LC-MS法检测大鼠血浆中酒石酸美托洛尔的方法学研究

目的：建立准确、灵敏、可靠的LC-MS法检测大鼠血浆中酒石酸美托洛尔的浓度。方法：血浆样品用乙酸乙酯液-液萃取,内标选用盐酸普萘洛尔,液相色谱柱为ThermoODS-C18（5.0μm,100mm×2.1mm）,流动相为含0.1%甲酸的乙腈：甲醇：水（20：20：60,体积比）,流速为0.2ml/min;仪器选用Agilent公司1100LC/MSDSL型液相色谱-质谱联用仪,采用电喷雾离子化电离源（ESI）,选择性离子监测（SIM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z267→268（美托洛尔）和m/z259→260（普萘洛尔）。结果：在本实验条件下,美托洛尔与内标盐酸普萘洛尔分离良好,保留时间分别为1.79和4.01min,0.1～50ng/ml范围内线性关系良好（r2=0.99411）,提取回收率均大于80%,日内日间精密度均小于15%（n=5）。结论：该方法快速、准确、灵敏度高,专属性好,可用于酒石酸美托洛尔在大鼠体内药物代谢动力学的研究。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中拉米夫定浓度

 目的 试图建立测定人血浆中拉米夫定浓度的液相色谱-串联质谱法.方法 以吉西他滨为内标,内标法定量.流动相:甲醇-10 mmol/L乙酸铵(12: 88,v/v);质谱采用离子喷雾离子源,扫描方式为多反应监测(MRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z 230m/z 111.9(拉米夫定)和m/z 263.8m/z 111.9(吉西他滨);药动学参数采用DAS2.0软件处理获得.结果 拉米夫定和内标吉西他滨的保留时间分别为2.9 min和2.4 min;拉米夫定的线性范围为0.0100~2.0000 μg/ml ,r=0.9996,回归方程:Y=0.0032X+0.0003,最低检测浓度为0.0100 μg/ml;提取回收率为95%～105%范围内;日内日间精密度RSD<6%.结论 此法适合人体血浆拉米夫定浓度的监测及生物利用度研究,结果准确、可靠.     

依普利酮在健康志愿者体内代谢物依普利酮酸的药代动力学研究

目的对单次给药后,依普利酮在健康志愿者体内代谢物依普利酮酸的药代动力学进行研究。方法健康志愿者单次服用不同剂量依普利酮片后,采用液相色谱串联质谱法测定依普利酮的代谢物依普利酮酸的浓度,用DAS2.0药动学软件计算药动学参数。结果单次口服25、50、100mg依普利酮片的主要药代动力学参数：t1/2分别为（4.2±1.6）、（4.5±2.3）、（5.1±1.3）h;Cmax分别为（151.5±38.36）、（203.9±60.49）、（543.0±139.8）ng/ml;AUC（0-30）分别为（756.7±300.4）、（1103±363.0）、（2660±638.0）μg.h/L。结论在25～100mg给药剂量范围内,依普利酮片在体内呈现线性药代动力学特征。     

亲水色谱-质谱联用（HILIC-MS）定量测定大鼠血浆中美金刚浓度及药代动力学研究

目的建立灵敏、可靠的亲水色谱-质谱联用（HILIC-MS）方法测定大鼠血浆中美金刚的浓度。方法血浆样品前处理采用蛋白沉淀,用HILIC-MS法测定。通过电喷雾电离源以选择离子监测（SIM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子分别为m/z 180（美金刚）和m/z 285（内标Ro 64-0802）。色谱分离采用Amide-80柱（100 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-水-甲酸（70∶30∶0.1,v/v/v,0.35 ml/min）为流动相。结果美金刚的线性范围为2～500 ng/ml,相关系数r2为0.99882,定量下限为2 ng/ml,批内、批间精密度在3.9%和5.6%以内,准确度控制在84.9%～111.2%。结论本方法通过HILIC技术,使美金刚保留时间增加,基质抑制降低并使检测灵敏度提高。该方法成功应用于大鼠血浆测定研究中。     

氨溴特罗片在健康人体的药代动力学研究

目的研究单剂量及多剂量口服氨溴特罗片在中国健康成年志愿者人体药代动力学。方法 9名健康成年受试者单次口服氨溴特罗片2片（含盐酸氨溴索60mg,盐酸克仑特罗40μg）,单次给药试验结束后进行多次口服给药,每日早晨给药2片,共给药9d,达稳态后进行多次给药临床药代动力学研究,采用液相色谱-串联质谱联用分别测定给药后氨溴索及克仑特罗的血药浓度,应用DASver2.0软件进行房室拟合及参数计算。结果血中氨溴索和克仑特罗的血药浓度-时间数据均符合二室药物动力学模型,氨溴索的单次与多次给药的药代动力学参数无统计学差异,而克仑特罗多次口服达稳态后的清除率（CL/F）和表观分布容积（V/F）降低,峰浓度（Cmax）、曲线下面积（AUC（0-t）、AUC（0-∞））、消除速率常数K10、平均滞留时间（MRT）均明显增加。男女受试者的主要药动学参数无显著性差异。试验期间未发现明显不良反应。结论受试者连续口服氨溴特罗片,氨溴索在体内无药物蓄积作用,而克仑特罗有明显药物蓄积。主要代谢参数在我国健康成人中无性别差异。所建立的检测方法灵敏、准确、可靠、特异性强,可满足氨溴索和克仑特罗临床药动学试验要求。     

阿奇霉素干混悬剂在健康人体的药代动力学及生物等效性评价

目的研究阿奇霉素干混悬剂在健康人体的药代动力学特征及其生物等效性。方法20名健康志愿受试者,采用标准二阶段交叉设计自身对照试验方法,单剂量口服阿奇霉素试验品和参比品500mg时,以液相色谱-质谱-质谱联用法测定服药后72h内不同时刻的血药浓度,计算主要药动学参数,并采用方差分析和双单侧t检验(1-2α)90%置信区间进行生物等效性评价。结果受试者分别口服阿奇霉素受试品和参比品后,其主要药动学参数Tmax分别为2.30±0.55、2.25±0.53h,Cmax分别为478.4±133.9、562.6±132.9ng.ml-1,T1/2分别为30.1±8.3、32.4±9.4h;用梯形法计算,AUC0-t分别为4 263±1 341、4511±918ng.h.ml-1,AUC0-∞分别为5 233±2 0735、426±1 011ng.h.ml-1。AUC0-t计算,阿奇霉素的相对生物利用度平均为(95.2±21.5)%。结论两种阿奇霉素制剂在健康志愿者体内具有生物等效性。     

尼可胺在大鼠体内的药代动力学研究

目的 采用高效液相色谱法（HPLC）研究尼可胺在大鼠体内的药代动力学变化。 方法 色谱柱为Sino chrom BDS柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇-0.02%醋酸（10:90）,检测波长为260 nm,柱温为30 ℃,流速为1 ml/min,进样量为5 μl。通过大鼠眼底静脉取血,血浆经乙腈沉淀蛋白,测定尼可胺血药浓度,通过DAS2.0计算其药代动力学参数。 结果 尼可胺的线性范围：20~1000 μg/ml（r=0.9998）。当尼可胺在大鼠血浆中的浓度为50、150和500 μg/ml时,提取回收率分别为84.9%、81.9%和79.1%,批内精密度和批间精密度均＜5%。当大鼠给予125 mg/kg的尼可胺后,其主要药代动力学参数为：消除相半衰期（t1/2β）为（32.99±23.14）min,血药-时间浓度曲线下面积（AUC）（0-t）为（14390.23±2584.02）mg·L-1·min,AUC（0-∞）为（16569.89±3450.31）mg·L-1·min,达峰时间（Tmax）为（27.0±6.7）min,药峰浓度（Cmax）为（242.13±33.89）mg/L。当大鼠给予250 mg/kg的尼可胺后,其主要药代动力学参数为：t1/2β为（59.05±16.34）min,AUC（0-t）为（26752.23±7967.03）mg·L-1·min,AUC（0-∞）为（35812.87±9476.48）mg·L-1·min,Tmax为（27.5±11.3）min,Cmax为（316.32±63.68）mg/L。当大鼠给予500 mg/kg的尼可胺后,其主要药代动力学参数为：t1/2β为（69.06±0.62）min,AUC（0-t）为（77306.48±27878.03）mg·L-1·min,AUC（0-∞）为（88014.22±26960.89）mg·L-1·min,Tmax为（40.0±7.7）min,Cmax为（601.42±147.150）mg/L。 结论 HPLC操作简便、准确、灵敏度高、重现性好,能够用于尼可胺在大鼠体内的药代动力学研究,为人体内尼可胺的药代动力学研究提供了参考。     

HPLC-FLD法测定血浆中阿仑膦酸钠的浓度及药代动力学研究

目的建立血浆中阿仑膦酸钠的HPLC-FLD检测方法,并应用于药动学研究。方法采用Kromasil-C18柱（4.6 mm×150 mm,5μm）;流动相：甲醇-乙腈-柠檬酸-焦磷酸钠体系;流速：1.5 ml·min^-1;柱温：35℃;激发波长：（λex）=260 nm,发射波长：（λem）=310 nm。24名健康男性志愿者单剂量口服阿仑膦酸钠片,测定血浆药物浓度,计算药代动力学参数。结果阿仑膦酸钠在1~100 ng·ml^-1范围内线性关系良好（r=0.9999）,最低定量限为1 ng·ml^-1。阿仑膦酸钠的专属性强,日内、日间精密度和准确度良好。结论本文研究建立了阿仑膦酸钠在血浆中HPLC-FLD的检测方法,该方法灵敏、准确,可用于临床药动学及生物等效性研究。     

高效液相色谱法测定血浆中安吖啶的浓度

血浆样品经饱和硼酸钠溶液碱化,用叔丁基甲醚提取安吖啶,分取有机相,加0.01mol/L 磷酸溶液反提取,然后吸取水液进样。用 NOPAK C_(18)柱,甲醇:水:1mol/L磷酸三乙胺溶液(65:34.85:0.15)为流动相,于262nm 处测定峰面积,用外标两点法计算药物浓度。安吖啶的血浆药物浓度在0.020～4.000μ/ml 范围内标准曲线有良好的线性关系。最低检测浓度为0.020μg/ml。平均回收率95%以上,变异系数(CV)小于8%。本法简便、可靠,亦较灵敏,为药动学研究提供了可行方法。家兔分别静注98mg/m~2和249mg/m~2安吖啶后的药动学过程符合二房室开放式模型,t_(1/2)β2.5和2.4h 清除率(CL)分别为19.8和21.3L/(m~2·h)。     

MECC法测定兔血浆落新妇苷浓度及其药代动力学研究

目的建立落新妇苷血药浓度测定方法,研究其在家兔体内的药代动力学。方法家兔耳缘静脉注射10 mg.kg-1落新妇苷,胶束电动毛细管电泳法测定血药浓度,3p97药动学软件分析药动学参数。结果落新妇苷血药浓度在2.05～24.6 mg.L-1范围内呈良好线性,r=0.9993,平均回收率为101.15%,日内、日间RSD均〈6%。落新妇苷在家兔体内的药代动力学过程符合二室开放模型。结论本法简便、快速、准确、干扰小,适用于落新妇苷血药浓度测定,为研究其在人体药代动力学及制定给药方案提供方法学基础。     

衍生化LC-MS/MS测定大鼠血浆中新型抗流感药物帕拉米韦及其在药代动力学研究中的应用

目的：建立灵敏、可靠的衍生化LC-MS/MS新方法测定大鼠血浆中帕拉米韦的浓度。方法：血浆样品前处理包括蛋白沉淀和用盐酸（10mol/L）-甲醇（10：90,体积比）为衍生化试剂的衍生化反应,测定采用LC-MS/MS。通过电喷雾电离源以选择反应监测（SRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z343→284（帕拉米韦衍生物）和m/z299→152（内标Ro64-0802衍生物）。色谱分离采用ZorbaxRX-C8柱（2.1mm×150mm,5μm）,以乙腈-水-甲酸（30：70：0.1,体积比,0.2ml/min）为流动相。结果：测定帕拉米韦的线性范围为10～10000ng/ml,相关系数r2为0.9940,定量下限为10ng/ml,批内和批间RSD%分别在5.0%和7.1%以内,准确度控制在89.9%～106.1%。结论：本方法通过衍生化反应,使帕拉米韦保留时间增加,基质抑制降低并使检测灵敏度提高。该方法成功应用于帕拉米韦非临床和临床研究中。     

HPLC-MS / MS 法测定抗抑郁新药阿姆西汀在大鼠体内的组织分布简

目的研究抗抑郁新药阿姆西汀（S-071031B）在大鼠体内各组织的分布特点。方法雄性sD大鼠随机分组,单剂量（20mg·kg-1）灌胃给药后,分别于15min、2、6和24h处死取血并解剖主要组织,采用LC—MS／MS测定阿姆西汀在生物样品中的药物浓度。结果sD大鼠灌胃给药15min后即在胃、小肠和肝脏组织中药物浓度达峰值,给药6h后在睾丸组织中药物浓度达峰值。而在心脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、肌肉组织及血浆均在给药后2h达到峰值,24h后各组织中药物浓度均降至较低水平。结论阿姆西汀在大鼠体内吸收迅速,人血后可广泛分布到体内各组织中,药物在体内也快速消除,无组织蓄积作用,具有良好的开发前景。     

LC-MS法测定大鼠全血4-DMAP浓度及其在药代动力学中的应用

目的:建立测定大鼠全血4-二甲氨基苯酚(4-dimethylaminophenol,4-DMAP)的液相色谱/质谱联用法(LC-MS).方法:全血样品经乙腈蛋白沉淀后,用丹磺酰氯衍生化,LC-MS法测定其血药浓度.以乙腈-0.1%甲酸水溶液(70/30,V/V)为流动相, 用Venusil XBP-C18柱(50 mm×2.1 mm,5 ìm)分离,通过电喷雾电离源(ESI)选择性离子检测.检测离子为m/z:370.8(4-DMAP衍生物),m/z:373(内标衍生物).对Wistar大鼠(n=5),于肌注4-DMAP(15 mg/kg)后进行了血药浓度测定.结果:4-DMAP在0.02~5 ìg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9987),批内和批间精密度RSD均小于10%.结论:本法操作简单、灵敏、准确,可用于4-DMAP的临床血药浓度测定和药代动力学研究.     

猕猴血浆中SARS冠状病毒主蛋白酶肽类抑制剂N3的测定

目的建立测定猕猴血浆中N3的LC-MS/MS法。方法以ffiOBasiCC18（100mm×2.1 mm,5μm）色谱柱为 分析柱,流动相为乙腈-水（含0.2%甲酸）（55：45, F：F）,采用电喷雾离子源（ESI）,正离子扫描方式,选择离子反应监测 （SRM）模式检测,用于定量分析的离子反应为m/z681.3-402.3。结果血浆中的N3用乙腈沉淀蛋白后,样品经LC-MS/MS 系统进行检测。在优化后的样品预处理、色谱及质谱条件下,LC-MS/MS法检测猕猴血浆中的N3,线性范围为20 -2500 μg·L^-1,准确度RE范围为-12.9% -2. 9 %,日内、日间精密度的RSD分别小于7.5% （ n =6）和7.8% （ n =18）;低、中、高 3个浓度（50、1000和2000μg·L^-1）犯质控样品的提取回收率分别为75.5 %、77.3 %和79.6 %。结论结果表明,该方法 具有灵敏、准确、快速等优点,适用于N3在猕猴体内的药代动力学研究。     

LC/MS/MS法测定家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物含量及其药代动力学研究

目的建立准确、灵敏、可靠的LC/MS/MS方法,定量检测家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物浓度,并用于家兔给予咪哒酚衍生物滴眼后血浆及房水中药代动力学研究。方法血浆及房水样品经蛋白沉淀前处理,内标选用Amms,液相色谱柱为TOSOHTSKgel Amide,流动相为含0.1%甲酸的甲醇∶水（80∶20,体积比）,仪器选用Finni-gan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪,采用电喷雾离子化电离源（ESI）,选择反应离子监测（SRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 381→308（咪哒酚衍生物）和m/z 285→138（Amms）。结果在本实验条件下,咪哒酚衍生物与内标Amms分离良好,保留时间分别为1.48和1.55 min,血浆和房水中药物浓度分别在5~2000和10~10 000 ng/ml范围内线性关系良好,相关系数（r2）分别为0.9971和0.9999,定量下限分别为5和10 ng/ml,回收率均大于80%,日内、日间精密度均小于15%（n=5）。结论该方法快速、准确、灵敏度高,专属性好,可用于咪哒酚衍生物在家兔体内的药物代谢动力学研究。     

LC／MS／MS测定比格犬血浆中丁螺环酮浓度及其在药代动力学研究中的应用

目的：建立LC／MS／MS测定比格犬血浆中丁螺环酮的方法,并应用于其缓释制剂药代动力学研究。方法：血浆样品经液-液萃取,内标选用曲马多,色谱柱采用Zorbax SB-C18柱（2．1mm×100mm,3．5μm）;流动相为甲醇-水-甲酸（40：60：0．1）,流速0．2ml／min;用美国Finnigan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪器,配有电喷雾离子化电离源（ESI）,正离子检测模式,扫描方式为选择反应监测（SRM）,用于定量分析的离子反应分别为m／z 386．2→121．97（丁螺环酮）和m／z 264．3→58．0（内标,曲马多）。结果：测定丁螺环酮的线性范围为0．025→7．5μg/L,相关系数为0．99893,提取回收率为72．2％,方法回收率为99．1％,日内日间精密度均小于10．7％,血浆中丁螺环酮的最低定量下限为0．025μg／L。结论：该方法简便、快速、准确,灵敏度高,专一性好,成功应用于丁螺环酮缓释制刺的药代动力学研究。     

LC－MS／MS同时测定比格犬血浆中美托拉宗和缬沙坦

目的：建立同时测定比格犬血浆中美托拉宗和缬沙坦的高效液相色谱串联质谱法。方法分析柱为Agilent Poroshell 120色谱柱（2．1 mm ×30 mm ×2．7μm）。质谱采用电喷雾离子源（ESI）,采用多反应监测（MRM）,检测离子为正离子,分别选择m／z 366．2／259、436．2／291和423．4／207作为美托拉宗、缬沙坦和内标（氯沙坦钾）的检测离子对。结果美托拉宗、缬沙坦的线性范围分别为0．5～100及5～5000 ng／ml,相关系数r2分别为0．9937和0．9939,批内精密度分别为2．09％～8．85％和2．36％～13．12％,基质效应分别为87．73％～98．62％和99．03％～137．35％,回收率分别为75．74％～81．82％和83．89％～95．64％。结论该法操作简单、准确可靠、检测灵敏度高,可用于复方美托拉宗缬沙坦速释片比格犬体内的药代动力学研究。     

盐酸曲美他嗪在人体内药物动力学研究分析

目的建立液相色谱—串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆中盐酸曲美他嗪浓度的方法,并研究其药动学行为。方法选取我院2007年2月至2009年2月18名健康成年人作为药物试验对象,均单剂量口服盐酸曲美他嗪40mg后,采用液相色谱—串联质谱法（LC-MS/MS）测定血药浓度,应用AIC法判断房室模型,并利用DAS软件计算药动学参数。结果主要药动学参数：Cmax为（126.11±20.18）μg/L,tmax为（1.78±0.65）h,t1/2Ke为（5.87±0.79）h,Ke为（0.13±0.03）h,V/F为（4.00±0.59）L/kg,CL/F为（0.49±0.09）L.h-1.kg-1,AUC0-24为（1208.79±198.36）μg.h-1.L-1,AUC0-∞为（1304.46±224.13）μg.h-1.L-1。结论该分析方法简单、快速、准确、精密度高,适用于人体中盐酸曲美他嗪浓度的测定。盐酸曲美他嗪的血浆药动学参数与国内外文献报道基本一致。