吡格列酮治疗青春期多囊卵巢综合征的疗效和安全性

目的探讨吡格列酮治疗青春期多囊卵巢综合征（ PCOS）的疗效和安全性。方法我院妇科门诊就诊的青春期PCOS患者62例,随机分为吡格列酮组和二甲双胍组,每组各31例。两组均接受生活干预和抗雄激素治疗,治疗24 w后,比较分析两组间的疗效和安全性。结果治疗后,两组在恢复正常月经和排卵、降低雄激素水平、抑制黄体生成素（ LH）、升高孕酮（ P）、降低高胰岛素水平和降低三酰甘油（ TG）及低密度脂蛋白（ LDL）水平上疗效相当;治疗后,二甲双胍组卵泡刺激素（ FSH）和泌乳素（ PRL）水平较吡格列酮组高。但吡格列酮组不良反应较少。结论在改善生活方式和抗雄激素治疗基础上,加用吡格列酮治疗青春期PCOS的疗效与加用二甲双胍的疗效相当,安全性好。     

PPARγ依赖和非依赖途径参与吡格列酮对人肝癌细胞的增殖抑制作用

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）特异性外源配体吡格列酮（Pio）对体外培养的HepG2细胞增殖作用的影响,并探讨其是否通过PPARγ依赖途径发挥作用。方法将不同浓度的Pio作用于体外培养HepG2细胞,MTT比色法检测HepG2细胞增殖情况,3H-TdR掺入实验检测细胞DNA合成速率,采用RT-PCR和Western印迹检测PPARγmRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期;同时观察PPARγ特异性拮抗剂GW9662和（或）瞬时转染pSG5-PPARγ真核表达质粒、PPARγ小干扰RNA（pGCsi-PPARγ）表达质粒稳定转染对Pio细胞增殖作用的影响。结果 Pio作用于HepG2细胞后,导致HepG2细胞的增殖受到抑制、DNA合成速率减慢,呈一定的剂量依赖关系;在此过程中,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,但PPARγmRNA和蛋白的表达没有显著变化;GW9662可以部分拮抗Pio的增殖抑制效应,但转染pSG5-PPARγ真核表达质粒可以逆转GW9662的作用;利用pGCsi-PPARγ表达质粒将PPARγ基因沉默后,Pio在高浓度（20μmol/L）时亦表现出细胞增殖抑制作用。结论 Pio能够抑制HepG2细胞的增殖,该作用与其诱导细胞G0/Gl期的停滞有关,PPARγ依赖和非依赖途径参与上述过程。     

AMPKα信号途径参与吡格列酮对人肝癌细胞的凋亡诱导作用

目的观察吡格列酮干预对体外培养的HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响,并探讨其药理作用机制。方法以不同浓度的吡格列酮干预体外培养HepG2细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期以及激活的胱天蛋白酶（Caspase）3蛋白表达,RT-PCR检测PPARγmRNA的表达,Western印迹检测PPARγ蛋白、磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPKα）蛋白和磷酸化AMPKα（p-AMPKα）蛋白的表达;并将PPARγ小干扰RNA（pGCsi-PPARγ）表达质粒转染HepG2细胞,观察PPARγ基因沉默后吡格列酮对细胞凋亡作用的影响。结果不同浓度的吡格列酮干预HepG2细胞后,诱导细胞的凋亡,在此过程中G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,并呈一定的剂量依赖关系;但在上述过程中,PPARγmRNA和蛋白的表达没有显著变化;吡格列酮在高浓度（20μmol/L）时对pGCsi-PPARγ表达质粒转染的HepG2细胞仍表现出凋亡诱导作用。不同浓度的吡格列酮干预后未见激活的caspase 3表达峰,对NF-κB的DNA结合活性也无明显影响,但其在高浓度（20μmol/L）时明显增加对照组和pGCsi-PPARγ转染组p-AMPKα的表达,而总AMPKα则无明显变化。结论吡格列酮能够干扰细胞周期、诱导其凋亡,这种作用不是完全通过PPARγ依赖途径实现的,AMPKα信号途径参与上述过程。     

饱和游离脂肪酸通过其代谢产物酰基辅酶A导致卵巢颗粒细胞凋亡

探讨脂肪酸对人卵巢颗粒细胞生长的影响。不同剂量的游离脂肪酸处理颗粒细胞1－3天，用台盼蓝排除法对活细胞进行计数。用染色体DNA断裂和细胞形态学改变确定细胞凋亡。检测脂肪酸代谢产物酰基辅酶A是否直接引起细胞凋亡。测定与细胞凋亡相关的Bcl－2和Bax蛋白质表达水平。结果表明，饱和脂肪酸通过其代谢产物酰基辅酶A呈剂量依赖性的引起颗粒细胞凋亡，并导致Bcl-2水平下降和Bax水平升高。说明饱和脂肪酸对卵巢颗粒细胞有直接致凋亡作用。提示，女性肥胖和胰岛素抵抗患者出现的性功能障碍可能与饱和脂肪酸水平增高有关。     

细菌内毒素对枯否细胞丝裂原活化蛋白激酶家族的影响

为阐明LPS诱导全身炎症反应失控的信号转导机制，采用Western blot检测LPS刺激对枯否细胞ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平的影响。结果显示，LPS刺激后，枯否细胞内ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达无明显变化，但其磷酸化水平均发生了显著变化，刺激后5min即明显升高，并分别于30、45、20min达到高峰，然后逐渐下降，2h后基本恢复至正常水平，其中以p38MAPK变化最快且变化幅度最大。LPS浓度在10pg/ml-100ng/ml范围内时，ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平与LPS刺激浓度呈明显的剂量依赖性。提示ERK、JNK、p38MAPK均是LPS信号转导途径中的重要信号分子，其中p38MAPK在LPS所介导的枯否细胞早期反应中可能较ERK和JNK有着更为重要的作用。     

重组人干细胞因子对猕猴外周血干细胞的动员作用

给正常成年猕猴每天一次皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子 10 μg·kg-1·d-1(μKD)或 (和 )重组人干细胞因子 2 0、5 0和12 5 μKD ,前者给药 5天 ,后者 8天 ,观察国产重组人干细胞因子动员外周血干细胞的效果。结果表明 ,给药后外周血白细胞数最高值rhG CSF单独给药组为 2 0 6 % ,rhSCF单独给药为 2 0 0 % ,而两者联合给药后为 2 80 %～ 310 % ;外周血CFU GM较动员前分别升高 1 1、1 3和 5 8～7 9倍 ;3个联合动员组外周血CD34+ 细胞数分别为动员前的 2 0、2 4和 35倍。说明rhSCF对外周血干 /祖细胞有明显的动员作用 ,rhSCF+rhG CSF联合动员效果更佳     

雌激素对乳腺癌细胞作用的流式细胞光度分析

用流式细胞光度计分析雌激素及其拮抗剂对ER（＋）和ER（－）乳腺癌细胞的作用。所测结果表明：雌激素对ER（＋）乳腺癌细胞具有显著促分裂作用，而雌激素的拮抗剂三苯氧胺则能对抗这种促分裂作用；雌激素及其拮抗剂对ER（－）乳腺癌细胞无显著作用。     

活性羰基化合物对人血管内皮细胞粘附分子表达的影响

为探讨活性羰基化合物蓄积在慢性肾功能衰竭和糖尿病血管并发症发病机制中的作用，应用流式细胞仪检测3－脱氧葡糖醛酮和甲基乙二醛对人血 管内皮细胞表达粘附分子的影响。结果显示，3－脱氧葡糖醛酮和甲基乙二醛均可上调人血内皮细胞对ICAM－1和VCAM－1的表达，并呈时间和剂量依赖关系；羟基化合物清除剂（氨基胍）对上述羰基化合物产生的上调效应具有抑制作用。结果提示，活性羟基 化合物可能与慢性肾衰和糖尿病血管病变的形成有关。     

人肠上皮细胞内毒素低反应性及其机制探讨

为探讨人正常肠上皮细胞对内毒素（LPS）刺激低反应性的机制，用ELISA法检测LPS刺激肠上皮细胞18h后IL－8的分泌水平，用RT－PCR及RPA法检测肠上皮细胞LPS跨膜信号转导相关受体TLR4，TLR2，CD14和MD2 mRNA的表达及LPS刺激对其表达的影响，结果表明：LPS刺激不能引起肠上皮细胞IL－8的分泌，而IL－1β刺激却能引起其分泌；人正常肠上皮细胞TLR4，TLR2，CD14和MD2mRNA的表达均较弱，LPS刺激后，TLR4，CD145 CD14和MD2 mRNA表达进一步降低，而TLR2的表达无显著变化，说明肠上皮细胞对LPS的低反应性与细胞表达LPS相关受体低表面有一定的内在联系，从而进一步证实TLR4，CD14，MD2在介导LPS跨膜信号转导中起重要作用。     

游离脂肪酸对大鼠胰岛细胞Leptin受体的影响

目的　探讨游离脂肪酸是否会影响胰岛细胞Leptin受体的基因和蛋白表达及酪氨酸磷酸化 ,进而导致胰岛素抵抗及葡萄糖代谢的异常。方法　分离、培养新生SD大鼠胰岛细胞 ,分别与软脂酸 (0 2 5mmol/L)或油酸(0 12 5mmol/L)孵育 12、2 4、36h ,提取蛋白后用Western印迹法检测Leptin受体(OB R)的蛋白水平 ,用RT PCR检测胰岛细胞内OB RRNA含量的变化 ,用免疫沉淀法检测OB R的酪氨酸磷酸化程度。结果　软脂酸和油酸孵育后大鼠胰岛细胞OB R的蛋白表达水平在孵育 2 4、36h后均下调 (P <0 0 5 ) ;Leptin受体的RNA水平和酪氨酸磷酸化程度在各个时间点均下调 (P <0 0 5 )。结论　游离脂肪酸可对OB R的基因和蛋白表达水平及磷酸化程度产生一定的抑制作用 ,这种抑制作用可能是游离脂肪酸导致胰岛素抵抗的因素之一     

hTERT基因反义核酸对Hela宫颈癌细胞端粒酶活性的影响

研究人类端粒酶催化亚单位（hTERT)基因的反义寡核苷酸对宫颈癌细胞的影响。方法：采用TRAP－ELISA检测Hela细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：hTERT基因反义核酸能有效抑制Hela细胞端粒酶活性。结论：hTERT基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，为肿瘤治疗提供了一个有效的新途径。     

半乳糖修饰的反义硫代寡核苷酸的肝细胞导向及抗乙型肝炎病毒活性研究

人工合成两种半乳糖多聚赖氨酸导向配体，与荧光素标记的互补于ＨＢＶｍＲＮＡ多聚腺苷酸信号部分的２１－聚反义硫代脱氧核苷酸（ＡＳＯＤＮ）电性结合，与２．２．１５细胞共同孵育，４０ｍｉｎ后配体组对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的抑制率为４１％～４７％和２８％～３１％，单纯ＡＳＯＤＮ组为１１％和５％；３ｄ后配体组为８８％～８９％和７１％～７４％，单纯组为６４％和５３％。经流式细胞分析，配体组使２．２．１５细胞荧光染色率达７５．３％和８３．８％；单纯组为２４．３％。结果表明，两种人工配体均具有良好的导向ＡＳＯＤＮ入肝细胞的功能，且可以明显提高ＡＳＯＤＮ抗ＨＢＶ的活性。     

纤维蛋白诱导活化系膜细胞表达明胶酶A、B的机制研究

为观察纤维蛋白对系膜细胞（HMC）表达明胶酶A（MMP-2）、明胶酶B（MMP-9）的作用并探讨其活化机制,应用RT-PCR、明胶酶谱分析法分别在基因转录水平与蛋白质活性水平上检测纤维蛋白对HMC表达MMP-2、MMP-9的作用,采用纤维蛋白酶谱法与平板法检测纤维蛋白对HMC表达纤溶酶原激活物（PA）活性的影响。结果发现,纤维蛋白呈剂量与时间依赖性促进HMC MMP-2与MMP-9表达的上调,并同时促进HMCtPA与uPA的表达;应用抑肽酶阻断纤溶酶活性后能够完全阻断pro-MMP-2与pro-MMP-9的活化。提示肾脏局部沉积的纤维蛋白可以促进HMC表达与活化MMP-2、MMP-9、而MMP-2与MMP-9的活化依赖于PA/纤溶酶系统的调控。