卵母细胞体外成熟体外受精生产犊牛

建立的牛体外受精（ＩＶＦ）程序包括屠宰厂采集卵巢、卵母细胞外培养成熟（ＩＶＭ０、精子体外获能受精和受精卵体外发育成胚泡。将卵巢置于２３℃－３８℃的生理盐水中运输，能使大量的卵母细胞在体外成熟和体外受精后发育成胚泡。卵泡切开后，用一匙子将其内容物刮出以采集多个卵母细胞，而不用１８号针头抽取，这样每对卵可采集卵母细胞１３．４个，用针头抽取每对卵巢仅能采集７．２个。体外成熟和体外受精后，卵裂能力取决于卵     

卵母细胞体外培养成熟研究概况

本文对近20多年来的哺乳动物卵巢卵母细胞的体外成熟培养技术研究及其应用进展情况进行了简要的概述。     

卵母细胞体外成熟能力及其影响因素

当前,虽然鲜胚移植已推广应用,鲜胚分割、冻胚分割和体外受精等技术正在发展,然而胚胎和成熟卵的来源却是一个严重问题。多年来,人们热衷于超排技术,期望用外源激素处理供体,以获得大量可以利用的胚胎或成熟卵,可是超排卵的质量低下,得到的卵子数也很有限,远远不能满足科研和生产的需要。近年来,越来越多的科学家致力于研究淘汰母畜或屠宰母畜的卵巢卵母细胞的体外成熟,以探索胚胎移植和胚胎生物工程所需的大量胚胎来源,使卵母细胞体外成熟的研究受到前所未有的重视。     

牛卵母细胞体外成熟的研究

为了给牛细胞核移植提供卵母细胞 ,1 997年 3月至 2 0 0 1年 3月共进行了 86次卵母细胞体外成熟的实验研究 ,核成熟率 (以出现第一极体为成熟标志 )为 6 5.1 2 %( 2 332 /372 1 )。其中 ,基础培养液为TCM1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸钠 + 1 0mMHepes+ 8%NCS + 1 0 μg/mlFSH + 1 0 μg/mlLH + 1 μg/mlE2 (培养液 1 )组进行 6 8批次实验 ,核成熟率为 57.97% ( 1 6 80 /2 898)。基础培养液为TCM 1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸+ 8%的发情牛血清 (为 4头发情牛的混合血清 ,培养液 2 )组进行 1 8次实验 ,核成熟率为 79.2 2 % ( 6 52 /82 3)。培养液 1组与培养液 2组之间卵母细胞成熟率差异显著(P <0 .0 5)。培养液 2的组中有 9次添加了 40IU/ml的庆大霉素 ,其核成熟率为72 .1 5% ( 342 /4 74) ;另 9次未添加庆大霉素 ,其核成熟率为 88.83% ( 31 0 /349) ,两者之间无明显差异 (P >0 .0 5)。此外本研究对以去核卵母细胞激活后分裂率作为卵母细胞质成熟的标准作了初步的探讨     

卵母细胞的体外成熟培养研究进展

卵母细胞体外成熟培养研究主要集中在提高体外成熟卵母细胞支持胚胎发育的能力上。本文主要从基础培养液的改进、性腺激素的添加、生长激素和生长因子所起的作用、延迟成熟培养以及其它物质添加方面进行分析，介绍了目前卵母细胞体外成熟培养的进展情况。     

牛卵泡液对牛卵母细胞体外成熟的抑制作用

为了研究牛卵泡液对牛卵母细胞的抑制特性，收集了不同的发情期的小卵泡、中等卵 以及大卵泡的卵泡液，将卵泡液和从小卵泡吸取的胚泡期卵母细胞一起培养。２４小时后鉴定是否核成熟。牛卵泡液能够抑制牛卵母细胞的自发成熟。将卵母细胞培养液中的卵泡液去除后，抑制可以逆转。     

牛卵泡对卵母细胞的体外成熟及体外受精的影响

利用屠宰母牛卵巢，对来自不同大小和不同状态卵泡的卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）进行了系列研究。结果表明，当卵泡直径小于２ｍｍ时，卵母细胞的成熟率、卵裂率、囊胚率显著低于直径为２～５ｍｍ组和直径大于６ｍｍ组（６６．７％比８５．７％和８４．２％；６２．４％比８２．７％和７９．２％；１５．１％比２８．０％和２５．０％ Ｐ〈０．０５）。来自腔前卵泡的卵母细胞也可以成熟、受精、卵裂，甚至发     

异种卵泡液对牛卵母细胞体外成熟率的影响

本研究探讨了异种卵泡液对牛卵母细胞体外成熟率的影响。结果表明,在培养基中添加适当浓度的山羊、绵羊、骆驼卵泡液代替血清,牛卵母细胞的成熟率(67．9％、68．5％、65．3％)与血清对照组(72．0％)无显著差异(P＞0．05);在添加山羊、绵羊、骆驼卵泡液的基础上补充激素,卵母细胞的成熟率(70．8％、72．9％、69．7％)也未见明显提高(P＞0．05)。     

牛卵母细胞体外成熟减数分裂进程及核型变化的研究

为了更加深入了解牛卵母细胞体外成熟减数分裂及其伴随该进程中核型的变化,实验采用常规的牛卵母细胞体外成熟方法及核型染色方法对成熟过程中减数分裂恢复情况及其对应的核型进行了研究。结果表明:牛卵母细胞体外成熟8 h减数分裂抑制恢复率达45.26%,成熟12 h时绝大部分卵母细胞(81.63%)已经恢复了减数分裂抑制状态,正常成熟24 h后GVBD率达91.67%。说明在对牛卵母细胞进行体外成熟过程中卵母细胞可以按照正常的减数分裂进程发育至受精前阶段,经染色后可以较为清楚识别减数分裂各时期细胞核核型形态及其变化规律,为研究牛卵母细胞体外成熟减数分裂抑制恢复的分子机制探讨及体外成熟效率的提高提供了参考价值。     

生物活性因子对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外发育的影响

免疫活性肽 (ICP)和表皮生长因子 (EGF)是两种生物活性因子 ,ICP对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养的影响还未见报道。本实验将ICP ( 1 0、1 0 0、50 0ng/ml)和EGF ( 2 .5、2 5、50ng/ml)加入成熟液和培养液中 ,对照组中不含生物活性因子。结果表明ICP在浓度为 50 0ng/ml时对卵母细胞成熟有抑制作用 ,对胚胎发育无明显作用 ;EGF( 50ng/ml)对牛卵母细胞成熟和胚胎发育均有促进作用     

牛卵母细胞体外成熟,体外受精培养的胚胎玻璃化冷冻试验

牛卵母细胞体外成熟、受精后，培养７天，选择一级桑椹胚、囊胚和膨胀囊胚进行玻璃化冷冻试验胚解冻增大 Ｍｅｎｅｚｏ－Ｂ２液中根据胚胎复原率和孵充率说明：（１）一步平衡玻璃化冷冻的胚胎在ＦＥＳ液中平衡１分钟较适宜；（２）胚胎玻璃化 的效果与胚胎发育阶段密切相关；（３）添加ＢＯＥＣ细胞Ｍdisplay status     

卵泡液和促卵泡素对卵母细胞体外成熟的影响

本试验研究了卵泡液和促卵泡素对促进卵母细胞体外成熟的影响。试验结果表明，发情期LH排卵前高峰8小时和20小时的卵泡液对卵母细胞体外成熟有明显的促进作用（P＜0．01），但8小时和20小时卵泡液对卵母细胞的促成熟作用差异不明显（P＜0．05），使用卵泡液和促卵泡素共同处理时，促卵泡素能增强卵泡液的作用效果，单独使用促卵泡素时，没有卵泡液所具有促进卵母细胞体外成熟作用的功效。     

水牛与黄牛卵母细胞的回收及体外成熟、体外受精比较

本试验平均从每头水牛的卵巢上获得 4.58个卵母细胞 ,其中可用卵为 2 .97个 ,占 6 5% ,卵母细胞在数量和质量上都低于黄牛 ,差异极显著 (P <0 .0 1 )。黄牛卵母细胞体外成熟、受精率显著高于水牛 (P <0 .0 5)     

卵母细胞体外成熟时问对绵羊核移植胚胎发育的影响

将体外成熟的卵母细胞按不同成熟时间进行分组处理，并进行克隆胚胎的生产，实验表明，成熟时间为20-22h并在23-25h完成融合及激活的重构胚其融合率，卵裂率及体外培养到达桑葚胚／囊胚的比例分别为76．2％(176／231)、51．1％(118／231)和21．7％(23／106)，而成熟时间为16～18h及24h以上的卵母细胞进行核移植胚胎的生产，其重构胚各种相应的数据分别为44．9％(84／187)、20．9％(39／187)、10．8％(4／37)以及71．1％(263／367)、48．0％(176／367)、和8．5％(14／176)。     

原花青素对帕金森模型小鼠黑质氧化应激损伤影响

目的探讨原花青素对帕金森(PD)模型小鼠黑质氧化应激损伤的影响。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为PD模型组、原花青素组、正常组、溶剂对照组,每组各10只。其中,PD模型组小鼠皮下注射30 mg/kg 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),连续注射5 d;原花青素组小鼠皮下注射30 mg/kg MPTP,连续注射5 d,并在造模同时进行400 mg/kg原花青素灌胃,连续4周;正常组小鼠不进行任何处理;溶剂对照组小鼠同体积皮下注射生理盐水,并同体积去离子水灌胃。利用牵引试验检测各组小鼠的抓握能力,利用比色法检测各组小鼠黑质内丙二酮(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH-PX)水平。结果 MPTP腹腔注射成功制备了PD模型,原花青素可以显著改善PD模型小鼠的抓握功能,并抑制PD小鼠黑质内的MDA含量增多、SOD活性及GSH-PX水平减少。结论原花青素可以减少PD小鼠黑质内的氧化应激损伤,从而发挥对PD的治疗作用。     

围生期双酚A暴露对断乳期雄性子代脑芳香化酶表达的影响

目的：研究围生期双酚A暴露对断乳期雄性子代大鼠脑中芳香化酶P450（P450arom）表达的影响，探索双酚A影响脑发育的机制。方法：对母鼠从妊娠第11d直至产后断乳期（即出生后第21d，postnatal day 21，PND21）给予双酚A（Bisphenot A，BPA）2，20，100mg／kg。各组在断乳期PND21取雄性子代大鼠断头处死，迅速取脑组织进行免疫组织化学染色检测P450arom表达。结果：免疫组织化学染色结果显示，P450arom在大鼠海马和大脑皮层都有表达；对结果进行灰度值分析显示，高剂量组和中剂量组雄性子代大鼠断乳期P450arom在海马CA3区表达的灰度值分别为143．43和130．76，与对照组179．4612比较，有统计学意义；高剂量组雄性子代大脑皮层P450arom的灰度值为185．21，与对照组196．88比较，有统计学意义。结论：围生期暴露于BPA可使断乳期雄性子代脑中P450arom蛋白表达增加，这可能是影响发育机制的途径之一。     

山羊卵母细胞体外培养与去核时间的研究

本试验通过对山羊卵母细胞的体外培养,摸索卵母细胞的成熟时间;不同培养时间染色体所处的位置以及国产LH在培养液中的最佳用量。