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相似文献
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1.
水动力转染方法是指从小鼠尾静脉快速注射大体积含目的基因的生理盐水,从而实现外源基因在小鼠体内(尤其是肝脏内)的高效表达.它作为一种快速、简单、高效、安全的外源基因转染方法,已经广泛用于体内基因功能、基因调节、蛋白表达和基因治疗等方面的研究.由于该方法转染的目的基因主要在小鼠体内肝脏获得高水平表达,特别适用于肝炎病毒功能基因小鼠体内表达模型的建立.利用该技术建立的肝炎病毒实验动物模型有助于促进肝炎病毒致病机制的研究以及抗病毒药物的体内筛选与评价.  相似文献   

2.
目的 对比观察Fgfr2+/S252W突变型小鼠和同窝野生型小鼠长骨的生长发育情况,探讨FGFR2功能持续增强对软骨内成骨过程的影响.方法 采用经基因敲入技术建立的模拟人Apert综合征的Fgfr2+/S252W小鼠模型,经繁殖、鉴定后分为Fgfr2+/S252W功能获得突变型和同窝野生型.于出生后7、10、14、28d分别处死突变型和野生型小鼠各3只,对长骨进行长度测量、X线检查及Micro CT检查,另取部分长骨标本进行HE染色和免疫组化染色观察.结果 Fgfr2+/S252W突变小鼠呈典型Apert综合征圆颅和短颅畸形,体形发育缓慢,体长、四肢长度明显小于同窝野生小鼠,且长骨发育障碍,第二骨化中心延迟出现,骨密度及骨小梁数量低于同窝野生型小鼠.组织学观察可见突变小鼠胫骨近端生长板软骨细胞增殖区和肥大区厚度缩短,细胞排列不及野生型整齐,肥大软骨细胞体积小,免疫组化检测显示软骨相关增殖、分化基因表达均减弱.结论 FGFR2功能持续增强可导致小鼠长骨发育障碍.FGFR2可能具有调控成骨细胞系及软骨细胞系发育的功能,在骨骼发育等方面发挥重要作用.  相似文献   

3.
目的 研究小鼠节律基因Period2(Per2)对小鼠乳腺癌细胞(EMT6)的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法 将pcDNA3.1(+)-Per2转导入EMT6细胞内,同时设立转染空质粒pcDNA3.1(+)入细胞的对照组。以RT-PCR、Western blot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达;采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用;通过流式细胞技术、DNA梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测nr2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响。结果 小鼠节律基因nr2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡率增加。结论 本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用。  相似文献   

4.
目的构建小鼠Cchl1a3基因R528H突变型基因敲入打靶载体,模仿低血钾周期性麻痹患者中的对应发现。方法采用置换型载体,分为长短、短臂设计(1.5~2.0kb),以便用聚合酶链反应(PCR)方法筛选中靶载体和ES细胞(embrgonic stem cell)。首先以Cchl1a3基因为模板设计引物,并引入与质粒内插入位点酶切序列相配的内切酶序列,扩增用于套取的同源臂a和b,以及用于插入筛选基因和实行定点突变的同源臂c和d,c和d首尾相接,用点突变特异性PCR在c内实现R528H突变。将a和b定向插入pBR322,借助于温度敏感的pSC101-BAD-gba-(tet)质粒的表达Red/ET重组酶,使其与携带Cchl1a3基因的细菌人工染色体(BAC)实现同源重组,套取含目的突变点、长约8kb的Cchl1a3的基因片断,形成pBR322-Cchl1a3。将c和d定向插入PL451质粒Frt-Neo-Frt片段两侧,酶切c-Frt-Neo-Frt-d片断纯化后,再与pBR322-Cchl1a3质粒一同转入含Red/ET重组酶基因的大肠杆菌EL250菌株,在重组酶的催化下再次实现同源重组,在Cchl1a3基因的给定位点实现R528H突变并插入包含筛选基因和重组酶识别位点的Frt-Neo-Frt片断,完成载体的构建。载体构建过程中,酶切位点变化导致的片断程度改变作为初筛,PCR产物测序结果作为最后的鉴定依据。结果打靶载体符合设计要求。结论运用点突变特异性PCR,结合Red/ET重组技术构建基因定点突变的基因敲入型打靶载体,在重组酶催化下仅需要2次同源重组即可完成。该策略成熟简便,省时省力,构建的载体易于鉴定。  相似文献   

5.
目的:构建同源异形盒Gax基因的复制缺陷型腺病毒载体,并对其是否重组成功进行鉴定。方法:采用两步CaC l2转化法的DNA细菌内同源重组技术,PCR扩增小鼠Gax基因,将Gax基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,转染含有5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1(33.5 kb)的B J5183细菌,经细菌内同源重组产生携带Gax基因的重组腺病毒载体pAd-Gax,经限制性内切酶BstⅨ和PacⅠ鉴定正确后,用脂质体法转染293细胞,包装产生携带Gax基因的重组腺病毒Ad-Gax。利用GFP的表达鉴定Ad-Gax。结果:构建了表达Gax基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度达4×1010pfu/L。结论:成功地构建了表达Gax基因的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究Gax基因在心血管病中的作用提供了实验基础。  相似文献   

6.
目的 通过干扰小鼠睾丸节律基因Clock的表达,研究Clock对雄性小鼠生殖能力的影响.方法 通过RNA干扰技术干扰雄性小鼠睾丸节律基因Clock的表达,以Western blot检测干扰效果,研究干扰Clock表达后对小鼠体内胎仔数和精子数量、精子活力、体外受精率的影响.结果 Clock干扰质粒使小鼠睾丸Clock蛋白的表达明显下调.在体内实验不但影响了雄性小鼠的胎仔数,而且其相对应的精子体外受精能力也明显下降.结论 节律基因Clock与雄性小鼠的生殖功能有密切的关系.  相似文献   

7.
目的测定α-MHC24-脱氢胆固醇还原酶基因(DHCR24)转基因小鼠的行为学特征,研究该基因对小鼠活跃性和探究行为的影响。方法构建α-MHC DHCR24转基因表达载体,显微注射法获得C57BL/6背景DHCR24转基因小鼠,PCR鉴定小鼠基因型,选择DHCR24转基因和同窝阴性鼠进行旷场、modified SHIRPA和Rota-Rod转轮实验。结果DHCR24转基因雌鼠对新环境的恐惧感较小,但自主活动性低于对照鼠,而DHCR24转基因雄鼠的自主活动性和在胁迫环境下的应激性高于对照组,DHCR24转基因鼠的行为变化具有显著的性别差异。另外,本研究中雌鼠的活跃性、运动协调性和平衡能力均显著高于雄鼠,对胁迫环境的应激性也大于雄鼠。结论心脏特异表达DHCR24基因转基因小鼠自主活动和应激性的变化具有性别差异。  相似文献   

8.
异基因骨髓移植小鼠GVHD模型的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:建立异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病(GVHD)模型.方法:将供体C57BL/6雄性小鼠骨髓细胞和脾细胞按不同细胞数混合,输入接受照射后的受鼠雌性BALB/c小鼠,观察受鼠的一般情况、生存期、组织病理学和嵌合体检查.结果:给予5×106个以上的供者脾细胞的各组小鼠都发生了急性GVHD,但小鼠GVHD出现的时间不同.结论:成功地建立了异基因骨髓移植小鼠GVHD模型,输入5×106-5×107个供鼠脾细胞均适用于小鼠GVHD防治的研究,可以根据实验需要选择供鼠脾细胞的数量.  相似文献   

9.
基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的新技术,是一种利用DNA同源重组原理和胚胎干细胞(embryonic stem ceils,ESCs)技术按定向组合的方式改变生物活体遗传信息的实验手段,具有定位性强、打靶后新的基因随染色体DNA稳定遗传的特点,其方法包括基因敲除、基因敲人、点突变、缺失突变、染色体组大片段删除等,相关的基因工程技术包括转基因、基因沉默和基因捕获等。基因打靶技术为生命科学、基因组学和疾病治疗等领域的研究提供了强大的工具。  相似文献   

10.
目的探索成视网膜细胞瘤基因结合蛋白6(Rb binding protein 6,RBBP6)基因敲除小鼠胚胎致死的原因。方法敲低细胞内源性RBBP6后检测磷酸化组蛋白H2AX(phosphorylated histone H2AX,γH2AX)的蛋白水平,利用免疫组化检测RBBP6-/-小鼠胚胎中γH2AX的蛋白水平,由此分析两者的相关性。结果 RBBP6敲低的细胞中γH2AX蛋白水平显著上调,RBBP6-/-小鼠胚胎中γH2AX的蛋白水平也明显上调。结论 RBBP6-/-小鼠胚胎中γH2AX蛋白水平显著升高,从而引发基因组的不稳定性,是RBBP6-/-小鼠胚胎致死的原因之一,并提示RBBP6可能参与DNA损伤应答。  相似文献   

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