甲氨基亚甲基葛根素在大鼠体内的组织分布与排泄情况,了解药物在动物体内变化过程,为临床试验提供药代依据.方法:大鼠尾静脉注射3′-二甲氨基亚甲基葛根素(生理盐水溶液,剂量50 mg/kg),采用机械匀浆处理组织.排泄实验是在不同时间点收集全部粪、尿、胆汁样品.用经验证的LC/MS/MS联用测定各组织、粪、尿、胆汁中3′-二甲氨基亚甲基葛根素的含量.结果:大鼠给药后,12 d内从粪中收集到给药剂量的(13.6±2.8)%,尿液中回收到(65.4±11.5)%,粪尿合计(79.0±14.3)%,5 d内胆汁中收集到(14.8±4.4)%.3′-二甲氨基亚甲基葛根素在大鼠各组织中均检测到,大肠内容物、小肠内容物和肝中浓度较高.结论:3′-二甲氨基亚甲基葛根素广泛分布于大鼠各组织中,主要以原形经尿和粪便排泄.  相似文献   

16.
LC/MS/MS法测定法罗培南血尿药浓度及药动学研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究法罗培南钠片在健康人体内的药动学及饮食对药动学的影响。方法药动学试验:采用低、中、高三个剂量组的平行试验设计;饮食对人体药动学的影响试验:采用自身对照的双周期交叉试验设计。血浆样品处理后采用LC/MS/MS测定血药浓度。结果空腹po100、200、400mg法罗培南片,主要药动学参数AUC和Cmax随剂量呈线性相关。进餐后影响药物的Tmax和Cmax,其他药动学参数无变化。给予法罗培南在100、200、400mg的剂量,受试者尿中0~24h原形药物的平均累积排泄率分别为4.52%、7.73%和3.28%。结论LC/MS/MS方法操作简单,结果准确,专属性强,灵敏度高,适用于法罗培南人体药动学研究。  相似文献   

17.
阿德福韦酯胶囊在健康人体的药代动力学研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 研究阿德福韦酯胶囊在健康人体的药代动力学,计算其参数,为临床给药剂量和间隔时间提供参考依据.方法 8名健康志愿者自身对照,分别单次及多次口服阿德福韦酯胶囊,采用色谱-质谱联用(LC/MS/MS)方法测定其活性代谢产物阿德福韦的血药浓度.结果 单次及多次口服阿德福韦酯胶囊后,其活性代谢产物阿德福韦的Cmax分别为(27.560±10.836)、(27.271±6.695)μg · L-1;Tmax分别为(1.75±0.267)、(1.688±0.259)h;AUC(0-24)分别为(161.798±51.324)、(173.486±38.359)μg · h · L-1;AUC0-∞分别为(170.582±57.067)、(185.713±45.058)μg · h · L-1;吸收速率常数Ka分别为(1.019±0.252)、(1.081±0.377)h-1;消除速率常数K10分别为(0.324±0.105)、(0.307±0.127)h-1;消除半衰期t1/2β分别为(7.117±1.345)、(8.044±2.489)h;清除率CL/F分别为(61.994±18.628)、(55.854±11.794)L · h-1;表观分布容积V/F分别为(218.998±122.07)、(203.457±76.736)L.单次给药和多次给药的主要药代动力学参数经配对t检验均无统计学差异.试验过程中未发现任何不良反应.结论 单次和多次口服阿德福韦酯胶囊后各药动学参数无显著性差异,提示该给药方式连续多次给药时未出现蓄积现象.  相似文献   

18.
目的:建立LC/MS/MS测定比格犬血浆中丁螺环酮的方法,并应用于其缓释制剂药代动力学研究。方法:血浆样品经液-液萃取,内标选用曲马多,色谱柱采用Zorbax SB-C18柱(2.1mm×100mm,3.5μm);流动相为甲醇-水-甲酸(40:60:0.1),流速0.2ml/min;用美国Finnigan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪器,配有电喷雾离子化电离源(ESI),正离子检测模式,扫描方式为选择反应监测(SRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z 386.2→121.97(丁螺环酮)和m/z 264.3→58.0(内标,曲马多)。结果:测定丁螺环酮的线性范围为0.025→7.5μg/L,相关系数为0.99893,提取回收率为72.2%,方法回收率为99.1%,日内日间精密度均小于10.7%,血浆中丁螺环酮的最低定量下限为0.025μg/L。结论:该方法简便、快速、准确,灵敏度高,专一性好,成功应用于丁螺环酮缓释制刺的药代动力学研究。  相似文献   

19.
11-羟基-△9-四氢大麻酚二酸的定量分析   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的:用GC/MS/MS法测定尿中11-羟基-△9-四氢大麻酚二酸(THC-COOH)的浓度.滥用大麻后,主要起精神兴奋作用的是11-羟基-△9-四氢大麻酚二酸(THC-COOH),它也是鉴定滥用大麻的依据.GC/MS/MS提供了灵敏可靠的鉴定技术.方法:本方法在进入GC/MS/MS分析之前, 尿样要进行碱水解(10%KOH甲醇溶液), 以破坏其结合型,然后用浓盐酸HCl和冰醋酸HAc调至pH=3.5左右, 加2ml正庚烷提取3次, 在N2下吹干.残渣衍生化后, 进1μl于GC/MS/MS进行分析.结果: 本方法能灵敏地检测到15ng/ml左右的THC-COOH.结论: 满足IOC检测要求.  相似文献   

20.
目的探讨重度前列腺增生症(BPH)的治疗方法。 方法应用经尿道前列腺电气化术(TUVP)加经尿道前列腺电切术(TURP)联合治疗重度BPH患者60例。 结果 手术时间50-90 min,平均75 min,平均切除前列腺组织70 g。仅发生1例先兆电切综合症。术后平均6天拔管,自行排尿通畅。IPSS由术前平均25.5分下降至术后平均7.0分(P<0.001),最大尿流率(Qmax)由术前平均5.2 ml/s升至术后平均18.9 ml/s(P<0.001),剩余尿量由术前平均100 ml降至术后平均15 ml。术后继发性出血1例,一过性尿失禁1例。 结论TUVP加TURP联合治疗BPH兼有两者优点,是彻底治疗重度BPH安全、有效的方法。  相似文献   

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