Lovastatin对HL-60细胞凋亡及超微结构的影响

目的：探讨洛伐他汀(Lovastatin，LDV)对HL-60细胞凋亡的影响并观察细胞超微结构变化。方法：以4、8、16μmol／L LOV处理HL-60细胞1～3d后，经DNA梯形带检测、DNA片段化百分率检测以及透射电镜等技术方法，观察细胞凋亡效应的发生。结果：LOV处理HL-60细胞后，有凋亡特征性的DNA梯形带出现；DNA片段化百分率增高；透射电镜下，HL-60细胞呈现凋亡性变。结论：LOV能诱导HL-60细胞凋亡并使细胞超微结构发生凋亡性变。     

Lovastatin对人粒系白血病细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察洛伐他汀(lovastatin,LOV)对体外培养的人粒系白血病细胞株HL-60增殖和细胞周期的影响.方法:采用生长曲线测定、MTT检测、流式细胞仪分析等实验技术.结果:LOV对HL-60细胞有增殖抑制作用,能使细胞周期阻滞于G0/G1期,该作用呈剂量-效应和时间依赖关系.结论:LOV能抑制HL-60细胞的增殖,同时影响该细胞的细胞周期进程.     

重组腺病毒介导反义c-myc诱导HL-60细胞粒系分化的作用

目的：研究重组反义c-myc腺病毒（Ad-AS-c-myc）诱导人急性早幼粒HL-60细胞系粒系分化及作用分子机制。方法：采用重组腺病毒Lac-Z（Ad-LacZ）及Ad-As-c-myc联合硫酸鱼精蛋白转染HL-60细胞，X-gal染色判断转染效率。采用形态学、RT-PCR、流式细胞仪、四唑氮蓝（NBT）还原试验、非特异酯酶染色等方法进行研究。结果：Ad-AS-c-myc能抑制HL-60细胞C-myc基因在转录水平的表达。被转染HL-60细胞在形态上趋向成熟粒细胞，Ad-AS-c-myc使HL-60细胞周期G0／G1阻滞，过氧化物酶、非特异性酯酶活性增强。结论：Ad-AS-c-myc对HL-60细胞具有诱导粒系分化作用。其生物学作用与HL-60细胞c-myc的表达受抑、HL-60细胞出现一些成熟粒细胞的生理功能有关。     

P21蛋白和生存素在美伐他汀诱导人非小细胞肺癌凋亡中的作用

目的 研究P21蛋白和生存素（survivin）在美伐他汀诱导非小细胞肺癌（NSCLC）细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法 应用MTT法检测美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的抑制作用，应用流式细胞仪、透射电镜研究美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用，应用流式细胞仪和RT-PCR检测P21蛋白、P21mRNA、生存素mRNA的表达。结果 MTT试验表明美伐他汀对A549、NCI-H520增殖有明显的抑制作用；流式细胞仪检测显示美伐他汀诱导A549、NCI-H520细胞G0／G1期阻滞；Annexin V结果证实美伐他汀可诱导A549、NCI-H520细胞凋亡，而且凋亡率随剂量的增加而增加。美伐他汀对A549、NCI-H520细胞P21mRNA及P21总蛋白的表达无影响，但可使P21胞膜蛋白的表达下降。美伐他汀作用后生存素mRNA表达下降。加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用。结论 美伐他汀通过甲羟戊酸途径诱导NSCLC G0／G1期阻滞，抑制增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能与抑制P21蛋白异戊二烯化和下调生存素mRNA表达有关。     

白英水提物诱导人卵巢癌A2780细胞bcl-2基因表达的影响

目的：观察白英水提物诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,初步探讨其分子机制。方法：常规方法制备白英水提物,体外培养人卵巢癌A2780细胞,MTT法提示其有较强的体外抑制A2780细胞作用。采用半定量RT—PCR法检测凋亡相关基因bcl-2表达。实验组设白英水提物12．5、25．0、50．0mg／ml 3种浓度,以顺铂（25．0μg／ml）为阳性对照组。结果：白英水提物对A2780细胞增殖有抑制作用,且呈明显的量效关系,半定量RT—PCR法检测显示bcl-2 mRNA表达下调,诱导其发生凋亡。结论：白英水提物对A2780细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导A2780细胞凋亡的分子机制可能与下调bcl-2基因表达有关。     

白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制

目的探讨白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其分子机制。方法应用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、细胞周期分布：免疫组化法检测Survivin及Caspase-3的表达。结果白藜芦醇能明显抑制Hela细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。经白藜芦醇处理Hela细胞后,FCM分析发现各实验组S期细胞比例增高,G2／M期细胞比例减少,凋亡率明显高于对照组,并呈剂量依赖性（P〈0．01）;各实验组Heal细胞Survivin的表达均低于对照组,而Caspase-3的表达均高于对照组（P〈0．01）。结论白藜芦醇能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制Survivin的表达、上调Caspase-3的表达有关。     

60Coγ射线对大鼠星形胶质瘤细胞增殖抑制作用的机理研究

目的 研究^60Coγ射线对大鼠星形胶质瘤细胞的增殖抑制作用的机制。方法 ^60Coγ射线单次照射，分为对照组、4、16和64Gy组。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长曲线。照射后48h采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布，免疫组化法检测P53及P21蛋白的表达。结果 16和64G主y组C6细胞出现明显的增殖抑制。随着吸收剂量的增大，凋亡比例显著增加（P〈0．01），G0／G1期的细胞比例增加，S期的细胞比例降低。野生型p53与p21随着照射剂量增加，表达增强。P53与P21蛋白表达强度呈正相关，相关系数斜率为0．889。结论 γ射线对大鼠星形胶质瘤细胞系C6细胞的增殖抑制通过诱导细胞凋亡和G1期阻滞实现，G1期阻滞的分子调控通路可能为p53-p21通路。     

雷公藤甲素及地塞米松对哮喘豚鼠体外嗜酸细胞凋亡与Fas mRNA表达的影响

目的：观察雷公藤甲素及地塞米松在体外对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中不同密度嗜酸细胞（Eos）凋亡及Fas mRNA表达的影响，探讨其促进哮喘Eos凋亡的机制。方法：卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型48h后行支气管肺泡灌洗，分离不同密度Eos。雷公藤甲素（TP）（10^-7～10^-4mot／L）或地塞米松（DM）（10^-10～10^-5mot／L）干预24h，原位杂交检测Eos的Fas mRNA表达。TUNEL法检测细胞凋亡。结果：TP或DM干预24h，Eos凋亡增加，Fas mRNA表达增强，并且呈剂量依赖性。Fas mRNA的表达与Eos凋亡呈正相关。结论：TP及DM可提高Fas mRNA表达，促进Eos凋亡。Fas可能是TP及DM调节Eos凋亡的通路之一。     

地高辛对人B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制的研究

目的通过观察强心甾类药物地高辛对人B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响,研究其可能的分子机制。方法体外培养Raji细胞,实验组细胞培养基中加入二甲基亚砜溶解的地高辛,分别以不同浓度地高辛对其进行干预;对照组细胞培养基中加入与实验组等体积的二甲基亚砜。通过四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测其对细胞周期的影响及细胞凋亡情况,反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分析细胞内Survivin、Caspase-3 mRNA的变化。结果地高辛体外对Raji细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),在一定范围内与时间、剂量呈依赖关系。实验组地高辛作用于Raji细胞48 h后,与对照组相比,G0/G1期细胞数减少,G2/M期细胞数增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组出现明显的凋亡峰,对照组未见凋亡峰,或仅有低平的凋亡峰。与对照组相比,Raji细胞中Survivin mRNA的表达减少,Caspase-3 mRNA的表达增加(P<0.05),并与剂量呈依赖关系。结论地高辛对Raji细胞具有抑制增殖及诱导凋亡的作用,通过阻滞细胞于G2/M期,抑制Raji细胞的增殖,通过下调Survivin的表达进而激活Caspase-3诱导其凋亡,此可能为地高辛抗肿瘤作用的机制之一。     

胸腺肽致HL-60细胞DNA损伤的初步研究

目的：观察相对分子质量小于10000的小分子胸腺肽(thymopeptide，TP)在体外液体培养中对人急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60细胞增殖的影响。并探讨可能的作用机制。方法：在加或不加TP的情况下，体外悬浮培养HL-60细胞。实验分为3组：空白对照组、TP20μg／ml和40μg／ml实验组，每组设3个平行孔；胎盘蓝染色法计数细胞并绘制细胞生长指数曲线；单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测细胞出现的DNA损伤；琼脂糖凝胶电泳法检测基因组DNA断裂情况。结果：TP作用于细胞72h后，较低浓度的TP(20μg／ml)对HL-60细胞的增殖即有抑制作用；对TP两个实验组的SCGE检测结果显示，HL-60细胞的慧尾现象明显增多；琼脂糖凝胶电泳上出现了相差200bp左右的DNA梯度现象。结论：TP对HL-60细胞的增殖具有抑制作用，凋亡诱发的DNA损伤可能参与了这一过程。     

膀胱逼尿肌细胞的培养及鉴定

目的：建立膀胱逼尿肌细胞的分离、培养、扩增的常规方法。方法：采用胶原酶消化法分离大鼠膀胱逼尿肌细胞，在含15％胎牛血清DMEM中培养，观察细胞形态及扩增情况，用特异性抗α-SM-Actin抗体进行免疫组化鉴定细胞类型。结果：膀胱逼尿肌细胞生长照好，培养12h后细胞开始贴附瓶底，3～4d后可观察到细胞融合现象，7d可覆盖培养瓶底部75％～80％以上。α-Actin免疫组化染色鉴定，光镜观察梭形细胞胞浆内见纵行排列的棕黄色丝状物。结论：该培养方法简单、可靠，短期内可获得大量较纯的膀胱逼尿肌细胞。     

聚乙醇酸负载同种异体软骨细胞移植修复兔关节软骨缺损

目的：应用聚乙醇酸（ＰＧＡ）负载的兔软骨细胞培养移植修复同种异体关节软骨缺损．方法：应用在生物体内可降解吸收、纤维状多孔态的ＰＧＡ作为支架行兔软骨细胞培养．培养１４天后，软骨细胞在ＰＧＡ提供的三维空间中大量分裂、增殖并合成大量软骨基质，形成ＰＧＡ－软骨细胞复合体，然后利用该复合体移植修复同种异体兔膝关节全层软骨缺损，对侧膝关节作对照．术后行大体、组织学、电镜动态观察及修复组织厚度测定．结果：ＰＧＡ在术后８周完全降解吸收，实验侧与对照侧修复组织的厚度有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；术后１６周在实验侧可见典型的软骨组织，电镜下为成熟的软骨细胞，而对照侧为纤维组织修复．结论：应用ＰＧＡ－软骨细胞复合体移植，可修复同种异体的兔关节软骨缺损，为临床治疗关节软骨缺损奠定了基础．     

白杨黄素影响两种胃癌细胞系增殖与凋亡的研究

 目的 研究白杨黄素对两种胃癌细胞系SGC-7901和MKN-45是否具有抑制作用的分子生物学机制.方法 通过MTT法检测白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞的增殖抑制作用,流式细胞术测定经白杨黄素处理后两种细胞的细胞周期,Westen-blot测定凋亡相关因子Caspase-3、Survivin和Bcl-2的表达水平.结果 白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞具有增殖抑制作用,呈时间浓度依赖性;能够将细胞周期阻滞于Sub G1期;能上调Caspase-3,下调Survivin和Bcl-2的基因表达.结论 白杨黄素能够诱导SGC-7901和MKN-45细胞的凋亡并有效地抑制其增殖.其机制可能与干扰细胞周期及激活Caspase-3,抑制Survivin和Bcl-2有关.     

洛伐他汀对HL-60细胞增殖功能及细胞形态的影响

目的 :探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (Lovastatin ,LOV)对HL - 6 0细胞增殖功能的影响并观察细胞的形态学变化。方法 :以LOV处理HL - 6 0细胞 ,采用MTT、生长曲线、光学显微镜观察等实验方法 ,观察LOV对HL - 6 0细胞增殖的抑制作用及对细胞形态的影响。结果 :4、8、16 μmol·L-1LOV处理HL - 6 0细胞 1～ 4d后 ,可抑制HL - 6 0细胞增殖 ,同时 ,细胞形态发生不同程度的改变。结论 :LOV能显著抑制HL - 6 0细胞增殖并使细胞形态发生明显改变 ,该作用呈剂量 -效应和时间依赖关系     

miR-302a在胃癌中表达及其对胃癌细胞凋亡与细胞周期影响

目的研究微小RNA-302a(miRNA-302a)在胃癌标本中的表达水平与临床病理特征的关系,以及其对胃癌细胞的凋亡和细胞周期调控作用,以探讨将miR-302a用于胃癌生物靶向治疗的可能性。方法采用实时PCR(RT-PCR)方法检测胃癌组织和正常胃黏膜组织中miR-302a的相对表达水平,并分析其与对应患者的临床病理资料的相关性。同时,采用RTPCR方法检测miR-302a在胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803和BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1中的表达情况;选取miR-302a表达水平最低者为癌细胞,并转染过表达miR-302a的真核重组质粒p CDNA3.1-miR-302a;转染后,采用流式细胞仪Annexin V/PI双染法和PI单染法检测miR-302a对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果胃癌组织中miR-302a的相对表达水平显著低于癌旁正常胃癌黏膜组织(P<0.05),且其表达与临床分期、病理分级和转移均有密切关系(P<0.05)。同时,在胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823中miR-302a的相对表达水平显著低于正常细胞GES-1中的表达(P<0.05),且在BGC-823中表达水平最低。p CDNA3.1-miR-302a质粒转染组与空白组和p CDNA3.1质粒转染组比较,miR-302a质粒转染后48 h后细胞凋亡水平显著升高,且G2/M期细胞数显著增高(P<0.05)。结论在胃癌组织和细胞中miR-302a均呈现低水平表达,当miR-302a过表达后,能显著增高胃癌细胞的凋亡水平并使细胞出现G2/M期阻滞,可能成为胃癌治疗的新靶点。     

抑制CHD6表达对A549细胞辐射敏感性的影响

目的通过RNA干扰技术建立染色质重构蛋白CHD6基因表达抑制的细胞模型,研究CHD6对人肺腺癌细胞A549细胞增殖及辐射敏感性的影响.方法利用质粒介导的siRNA技术建立CHD6基因表达抑制细胞模型,RT-PCR检测CHD6 mRNA的表达,细胞生长曲线和流式细胞技术分别检测A549细胞增殖及细胞周期的变化,荧光染色法检测细胞凋亡,细胞克隆形成率检测A549细胞辐射敏感性.结果通过本研究,成功构建了siRNA抑制CHD6表达的细胞模型;通过siRNA抑制CHD6的表达,A549细胞增殖能力明显增强,细胞对2 Gy以内γ射线照射有明显辐射抗性;大剂量照射后的细胞凋亡率无明显改变.结论抑制CHD6基因表达将提高细胞增殖能力和细胞的辐射抗性.     

丹参素和克伦特罗对兔骨髓间充质干细胞成纤维细胞集落的影响

目的以丹参素和克伦特罗为干预药物,观察对兔骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法用梯度密度法分离和培养兔骨髓间充质干细胞,18只兔子随机被分到空白组、丹参素和克伦特罗组。观察形成的骨髓间充质干细胞成纤维样集落数目。并利用骨髓间充质干细胞诱导成骨法和骨髓间充质干细胞表面标志流式分析法鉴定。结果和其它浓度相比,浓度为10ug/ml的丹参素和浓度为1.0ug/ml的克伦特罗有较大生成成纤维样集落数目能力。结论丹参素和克伦特罗对兔骨髓间充质干细胞有增殖作用。     

黄连素对乳腺癌细胞生长、迁移和放射敏感性的影响

目的 研究黄连素对乳腺癌细胞生长、迁移和放射敏感性的影响.方法 选取人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7,用MTT法检测细胞的生长和增殖;划痕愈合法观察细胞迁移能力;细胞流式技术测定细胞周期改变;磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞凋亡;Western blot法测定蛋白表达水平;细胞克隆形成法观察黄连素与辐射的联合作用.结果 黄连素明显抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的生长,并显现剂量-效应和时间-效应关系,MCF-7和MDA-MB-231细胞对黄连素表现出同样的敏感性.黄连素可以诱导剂量依赖性的G0/G1期细胞阻滞,40 μmol/L的黄连素处理后MDA-MB-231和MCF-7细胞早期凋亡分别高达86.63％和66.62％,与未处理的对照组相比,差异均有统计学意义(t=75.15和43.75,P＜0.01).黄连素明显降低了细胞周期调节相关蛋白Cyclin B1和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,而增加了促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平,但不影响细胞周期调节蛋白Cyclin D1的表达水平.低剂量(≤5μmol/L)黄连素可以明显降低细胞的迁移能力.采用单靶多击模型拟合曲线发现,与单独照射组相比,5 μmol/L黄连素预处理4h后MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的辐射增敏比分别为1.12和1.22.结论 黄连素通过调节细胞凋亡和细胞周期阻滞抑制乳腺癌细胞生长和迁移,并可提高乳腺癌细胞的放射敏感性.     

人外周血白细胞黏附分子的辐射效应研究

目的 研究外周血白细胞表面黏附分子的表达及其介导的细胞黏附能力变化与辐射剂量的关系。方法 人外周血细胞经不同剂量照射后不同时间用流式细胞仪双色标记分析不同白细胞表面不同黏附分子表达,特异底物包被微孔板法和结晶紫染色分析检测单核细胞对不同底物的黏附能力。结果 单核细胞表面CD11b和粒细胞表面CD29表达下降与辐射剂量间存在良好量效关系,照射后单核细胞对底物β1-整合素和胶原蛋白I的黏附能力改变与辐射剂量存在一定量效关系。结论 外周血白细胞表面黏附分子表达及功能改变展现出的与辐射剂量间的良好关系,为进一步深入研究将其作为评估生物受照剂量指标的可能打下基础。