血啉甲醚与血卟啉衍生物对鸡冠皮肤光敏损伤特点的比较研究

目的：采用形态学方法观察比较国产新型光敏剂－血啉甲醚（HMME）与传统光敏剂－血卟啉衍生物（HpD)对鸡冠表皮层、真皮乳头层毛细血管网、乳头下网状层和真皮深层组织的光敏损伤特点。方法：成年莱亨鸡234只,随机分为对照组42只,实验组192只。实验组动物静脉注射HMME或HpD1、5、10或20mg/kg,于给药后即刻、1、2、3或4h对鸡冠进行激光照射,波长为488．0和514．5、510．6、578．2或627．8nm,功率密度为50、100或150mW/cm^2,能量密度为30、60、90、120、150、180或270J/cm^2,于照射后即刻、1、3、7、14和28天取材,进行大体和光镜观察。结果：PDT作用区的红色鸡冠安全变白,乳头层毛细管肉皮细胞（EC）坏死,管壁破坏及血管数量减少,其作用程度与光敏剂给药量和激光照射量相关。HMME和HpD对乳头层毛细血管的损伤程度相似;HMME组未见皮及乳头下各层损伤,而部分HpD组见表皮基底细胞层有局灶性坏死、乳头下网状层有微血管及结缔组织损伤和淋巴细胞浸润。结论：HMME和HpD对鸡冠真皮乳头层毛细血管肉的损伤程度相似,但HMME的组织选择性优于HpD.     

血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增生的影响

目的观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增生的影响。方法对数生长期的Hacat细胞分别与浓度为0、10、20和40μg/ml的HMME孵育1h;同时将另一实验组的Hacat细胞与10μg/ml的HMME分别孵育0和30min、1和2h,分别以流式细胞仪检测孵育时间和孵育浓度对Hacat细胞吸收HMME的影响;在此基础上,将Hacat细胞分别与0、2·5、5、10、20和40μg/ml的HMME孵育2h,用532nm的倍频Nd∶YAG激光以20mW/cm2的功率密度分别照射0、2·5、5、10、20min,同时设立完全空白对照组和单纯光敏剂组,24h后以MTT法检测Hacat细胞的存活率。结果Hacat细胞对HMME吸收量随着孵育浓度的增高和孵育时间的增加而增多。单独照光或以高达40μg/ml的HMME孵育对Hacat无明显杀伤(P>0·05)。在激光功率密度相同的情况下,HMME-PDT对Hacat细胞的杀伤呈孵育浓度和激光能量密度相关性。结论Hacat细胞对HMME吸收呈孵育浓度和孵育时间相关性,孵育浓度及激光能量密度是影响HMME-PDT杀伤效应非常重要的影响因素,在实验范围内的HMME-PDT能对Hacat细胞产生明显的杀伤作用。     

瘢痕成纤维细胞对血卟啉单甲醚的吸收特性及其光动力效应

目的探讨增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）对光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）的吸收特性和光动力疗法（PDT）的杀伤效应。方法取原代培养的HSF,经流式细胞仪（FCM）检测HMME浓度（0～40μg/ml）和孵育时间（0～120 min）对HSF细胞吸收HMME的影响;MTT法检测HMME-PDT对HSF细胞存活率的影响。结果在一定HMME浓度范围内（0～40μg/ml）,HSF细胞对HMME的吸收量随HMME浓度和孵育时间的增加而增大。实验范围内的HMME-PDT对HSF细胞的杀伤效应与HMME浓度和激光能量密度正相关。结论 HSF对HMME的吸收随HMME浓度和孵育时间的增加而增大,HMME-PDT处理HSF时,光敏剂HMME浓度和激光能量密度是影响细胞存活率的重要因素。     

血啉甲醚在血管内皮细胞和皮肤组织中分布特性的研究

目的 :观察新型光敏剂———血啉甲醚 (ＨＭＭＥ)在鸡冠皮肤组织和血管内皮细胞 (ＥＣ)的分布特点。材料与方法 :莱亨鸡 12只 ,分为ＨＭＭＥ组或血卟啉衍生物 (ＨｐＤ)组 ,静脉注射ＨＭＭＥ或ＨｐＤ10ｍｇ/ｋｇ,每隔 10ｍｉｎ取血 2 5ｍｌ和鸡冠皮肤组织 2 5ｇ。培养新生儿脐带ＥＣ ,培养液中加入ＨＭＭＥ或ＨｐＤ ,孵育浓度分别为 2 0、40、6 0、80、10 0μｇ/ｍｌ,孵育时间为即刻、15、30、6 0、12 0、180、2 40ｍｉｎ。采用荧光分析法测定光敏剂含量 ,并绘制ＥＣ吸收光敏剂的浓度—含量和时间—含量关系曲线。结果 :ＨＭＭＥ和ＨｐＤ通…     

光动力学疗法抑制体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)介导的光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用及其影响因素。方法用MTT比色法观察HMME对体外培养人初发、复发翼状胬肉成纤维细胞(以下简称为初发、复发细胞)增殖的影响(毒性作用);用MTT法测定不同的光敏剂孵育浓度(0、2.5、5.0、10、20和40μg/ml)、孵育时间(0、5、10、20、30和60min)和激光能量密度(0.62和2.835J/cm2)条件下行PDT对初发、复发细胞增殖的影响;用免疫组化法检测PDT对初发、复发细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果初发、复发细胞分别在浓度≤20、40μg/ml的HMME中孵育60min对细胞无明显毒性。高剂量(2.835J/cm2)照光条件下,HMME孵育浓度分别≥2.5、10μg/ml的初发、复发细胞PDT实验组和对照组相比差异有显著意义(P<0.05),经40μg/ml的HMME孵育1h后用高剂量He-Ne激光照射初发、复发细胞增殖的抑制率分别为61.1%、57.6%;HMME孵育时间≥5min的PDT实验组和对照组相比差异有显著意义(P<0.01)。PDT对初发、复发细胞的PCNA表达具有明显的抑制作用。结论PDT对体外培养的初发、复发翼状胬肉成纤维细胞增殖有抑制作用。照光前光敏剂浓度越高、孵育时间越长,照光剂量越大,PDT效应越强。     

角膜新生血管光动力学疗法的实验研究

目的研究角膜新生血管的治疗方法,观察不同浓度的光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)所介导的光动力作用对兔角膜新生血管的影响,为探讨光动力学疗法治疗角膜新生血管的可行性和有效性提供初步的实验依据。方法采用角膜缝线的方法,诱导18只荷兰大耳白兔36只眼角膜新生血管形成。缝线后的第7天,将18只兔随机分成9组,将不同浓度的HMME分别注射于兔眼球结膜下,30min后用波长为632.8min的He-Ne激光照射不同的时间(即能量密度不同),观察每眼角膜新生血管损伤情况及角膜组织病理学改变。结果在HMME浓度为7.5mg/ml时,激光功率密度为30mW/cm2,能量密度为108,(?)m2,照射时间60min,兔角膜新生血管密度减低率(67.97±2.20)%,不但高于激光照射时间分别为15、30和45min,能量密度分别为27.54和81J/cm2时的新生血管密度减低率,其统计学差异有显著意义(P=0.001,P=0.002,P=0.031),而且高于HMME浓度为2.5mg/ml和5mg/ml2时的角膜新生血管的减低率,其统计学差异有显著意义(P<0.01,P<0.01);而HMME浓度为10m/ml时,睑球结膜损伤较大,不宜用于治疗眼部。PDT后组织病理学检查,电镜下见新生血管内皮细胞变性;HE染色角膜标本光镜下见新牛血管退缩。结论采用结膜下注射HMME,并用波长为632.8nm的He-Ne激光照射,     

血啉甲醚对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞光动力杀伤作用的初步研究

探讨血啉甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)对体外培养的类风湿关节炎患者滑膜细胞的光动力杀伤作用。方法：用四唑盐化色法（MTT）检测了不同能量的铜蒸气激光,不同浓度的HMME对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞的杀伤效应,并与血卟啉衍生物（hematoporphyrin derivative,HpD)进行比较。结果：（1）单纯照光及单加HMME,HpD对细胞存活率均无明显抑制作用。（2）各种浓度的HMME在不同剂理的激光作用下对细胞均有杀伤作用,浓度越高其杀伤作用越明显;HMME浓度一定,随着照光剂量的增大杀伤作用增强;不同浓度HMME介导的光动力杀伤作用所能产生的最大抑制率不同,此时所需的光剂量也不同。（3）HMME介导的光动力效应对滑膜细胞的杀伤作用受照光前孵育时间的影响。（4）相同浓度的HMME介导的光动力杀伤效应较HpD更强。结论：HMME介导的光动力效应对滑膜细胞的杀伤作用受光敏剂的浓度及照光能量密度的影响,且明显强于HpD,临床应用于滑膜切除术可能具有更大的优势。     

铜蒸气激光照射下光敏剂血卟啉衍生物和血卟啉单甲醚杀伤特性研究

目的 测定血卟啉衍生物(HpD)和血卟啉单甲醚(HMME)在铜蒸气激光照射下的半数杀伤浓度(IC50)和半数杀伤光剂量(IED50),了解HpD与HMME杀伤特性的差异.方法 将小鼠肺血管内皮细胞接种于96孔培养板,然后加入用DMEM(低糖)培养基配置的光敏剂中,4h后应用铜蒸气激光(510.6nm和578.2nm)单色光分别照射,24h后用MTT法测定细胞存活率.结果 在510.6nm和578.2nm波长下,饱和光剂量条件下HMME的IC50分别是HpD的1.31和1.24倍,在饱和光敏剂剂量条件下,HpD的IED50分别是HMME的1.18和1.17倍.结论 HpD在510.6nm和578.2nm波长的杀伤效应均较HMME强并和光剂量、波长密切相关.     

两种新型竹红菌乙素衍生物在人胃腺癌BGC-823细胞中吸收规律的研究

目的探讨两种新型光敏剂5-氨基-1-戊磺酸竹红菌乙素衍生物（PENSHB）和15位脱乙酰基13位3-氨基-1-丙磺酸竹红菌乙素衍生物（DPROHB）在人胃腺癌BGC-823细胞中的吸收规律。方法以浓度为4μM的PENSHB、DPROHB对人胃腺癌BGC-823细胞分别孵育0、0.5、1、2、4和8 h,用荧光分析法测定细胞内光敏剂含量,通过浓度-荧光强度标准曲线换算成光敏剂浓度,绘制每种光敏剂的孵育时间-细胞含量的关系曲线。以浓度为0.5、1、2、4和8μM的两种光敏剂分别孵育BGC-823细胞4 h后,测定细胞内荧光强度,绘制光敏剂的孵育浓度-细胞含量关系曲线。结果 BGC-823细胞对PENSHB和DPROHB的吸收含量随孵育时间的延长而增加,两者变化趋势相近,孵育1 h内细胞吸两种新型光敏剂收含量增加较快,4 h达到平台。在本实验的浓度范围内PENSHB和DPROHB的细胞吸收量随孵育浓度的增高而增加,基本呈线性关系,上升趋势相似。两者在细胞内的吸收含量依赖孵育时间及孵育浓度。结论两种新型竹红菌乙素衍生物PENSHB和DPROHB在提高水溶性及光动力效应的同时,细胞吸收特性良好,是有潜在应用前景的新型光敏剂。     

HMME-PDT对C666-1和CNE2细胞杀伤效应的实验研究

目的 比较在血卟啉单甲醚(HMME)介导下C666-1和CNE2鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NTC)细胞对光动力疗法(pho-todynamic therapy,PDT)的杀伤效应和引起差异的可能因素.方法 利用荧光光谱测量技术和激光扫描共聚焦显微技术分别检测HMME在c666-1和CNE2细胞中的潴留浓度和亚细胞分布;用细胞克隆形成方法评估C666-1和CNE2细胞的PDT疗效.结果 C666-1和CNE2细胞中HMME的潴留浓度随着细胞和光敏剂的孵育时间增加而增大,但CNE2细胞对HMME的吸收明显高于C666-1细胞;随着孵育时间的增加,细胞对HMME的吸收趋于饱和.HMME主要分布在c666-1和CNE2细胞的细胞核外周.在相同实验条件下,HMME.PDT对C566-1和CNE2细胞杀伤效果存在显著差异,CNE2的细胞存活率小于C666-1细胞.结论 HMME-PDT作用下C666-1细胞存活率明显高于CNE2细胞,其主要原因是CNF2细胞对HMME的吸收高于C666-1.细胞内光敏剂的潴留浓度是决定PDT疗效的一个关键要素.     

光动力疗法治疗鲜红斑痣1216例临床分析

目的：分析比较血啉甲醚（HMME）与血卟啉衍生物（HpD)为光敏剂行光动力疗法（PDT）鲜红斑痣的临床疗效及副反应。材料与方法：鲜红斑痣患者1216例,粉红型13．2％,紫红型68．3％,增厚型18．4％。静脉注射HpD或HMME3－7mg/kg后给予铜蒸气激光、KTDS／532激光或氩离子激光照射,功率密度50－100mW/cm^2,能量密度90－540J／cm^2,随访观察。结果：HMME－PDT和HpD－PDT对各型鲜红斑痣均能有效地消除病变颜色,所随访的1632个病灶在2个月至9年的随访期内末见复发。治疗后反应有：局部水肿5－7天,部分患者有结痂或一过性色素沉着,皮肤暂时性光过敏反应。HpD－PDT组避光期30－90天,HMME－PDT组占光期7－14天,与HpD－PDT相比,HMME－PDT具有反应轻、愈合快、不衣反应少,安全度大、避光期短、色素沉着轻、护理容易、重复治疗间隔期短的特点。结论：HMME－PDT与HpD－PDT都能有效治疗各型鲜红斑痣,但HMME－PDT具有不良反应少、安全度大,避光期短、护理容易、重复治疗间隔期短等优点。     

血管平滑肌细胞对血啉甲醚吸收特性的研究

目的 探讨血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）对光敏剂血啉甲醚（ＨＭＭＥ）的吸收特点及影响因素,为进一步建立动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄的光动力治疗方法提供实验依据。方法 培养兔主动脉ＳＭＣ并接种至９６孔培养板。首先,培养液中分别加入ＨＭＭＥ和血卟啉衍生物（ＨＰＤ）,浓度分别为２０、４０、６０、８０、１００μｇ／ｍｌ,采用荧光分析法测定细胞内光敏剂含量,绘缺点ＳＭＣ吸收光敏剂的浓度－含量和时间－含量关系曲     

血啉甲醚用于光动力疗法治疗鲜红斑痣的初步临床研究

经六年大量临床验证，光动力疗法已成为具有高度选择性和稳定可靠疗效的无瘢痕治疗鲜红斑痣的新方法。为解决治疗后的较长时间皮肤光敏反应这一主要副作用，本文对２１例志愿鲜红斑痣患者的２６个病灶应用血啉甲醚（ＨＭＭＥ）为光敏剂进行了治疗，对ＨＭＭＥ的作用进行了临床观察，发现ＨＭＭＥ具有良好的疗效、较轻的局部反应、较短的避光期和可行重复治疗的间隔期等优点，值得对其进行深入的研究。     

血卟啉衍生物静脉注射后在皮肤中分布的实验研究

目的探讨鲜红斑痣光动力学疗法中血卟啉衍生物（ＨｐＤ）的理想剂量和理想照光时间。方法５组实验用新西兰白兔（每组６只）分别按２、３、５、７、１０ｍｇ／ｋｇ静脉注射ＨｐＤ,采用快速冰冻切片技术,于荧光显微镜下观察不同时间ＨｐＤ在真皮血管内、真皮血管外间质和表皮的分布情况。结果ＨｐＤ在真皮浅层血管内出现时间,２、３ｍｇ／ｋｇ二组为１５ｍｉｎ,５、７、１０ｍｇ／ｋｇ三组为５ｍｉｎ;ＨｐＤ在真皮血管外间质出现时间,各组依次为６０、６０、３０、１５、５ｍｉｎ;ＨｐＤ在表皮出现时间,３、５、７、１０ｍｇ／ｋｇ各组依次为９０、６０、３０、５ｍｉｎ,２ｍｇ／ｋｇ组观察至１２０ｍｉｎ未出现。结论运用光动力学疗法治疗鲜红斑痣的剂量应掌握在３～５ｍｇ／ｋｇ之间,注射完毕后即可开始照光,３ｍｇ／ｋｇ时照光时间不宜超过９０ｍｉｎ,５ｍｇ／ｋｇ时不宜超过６０ｍｉｎ。     

光动力治癌新药血卟啉单甲醚（HMME）的研究

本文报道了一种单体卟啉血卟啉单甲醚的合成及其光敏化力、人癌细胞光灭活作用、动物移植瘤光动力疗效和有关的临床前药理毒理学研究资料。实验结果表明,与临床应用的混合卟啉制剂血卟啉衍生物(HpD)相比,HMME具有光敏化力强、肿瘤选择性摄入率高、光动力效应强、毒性低、无致突变和致畸胎作用等优点,是一种较理想的光动力治癌新药。     

血啉甲醚体外光敏反应机制研究

目的：探讨血啉甲醚（HMME）及血卟啉衍生物（HpD)体外光敏化反应的机制。方法：采用HMME及HpD光敏引起还原型辅酶I（NADH）氧化为中介的鲁米诺(luminol)化学发光法（CL），探讨HMME及HpD光敏反应特点，选择性应用单态氮（^1O2)及活性氧物质（ROS）的专一清除剂，研究^1O2及RSO在HME及HpD光敏反应中的作用。结果:^1O2专一清除剂几乎完全抑制了HMME和HpD的化学发光，ROS清除剂对化学发光没有明显影响。HMME化学发光值最高可达509595mV，反应持续时间48s,^1O2的总产量12230280。HpD的化学发光值最高49000mV，反应时间235s,^1O2的总产量5757500。结论：HMME及HpD的光敏化产物主要是^1O2，HMME光敏化产生^1O2的光量子产率高于HpD，^1O2生成速度比HpD快，HMME自敏光氧化速度也比HpD快。在鲜红斑痣的的治疗中，当血供正常时，HMME光敏损伤作用可能更强，组织选择性可能更好。     

Clinical study on clinical operation and post-treatment reactions of HMME-PDT in treatment of PWS

ObjectiveTo analyze the clinical efficacy of hematoporphyrin monomethyl ether photodynamic therapy (HMME-PDT) in treating port-wine stains (PWS), and its clinical operation skills and operation essentials.MethodA total of 16 cases of PWS with negative HMME skin test results were included in this study. Their treated areas were exposed and injected with 5 mg/kg HMME, and then irradiated under 532 nm LED green light (produced by Wuhan YaGe LED1 modified machines), with the irradiation power density between 80 and 100 mW/cm². Each light spot was irradiated for 20–25 min. After one treatment, the clinical efficacy and post-treatment reactions at each treated area were observed.ResultUnder standard operation, two of the 16 cases were cured (12.5%) after one HMME-PDT treatment, eight cases indicates a good efficacy (50.0%), four cases showed alleviation (25.0%), while two cases displayed no efficacy (12.5%), indicating an one-time response rate of 87.5%. Pain was reported during treatment, and significant post-treatment edema was observed at the treated areas; And no allergy or other adverse reaction were reported.ConclusionIn adherence to operation standards and operation essentials during treatment, HMME-PDT shows a satisfactory clinical efficacy in treating PWS.     

光动力学疗法过程中小鼠皮肤蛋白质谱变化的研究

目的 寻找皮肤对血卟啉单甲醚光动力学疗法(hematoporphyrin monomethyl ether mediated photodyrnamic therapy,HMME-PDT)应答的蛋白质分子标志物.方法 雌性BALB/c小鼠尾静脉注射血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)10 mg/kg后即刻以532 nm的激光对其皮肤进行照射,功率密度50 mW/cm2,光斑直径1 cm,照光时间20 min;同时设立单纯照光组、单纯光敏剂组以及空白对照组.术后24 h从照射局部皮肤取材,以裂解液提取皮肤蛋白,然后用蛋白质芯片(WCX2)和SELDI蛋白质芯片阅读机检测小鼠皮肤差异蛋白质的表达.结果 HMME-PDT能够明显改变照射局部皮肤蛋白质谱的表达,在质荷比为相对分子质量(Mr)4949～18 828之间,共有7个蛋白质峰的强度发生了显著改变,其中2个蛋白质表达上调,另外5个蛋白质表达下调.单独照光组在Mrl4 927处有1个蛋白质的表达下调,与PDT处理组在该点的变化一致,且与正常对照相比有显著差异.结论 PDT照射能显著改变小鼠皮肤蛋白质谱的表达,单纯照光也能引起个别蛋白的表达发生改变,并且与PDT在该点的表达趋势一致,提示这些差异蛋白质的表达与皮肤对PDT所产生的氧化应激或照光引起的光热效应的应答机制有关.     

The association between treatment reactions and treatment efficiency of Hemoporfin-photodynamic therapy on port wine stains: A prospective double blind randomized controlled trial

BackgroundResearch has focused on treatment efficiency and/or treatment reactions of photodynamic therapy (PDT) on port-wine stain (PWS). But few studies reported the association between them. Hence, here we investigated the association between the treatment efficiency and treatment reactions after Hemoporfin (HMME) mediated photodynamic therapy (PDT) on PWS through a prospective study.MethodsPatients (n = 50) with PWS were randomly assigned to the HMME group or the placebo group. Three quit after the first treatment, and forty-seven received two sessions of treatment at an 8-week interval. They were given the treatment at day 1 and evaluations were performed at day 1, day 4 and week 8 in each session. HMME group was treated with HMME while the placebo group was given normal saline instead in the first session, double-blindly. While in the second session, both groups received HMME-PDT treatment.ResultsAfter a single treatment, swelling was more severe in younger patients (p < 0.05) and the lesion far from centro-facial showed more severe pruritus and scab. Compared with a single treatment, burning sensation had a higher occurrence rate, while burning sensation and scab were less severe in the second treatment. Importantly, severity of scab and pain (5 min after irradiation) were found possibly correlated with the treatment efficiency.ConclusionHMME-PDT on PWS induces several treatment reactions, including pruritus, burning sensation, pain, swelling, blisters and scab. Two sessions of treatments do not have any accumulation effects on treatment reactions. And there might be a positive correlation between treatment efficiency and the severity of scab or pain (at early stage of the therapy), which might help in regulating treatment modalities.