焦磷酸测序技术检测细胞色素2D6＊ 10基因多态性方法的建立

目的利用焦磷酸测序技术建立高通量细胞色素2D6＊1 0突变检测方法。方法应用带有生物素标记的扩增引物,经聚合酶链式反应扩增及Beads分离,制备该突变位点焦磷酸测序单链模板,并在PyroMarkID焦磷酸测序仪上进行焦磷酸测序,以经典ABI测序法测序结果作为标准对照,观察批量检测96例高血压患者DNA标本细胞色素2D6＊ 10突变的可靠性。结果建立了基于焦磷酸测序技术的一次性96例细胞色素2D6＊ 10突变位点的批量检测平台,经重复性检测和标准的ABI测序可靠性检测,焦磷酸测序法对细胞色素2D6＊ 10突变位点的突变检出率及重复率均达100%。结论本方法可准确、快速、高通量检测细胞色素2D6＊10突变,可应用于该单核苷酸多态性位点批量检测需要。     

基于多重置换扩增技术的胃癌患者胃内微生物的宏基因组学研究

目的 通过多重置换扩增技术（multiple displacement amplification,MDA）与宏基因组鸟枪法测序相结合的方法研究胃癌患者和健康受试者胃内微生物的组成特征。方法 纳入2017年9月—2017年12月在医院就诊的胃腺癌患者4例,健康受试者4例,收集受试者胃液标本,经过标本预处理、DNA提取、MDA扩增提取的DNA、构建测序文库、高通量测序和生物信息学分析,研究2组受试者胃内微生物的组成特征,寻找与胃癌显著相关的菌种,并评估该方法用于胃内微生物宏基因组学研究的可行性。结果 MDA能显著扩增从胃液样本中提取的微量微生物DNA（207.27±33.17）倍,扩增后的DNA量能满足构建高质量测序文库的要求;总体上看,所有样本共鉴定出131个菌种,胃癌患者胃内菌群多样性显著低于健康受试者（P<0.01,t=4.189）;在细菌门水平,受试者胃液菌群主要由变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、梭杆菌门组成;优势物种的组间差异分析表明,与健康受试者相比,牙髓卟啉单胞菌、口腔链球菌、干燥奈瑟菌在胃癌患者胃液中富集(P<0.05)。结论 MDA能有效用于扩增胃内微量微生物DNA;胃癌患者的胃液菌群构成与健康人存在显著差异;部分口腔及上呼吸道条件致病菌与胃癌显著相关,是潜在的胃癌生物学标志物;通过全基因组扩增和高通量测序相结合的方法可以从菌种甚至菌株的水平上寻找与胃癌发生、发展相关的微生物。     

肺纤维化相关的细胞间通讯网络研究

目的 建立肺纤维化相关的细胞间通讯网络,并探究细胞间通讯网络在肺纤维化中的作用.方法 基于公开的肺纤维化单细胞测序数据和配体-受体相互作用数据库,并基于自助抽样的新算法建立肺纤维化相关的细胞间相互作用网络;使用Circos和Cytoscape软件对细胞间通讯网络进行可视化,并进一步分析其对细胞功能通路的影响.结果 首先,建立了肺纤维化相关的肌成纤维细胞、成纤维细胞、脂成纤维细胞、间充质祖细胞、间皮细胞、内皮细胞和高表达Pdgfrb的间充质细胞之间的通讯网络模型.然后,筛选出各种细胞类群中与肺纤维化显著相关的配体-受体关系对,并重点研究了几个与肺纤维化有关的配体或受体.最后,分析了与细胞间通讯网络相关的细胞功能通路.结论 该研究基于单细胞转录组测序数据利用自助抽样算法,建立了肺纤维化相关的细胞间通讯网络,并初步揭示了与肺纤维化相关的显著高表达的配体、受体及其影响的功能通路.     

标签微阵列技术高通量测定单核苷酸多态性方法的建立与应用

目的 建立标签微阵列技术高通量检测单核苷酸多态性的方法,并用于研究正常人运动相关基因的单核苷酸多态性. 方法 确定要研究的运动相关基因,并找到要研究的48个单核苷酸多态性(SNP)位点,在PubMed上找到各SNP位点的编号(rsnumber),然后在www.autoprimr.com上进行引物设计,按所设计序列进行引物合成.通过标签微阵列技术和单碱基延伸法,按照Hakeman的SNPstream仪器的操作步骤进行实验,统计分析每个位点的基因型频率和等位基凶频率. 结果 同时检测了与运动相关的48个SNP位点的信息,且样品数量可以根据检测需要灵活安排,可同时进行几百甚至上千样品的检测.这48个SNP位点的基因型频率和等位基因频率可用于后序的研究工作. 结论 标签微阵列技术高通量检测单核苷酸多态性结果准确,速度快,效率高,价格适中,可以用于研究各种疾病与SNP的相关性.     

肝硬化患者肠道微生物代谢功能的宏基因组学研究

目的：分析肝硬化患者远端肠道微生态菌群代谢功能的变化。方法选取16例肝硬化患者及20例正常人,提取其肠道微生物宏基因组DNA进行高通量Solexa测序,对测序基因进行代谢功能的注释,比较肝硬化患者与正常人之间的差异,找出疾病相关的肠道微生物代谢功能的变化。结果肝硬化患者肠道菌群功能多样性降低,对药物、必需氨基酸、丙酸盐等的代谢能力以及炎性反应显著增强,而对丁酸盐、胆汁酸的代谢能力以及细胞周期相关的功能显著降低。结论在肝硬化的影响下,肠道微生物的生长环境被破坏,肠道菌群为了适应环境,在功能和代谢方面表现出一定程度的代偿。     

外显子芯片的数据分析和可变剪接预测的新算法

可变剪接（alternative splicing）是产生高等真核生物蛋白质多样性的重要分子调控机制之一,众多研究表明,可变剪接可以改变蛋白质的结构和功能从而导致多种人类疾病。外显子芯片是Affymetrix公司开发的全基因组范围内检测外显子表达的高通量芯片系统,可通过检测外显子的差异表达来推断可变剪接事件。和传统的3′基因表达芯片相比,外显子芯片不仅探针（probe）设计的密度大,而且覆盖了全转录本中所有已知和预测的外显子。外显子芯片的数据分析包含基因和外显子两个水平的分析流程以及可变剪接预测部分。由于使用常规的芯片分析方法并不能有效地预测可变剪接事件,因此本文就现有的外显子芯片分析方法和流程进行综述,并着重介绍可变剪接事件预测的新算法。     

纳米孔三代测序在HIV/AIDS合并肺部感染者快速病原学鉴定的应用价值探讨

目的通过对人类免疫缺陷病毒/获得性免疫缺陷综合征（Human Immunodeficiency Virus/Acquired Immunedeficiency Syndrome,HIV/AIDS）合并肺部感染者纤维支气管镜肺泡灌洗液样本进行研究,探讨纳米孔三代测序（Oxford Nanopore Technologies）对样本快速病原学鉴定的准确性。方法本研究共纳入2例HIV/AIDS合并肺部感染并留取肺泡灌洗液样本的患者,使用纳米孔三代测序对样本DNA进行测序,提取不同时间点的测序数据进行生物信息学分析,并与常规病原体检查和二代测序（Illumina）等方法进行比较,评价纳米孔三代测序对样本快速病原学鉴定的准确性。结果本研究纳入的患者A常规病原学检查和二代测序的结果均提示铜绿假单胞菌感染,纳米孔三代测序仅需1 h测序数据即发现样本中存在铜绿假单胞菌的基因序列;患者B常规病原学检查和二代测序的结果均提示肺炎克雷伯杆菌,屎肠球菌和结核分枝杆菌混合感染,纳米孔三代测序1 h的测序结果即可检测出肺炎克雷伯杆菌和屎肠球菌的基因序列,6 h的测序结果即可检测出结核分枝杆菌的序列。因此,加上对肺泡灌洗液样本处理、DNA文库构建和生物信息学分析的耗时（合计约2 h）,仅需8 h左右即可检测出上述样本的致病微生物。结论纳米孔三代宏基因组测序可对HIV/AIDS合并肺部感染者进行快速病原微生物鉴定,其准确性与常规病原学检查和Illumina二代测序的结果一致。     

头颈鳞癌的精准医疗研究进展

头颈鳞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）在全球范围内的发病率呈逐年上升趋势,尽管极力提高治疗水平,但其预后仍不理想。精准医疗时代,新的基因测序技术、液体活检技术、高分辨率成像技术以及分子病理学的进展,为HNSCC的精准诊断提供了良好的平台。而基于高通量基因测序及大数据分析等手段开发的精准细胞免疫治疗、个性化抗体偶联药物以及靶向人体微生物组药物等,为HNSCC的精准治疗提供了可靠的手段。作者综述了HNSCC精准诊断和精准治疗的相关研究进展。     

利用CRISPR/Cas9系统构建HepG2细胞THRAP3基因敲除细胞系

目的 使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类肝癌细胞HepG2中的甲状腺激素受体相关蛋白3(THRAP3)基因,构建THRAP3基因敲除细胞系.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性靶向THRAP3基因第3个外显子相关序列的多条小向导RNA,通过T7核酸内切酶筛选出切割效率最高的载体,构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒.测序鉴定后,将重组质粒转染至HepG2细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选细胞株,挑取单克隆,再用PCR、测序等方法鉴定细胞基因型,免疫印迹方法鉴定细胞THRAP3敲除效果.使用高通量测序的方法进行基因表达分析.用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响,CCK-8试剂盒检测细胞增殖.结果 成功构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒,筛选出特异性敲除THRAP3基因的细胞系,验证了THRAP3敲除对细胞周期以及细胞增殖的影响.结论 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建并获得了THRAP3基因敲除细胞系并初步探究了THRAP3基因功能.     

基于正反交杂交小鼠早期胚胎转录组的等位基因表达不平衡现象动态变化研究

目的 研究早期胚胎中等位基因表达不平衡的现象及其背后的调控因素.方法 基于两个不同品系纯合小鼠的正反交杂交实验设计,对早期胚胎中5个重要阶段的RNA测序数据进行生物信息学分析.结果 建立了识别基于正反交杂交品系中等位基因表达不平衡的工作流程,分析了早期胚胎5个重要阶段等位基因表达不平衡的动态变化规律,以及母源RNA、初...     

Sexual homicide: Brief review of the literature and case report involving rape,genital mutilation and human arson

The objective of the current paper is to report a new case of sexual murder involving human arson and summarize the literature on the phenomenon of sexual homicide. The present case study is unprecedented in Greece and a rarity in international literature due to the fact that the victim suffered genital mutilation and incineration while still alive. The evaluation consisted of 176 articles; 53 were reviewed by the authors. The results revealed sparse, but significant, research findings. The authors discuss the limitations regarding research, incidence of the phenomenon, crime-scene patterns, offender characteristics (killing methods, motive inferences, sociodemographic data, classifications, psychopathology, modus operandi), and victim selection. The incidence of the phenomenon is unclear (1–4%) due to non-standardized criteria. It is an expression of displaced anger or sexual sadism and/or a way to elude detection (ancillary benefit). Most offenders (in their first kill) and victims were in their late 20s to early 30s and belong to Caucasian populations. Personal weapons were commonly used against women, strangulation is the prevalent killing method against children, and firearms against men. Most of the sexual homicide perpetrators are non-psychotic at the time of the attack, but experience personality pathology, primitive defenses, pathological object relations, and withdrawal into fantasy in order to deal with social isolation.     

Extension du modèle puissance–temps limite pour estimer la production d’énergie aérobie et anaérobie lors de l’exercice intense

Aim

Examine how the modelling of the relation between power and time to exhaustion can provide an estimation of the production of aerobic and anaerobic energy during intense exercise.

Current knowledge

The hyperbolic model made it possible to define the critical power corresponding to the maximal rate of energy renewed by aerobic metabolism. A new model distinguishing the critical power from the maximal aerobic power has been built to estimate more precisely the anaerobic contribution. Data from middle distance runners and subjects tested on cycle ergometer showed a relative contribution of anaerobic metabolism arising from critical power and increasing until around 10 % of total power when aerobic energy production reaches its maximum.

Prospects

Considering the slow component of oxygen uptake would provide a more precise analysis of energy production and transformation during exercise at high intensity.     

Beziehungen zwischen Aufprallgeschwindigkeit,Fahrzeugbeschädigungen,Frakturen und „Wurfweite” bei 50 tödlichen Fußgänger-PKW-Unfällen

Zusammenfassung Aus 160 Obduktionen von Fußgängern, die durch PKW getötet worden waren, sind 50 nach folgenden Gesichtspunkten ausgewählt worden:Auffahrunfälle Erwachsener mit gesicherten Angaben in den Gerichtsakten über Fahrzeugbeschädigungen, Zusammenstoßstellen, Endlage der Fußgänger und Bremsspuren. Aus diesen Daten wurden Ausgangs- und Aufprallgeschwindigkeiten berechnet sowie die Wurfweite der Fußgänger gemessen.Die Ausgangsgeschwindigkeiten, nach der Berechnung zwischen 32 und 95 km/h, lagen meistens etwas höher als die angegebenen Geschwindigkeiten. Zwischen Ausgangs- und Aufprallgeschwindigkeiten waren die Differenzen größer. Ab 12 km/h Aufprallgeschwindigkeit kam es bereits zu tödlichen Verletzungen. Auffallend ist die zweigipfelige Verteilung der Häufigkeit sowohl bei der Einteilung nach den Aufprallgeschwindigkeiten als auch nach den Deformationsarbeiten (Aufprallgeschwindigkeit: 26% bei 51–60 km/h und 22% bei 21 bis 30 km/h; Deformationsarbeit: 34% bei 39–200 kpm und 30% bei 701–1000 kpm).Bei Aufprallgeschwindigkeiten über 50 km/h wurden doppelt so viel Knochenbrüche an der Wirbelsäule und am Becken als bei Aufprallgeschwindigkeiten unter 50 km/h festgestellt.Bei 44 Fußgängerunfällen lag ein Drittel innerhalb der Erwartungsgrenze der Wurfweite nach Fiala, je ein Drittel aber darüber bzw, darunter.Das Beschädigungsbild und die Anstoßverletzungen geben Hinweise zur Ermittlung der Aufprallgeschwindigkeit, vor allem wenn weitere Berechnungsgrundlagen fehlen.

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Summary Fifty cases were selected from 160 autopsies performed on pedestrians who were accidentally killed by private motorcars; the cases were selected according to the following criteria:The cases were confined to impact accidents involving adults in which reliable evidence could be gathered from the Court records in relation to damage to the car, the place of collision, the final position of the injured pedestrian and the extent of skidmarks. The initial and collision speeds of the cars were calculated from these facts and the distance of projection of the pedestrians were measured.The initial speeds, calculated between 32 and 95 km/h, were, in most cases, higher than the declared speeds. The differences between initial and collision speeds were larger. Fatal injuries could arise from a collision velocity of only 12 km/h. A striking feature of the analysis was the distribution of two peaks of frequency whether these were classified according to the collision speeds or according to the deformation of the vehicle (collision speed: 26% at the speed of 51 to 60 km/h and 22% at the speed of 21 to 30 km/h; deformation work: 34% at the deformation work of 39 to 200 kpm and 30% at the deformation work of 701 to 1,000 kpm).Twice as many fractures of the vertebral column and pelvis were sustained at collision speeds over 50 km/h as were sustained under 50 km/h.In one third of 44 pedestrian accidents, the distance of projection was within the expected range described by Fiala; in one third the distance was above and in one third below the expected range.If additional data for calculation were lacking, the patterns in injury arising from the impacts gave indications from which it was possible to estimate the collision speed.

Stipendiat der Alexander v. Humboldt-Stiftung, Dozent Dr. med. S. Kamiyama, Dept. of Legal Medicine, School of Medicine, Chiba University, 313 Inohanacho, Chiba, Japan.     

Hip and pelvic injuries in the elderly

Fractures of the hip and pelvis are frequent and serious injuries in elderly patients. Due to the aging population, their incidence should double by 2050. Therefore, the social and economical implications of these fractures are significant. Delay in diagnosis increases the associated morbidity and mortality. The purpose is to review the imaging features of these fractures, the imaging techniques (projections, CT) to depict them and their classification based on severity.     

利用256iCT对左心室解剖结构和功能定量研究

目的应用256iCT对正常人左心室结构和功能相关指标进行定量研究,分析各指标与年龄和性别的关系。方法搜集506例行256iCT冠状动脉CTA结果正常的患者的影像资料;所有患者近6个月无心血管疾病病史。对原始图像进行多期重组,确定左心室舒张末期及收缩末期,分别对左心室舒张末期和收缩末期的室间隔厚度(septal wall thickness,SWT)、左室后壁厚度(posterior wall thickness,PWT)、左室宽径(LV inner diameter,LVID)、舒张末期容积(end-diastolic volume,EDV)、收缩末期容积(end-systolic volume,ESV)、每搏输出量(stroke volume,SV)和射血分数(ejection fraction,EF)进行测量和计算,并进行相关统计学处理。结果左心室舒张末期SWT、PWT、LVID 95%参考值范围分别为:4.4～12.1 mm,4.0～14.0 mm,28.1～60.8 mm。左心室收缩末期SWT、PWT、LVID 95%参考值分别为:6.2～15.7 mm,7.9～20.8 mm,18.1～46.3 mm。EDV、ESV、SV、EF 95%参考值范围分别为:55.9～165.7 ml,20.9～75.9 ml,25.8～98.6 ml,39.8%～78.3%。收缩期LVID和舒张期LVID值不同年龄组之间差异有统计学差异(P<0.05),并且随着年龄增长有增大趋势。收缩期SWT、舒张期SWT、收缩期PWT、舒张期PWT以及EF值有随着年龄增长而增大的趋势,同时EDV、ESV、SV值随着年龄增长有减小的趋势,但以上各指标在不同年龄组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。不同性别组分析显示除EF值无统计学差异以外,其余各指标均有统计学差异(P<0.05),且男性组各参数均大于女性组。结论初步制定了左心室形态、功能相关参数的正常参考值,为临床诊断、危险评级及预后判断提供有意义信息。     

ASL与DSC-PWI成年烟雾病患者中的对比研究

目的 将动脉自旋标记成像(ASL)与动态磁敏感对比增强灌注成像(DSC-PWI)进行对比分析,探讨ASL在烟雾病患者中的临床应用价值.方法 对32例烟雾病患者同时行ASL与DSC-PWI检查并获得ASL及PWI灌注伪彩图.在半卵圆中心、丘脑、小脑幕平面分别观察双侧大脑前动脉、大脑中动脉、大脑后动脉供血区灌注情况并进行评分(正常记为0,显示低灌注记为1).比较ASL-CBF与PWI-CBF、MTT、TTP诊断低灌注的差异.结果 Spearman检验显示,ASL-CBF低灌注得分(209)与PWI-CBF(206)、MTT(223)、TTP(215)之间高度相关(相关系数分别为0.78、0.83、0.86,P值均＜0.001).以TTP为标准,ASL诊断低灌注的敏感性为92.6％,特异性为93.5％,准确性为92.9％.结论 ASL技术可较真实地反映烟雾病患者的脑血流灌注状态.     

Extraosseous calcified plasmacytoma causing thoracic myelopathy

We report on a rare, calcified, plasma cell tumor of the spine causing progressive myelopathy. Other unusual features were the lack of an osseous lesion at the site of the mass, considerable calcified amyloid within the mass but no identifiable amyloid elsewhere, and normal serum immunoelectrophoresis. Received: 12 February 1999 Revision requested: 18 March 1999 Revision received: 19 April 1999 Accepted: 20 April 1999