苦参素抑制人膀胱癌T24细胞生长作用研究

目的探讨苦参素对人膀胱癌T24细胞的抑制作用及其可能机制。方法MTT法检测T24细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化,SP法检测Bcl 2和Bax蛋白表达的变化。结果2 mg•mL 1苦参素作用24和72 h后细胞生长抑制率为14.10%和49.67%; 8 mg•mL 1苦参素作用24和72 h后细胞生长抑制率为35.40%和80.50%。随着苦参素浓度的增加,G0/G1 期T24细胞所占比例逐渐上升,G2/M期细胞所占比例逐渐下降;且细胞内Bcl 2表达下调,Bax表达上调。结论苦参素通过诱导癌细胞周期阻滞于G0/G1期来抑制人膀胱癌T24细胞的生长增殖。其机制可能与下调Bcl 2和上调Bax蛋白表达,诱导癌细胞凋亡有关。     

山竹酮抑制人下咽癌FaDu细胞株的增殖作用及其机制研究

目的探讨山竹酮对人下咽癌细胞株FaDu的细胞周期、细胞增殖的影响。方法采用0～50μM浓度的山竹酮分别作用于人下咽癌FaDu细胞48h和72h,MTT比色法观察山竹酮对细胞生长的抑制效应;采用0～20μM浓度的山竹酮分别作用于FaDu细胞48h后,应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）、蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（Western blotting,WB）分析山竹酮对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果山竹酮能够明显抑制人下咽癌细胞株的增殖,并且增殖抑制作用存在剂量和时间依赖关系,山竹酮处理细胞48h后的半抑制浓度（IC50）是11．92μM,72h的IC50是4．42μM,差异有统计学意义（P〈0．05）;FCM结果显示浓度为15、20μM的山竹酮处理组细胞48h,细胞周期阻滞在G0／G1期的比率分别为（54．096±0．0061）％、（63．736±0．0241）％,与对照组（41．779±0．0752）％比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;Western Blotting结果显示,山竹酮诱导凋亡促进基因Bax的表达和抑制突变型P53基因表达。结论在一定的条件下,山竹酮通过使肿瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,同时诱导细胞凋亡促进基因的表达和抑制突变型P53的表达等机制,来抑制人下叫癌细胞FaDu的增殖。     

华蟾素诱导人膀胱癌细胞株T24凋亡研究

目的研究华蟾素注射液（cinobufacin，Cino）对膀胱癌细胞株T24的体外增殖抑制及诱导凋亡作用，探讨其对膀胱癌的l临床应用价值。方法不同浓度Cino单独作用和配伍丝裂霉素C（MMC）作用于膀膀癌T24细胞株后，通过流式细胞术（FCM）以及DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况，应用光学显微镜观察细胞形态学的变化。结果除Cino（25mg／m1）组外，其它处理组均可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化。DNA琼脂糖电泳可见到凋亡的特征性“梯子”条带。流式细胞仪结果示，除高浓度的Cino（25mg／m1）组外．其余各组均见到在G0／G1期前出现亚二倍体峰（APO峰），且阻滞细胞生长在G0／G1期。各药物浓度组与对照组的S期比率（SPF）和增殖指数（PI）分别进行比较（P〈O．05）有统计学差异。结论Cino对膀胱肿瘤1、24细胞有诱导凋亡和直接杀死的双重作用。具体表现为高浓度（25mg／m1）作用于细胞时，对细胞表现为直接杀死作用。而在较低浓度范围内（O．001～2．5mg/ml），表现为对细胞诱导凋亡的作用，且具有一定的时效和量效关系：配伍丝裂霉素应用时．对T24细胞的诱导凋亡作用明显增强．两药有协同作用。具有治疗膀胱癌的临床价值     

聚维酮对人膀胱癌T24细胞的抑制作用研究

目的 探讨聚维酮(PVP)对人膀胱癌T24细胞的抑制作用。 方法 采用MTT法检测PVP对T24细胞生长的抑制作用，流式细胞仪检测PVP对T24细胞周期的影响和黏附作用。结果 2.5%PVP作用24和72 h，对人膀胱癌T24细胞生长抑制率分别为（15.11±2.36）%和（49.57±7.07）%；浓度为7.5%时24和72 h抑制率分别（35.42±5.55）%和（79.66±19.92）%。5.0%PVP作用24和72 h时，细胞G0/G1期所占比例分别为（74.17±0.91）%和（46.69±3.76）%；G2/M期细胞所占比例分别为（14.63±0.47）%和（41.88±1.50）%。PVP能提高抗鼠IgG1对T24细胞的黏附作用。结论 PVP能通过诱导人膀胱癌T24细胞周期阻滞于G2/M期和作为化疗药的黏附性载体而抑制癌细胞的生长增殖。     

苦参素对人膀胱癌EJ细胞抑制作用研究

目的 探讨苦参素对人膀胱癌EJ细胞的抑制作用及可能机制。方法 MTT法检测EJ细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测EJ细胞周期改变,免疫组化检测EJ细胞Ki-67表达。 结果 2.5 mg•mL-1苦参素作用24和72 h 对EJ细胞的生长抑制率分别为（15.12±2.10）%和（52.61±7.02）%;浓度为10 mg•mL-1时24和72 h抑制率分别为（42.42±7.30）%和（88.52±10.93）%。随着苦参素浓度的增加, G0/G1期和S期EJ细胞所占比例逐渐上升,G2/M期细胞所占比例逐渐下降,且Ki-67的表达下降。结论 苦参素能通过诱导人膀胱癌EJ细胞周期阻滞于G0/G1和S期,下调Ki-67的表达来抑制癌细胞的生长增殖。     

甲异靛对K562原代细胞凋亡作用研究

目的探讨甲异靛诱导慢性髓系细胞白血病K562细胞株凋亡的作用。方法K562细胞经20μm／L甲异靛处理12h、24h、48h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果K562未经甲异靛作用时凋亡率[（1．0±0．36）％]与人体正常细胞系NIH3T3凋亡率[（2．6±0．39）％]相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;K562细胞空白组凋亡率为（1．0±0．36）％,12h组为（12．5±0．69）％,24h组为（19．4±1．07）％,48h组为（42．5±3．22）％,与NIH3T3细胞组同时间比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;k562组12h、24h、48h与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。甲异靛能使K562细胞阻滞于G2／M期,G2／M期细胞比例增加,G0／G1期和S期细胞减少。结论甲异靛对体外K562细胞有诱导凋亡作用,其作用与时间成正相关关系。甲异靛可使K562细胞阻滞于G2／M期。     

人参皂苷Rg3抑制人膀胱癌细胞增殖作用的研究

目的：探讨人参皂苷R静对人膀胱癌细胞增殖作用的影响及作用机制。方法：采用人膀胱癌T24细胞株进行细胞培养,将人参皂苷Rg3分别以0,5,10,20和40p,mol·L^-1的剂量处理细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测人参皂苷R邸对人膀胱癌他4细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对T24细胞凋亡的诱导作用,应用RT-PCR和Westernblot方法检测不同浓度人参皂苷Rg3处理后124细胞中EphB4mRNA及其蛋白的表达情况。结果：人参皂苷Rg3对膀胱癌T24细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间增加而增大,呈浓度依赖关系（P〈0．05）。不同浓度人参皂苷Rg3作用下的膀胱癌T24细胞中,EphB4mRNA及其蛋白的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降（P〈0．05）。结论：人参皂苷Rg3的抗癌活性与其抑制EphB4表达有关。     

大蒜油联合顺铂诱导人腺样囊性癌细胞株ACC-M凋亡

目的探讨大蒜油联合顺铂对人腺样囊性癌细胞株ACC—M细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法采用不同浓度大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂分别处理人腺样囊性癌细胞株ACC—M细胞24、48、72h后,MTT法检测肿瘤细胞体外增殖抑制情况;选取2、8、32μg/mL的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂处理肿瘤细胞4、8h后,流式细胞术分析肿瘤细胞周期分布和凋亡率。结果8、16、32μg／mL大蒜油及2、4、8、16、32μg／mL顺铂、大蒜油联合顺铂作用24、韶、72h对ACC-M细胞均有明显抑制作用,随浓度及时间增加,抑制率呈上升趋势。联合组用药肿瘤细胞抑制率明显高于单一用药组。流式细胞术结果显示,不同浓度的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂作用能使ACC．M细胞发生G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡,随浓度增高及作用时间延长,周期分布越明显,凋亡率增高,联合组用药细胞周期阻滞和促凋亡作用明显强于单一用药组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论不同浓度的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂均能有效抑制ACC-M细胞生长．阻滞细胞于G2／M期并诱导肿瘤细胞凋亡,大蒜油联合顺铂对ACC—M细胞生长抑制作用明显强于大蒜油、顺铂单独应用。     

眼镜蛇毒神经生长因子诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡作用的研究

目的：研究广西眼镜蛇毒神经生长因子（Nerve growth factor，NGF）对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡。方法：应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法（ATP—TCA法）测定不同质量浓度（0．0125，0．025，0．05，0．1，0．2g·L^-1）NGF处理24，48，72，96h对人鼻咽癌CNP2生长的抑制率；Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞的形态；琼脂糖凝胶电泳测定DNA断裂状况；流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率。结果：不同浓度的NGF能抑制CNE-2细胞增殖，并呈浓度时间效应关系，作用24，48，72，96h的半数抑制浓度（IC50）分别为0．213，0．095，0．048，0．033g·L^-1；经NGF（0．1g·L^-1）处理细胞48h后，荧光染色呈现典型的细胞凋亡形态学特征；DNA凝胶电泳可见凋亡细胞特有的DNA片段；0．（15，0．1，0．2g·L^-1 NGF作用48h后，CNB2细胞被阻滞于G0／G1期，细胞凋亡率分别为（28．2±2．0）％、（39．9±1．9）％、（50．3±1．3）％。结论：NGF通过诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡而产生抗鼻咽癌活性。     

消癌平辅助丝裂霉素对肺癌细胞化疗增效的研究

目的：通过消癌平联合丝裂霉素对肺癌 A549细胞增殖,细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响,探讨化疗增效机制。方法MTT 检测消癌平（2、8、21μl／ml）联合丝裂霉素（2μg／nl）对肺癌 A549细胞生长抑制（联合用药 A、B、C 组）,并设立对照组、丝裂霉素组和消癌平组;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;RT－PCR 检测 P53、CyclinD1基因表达。结果MTT 检测显示在24、48、72 h 联合用药 A、B、C 组 OD（光密度）均比丝裂霉素低（ P ＜0．05）;流式细胞术检测表明消癌平、丝裂霉素与对照组相比,肺癌细胞均阻滞于 G0／G1期,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。联合用药组 G0／G1期细胞比率、细胞凋亡率与丝裂霉素组比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。消癌平组、丝裂霉素组与对照组比较,均能提高 P53 mRNA 表达（ P ＜0．05）,联合治疗组 P53 mRNA 表达高于丝裂霉素组（ P ＜0．05）。消癌平组、丝裂霉素组与对照组比较均能降低 Cyclin D1基因的表达（ P ＜0．05）。与丝裂霉素组比较,联合用药可显著减低CyclinD1基因的表达（ P ＜0．05）。结论消癌平辅助丝裂霉素对肺癌细胞化疗增效可能与上调 P53 mRNA 表达,增强细胞凋亡作用,以及下调 CyclinD1 mRNA 表达,阻滞细胞周期于 G0／G1期有关。     

MAPK信号通路对蟾蜍灵抑制Jurkat细胞增殖及诱导其凋亡的影响

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对蟾蜍灵(Bufalin)抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及诱导细胞凋亡的影响,初步探讨MAPK在蟾蜍灵治疗急性淋巴细胞白血病中的作用。方法WST-1法检测细胞的增殖活力,流式细胞术分析细胞凋亡。结果蟾蜍灵作用Jurkat细胞48 h,抑制细胞增殖50%的药物浓度(IC50)为44 nmol/L;5 nmol/L及以上蟾蜍灵以剂量依赖方式抑制Jurkat细胞增殖;20 nmol/L蟾蜍灵分别联合PD98059、SP600125,可显著增加对Jurkat细胞增殖的抑制,促进细胞凋亡;20 nmol/L蟾蜍灵联合SB203580作用于Jurkat细胞,可显著减少对Jurkat细胞增殖的抑制但对其凋亡无显著影响。结论 MAPK信号通路与蟾蜍灵抑制急性淋巴白血病Jurkat细胞增殖及诱导凋亡有相关性,表现为ERK和JNK促进增殖、抑制细胞凋亡;p38MAPK抑制增殖,但对凋亡无明显影响。     

LY294002对多药耐药急性白血病细胞株HL60/VCR的凋亡及细胞周期的影响研究

目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002对多药耐药急性白血病细胞株HL60/VCR凋亡与细胞周期的影响及可能机制。方法:取耐长春新碱(VCR)的HL60/VCR多药耐药急性白血病细胞株分为未加药的对照组及加入不同浓度的LY294002(其终浓度为1.0、2.5、5.0、10μmol.L-1)组,MTT法检测2种细胞的半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测抗凋亡蛋白Bcl-2、细胞周期调控分子CyclinD1mRNA表达。结果:与对照组比较,LY294002可明显降低HL60/VCR对VCR的IC50(P<0.05),且与剂量相关;LY294002可显著增加HL60/VCR细胞凋亡率,阻滞细胞于G0/G1期,降低HL60/VCR细胞的Bcl-2、CyclinD1mRNA的表达(P均<0.05)。结论:LY294002可能是通过影响Bcl-2及CyclinD1基因的表达,从而促进HL60/VCR细胞凋亡及抑制细胞增殖。     

冬凌草甲素通过PI3K/Akt通路诱导MDA-MB-231细胞的凋亡

目的：研究冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响,初步探讨其作用机理。方法：体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用6、12、24μmol/L冬凌草甲素对其进行处理,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3、PARP及Akt、p-Akt、p-GSK3β表达的变化。结果：冬凌草甲素作用MDA-MB-231细胞24h后,可观察到细胞凋亡的形态学改变,以24μmol/L组最为明显。实验组与对照组相比,细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高（P〈0.01）,具有时间和剂量依赖性,凋亡相关蛋白procaspase-3下调,caspase-3底物PARP被逐步剪切,并伴随p-Akt、p-GSK3β蛋白水平下调（P〈0.05）。结论：冬凌草甲素可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的抑制有关。     

Bufalin induces apoptosis in vitro and has Antitumor activity against human lung cancer xenografts in vivo

Bufalin has been shown to be effective against a variety of cancer cells, but its role in lung cancer has never been studied in an animal model. In this study, we evaluated bufalin effects in a human lung cancer cell line NCI‐H460 both in vitro and in vivo . Bufalin caused significant cytotoxicity in NCI‐H460 cells at a concentration as low as 1 μM. DNA condensation was observed in bufalin‐treated cells in a dose‐dependent manner. Mitochondrial membrane potential (ΔΨ_m) was reduced and reactive oxygen species (ROS) were increased in bufalin‐treated NCI‐H460 cells. Levels of several proapoptotic proteins such as Fas, Fas‐ligand, cytochrome c , apoptosis protease activating factor‐1, endonuclease G, caspase‐3 and caspase‐9 were increased after bufalin treatment. At the same time, anti‐apoptotic B‐cell lymphoma 2 protein levels were reduced. Bufalin decreased glucose regulated protein‐78 gene expression but increased growth arrest‐ and DNA damage‐inducible 153 gene expression. Bufalin injected intraperitoneally in a dose‐dependent manner reduced tumor size in BALB/C nu/nu mice implanted with NCI‐H460 cells. Bufalin injection did not produce significant drug‐related toxicity in experimental animals except at a high dose (0.4 mg kg^?1). In conclusion, low concentrations of bufalin can induce apoptosis in the human lung cancer cell line NCI‐H460 in vitro . Bufalin also reduced tumor size in mice injected with NCI‐H460 cells without significant drug‐related toxicity. These results indicate that bufalin may have potential to be developed as an agent for treating human non‐small cell lung cancer. © 2016 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 32: 1305–1317, 2017.     

Bufalin induces apoptosis in human osteosarcoma U-2OS and U-2OS methotrexate300-resistant cell lines

AIM: To investigate the antiproliferative activity and apoptosis-inducing effects of bufalin on human osteosarcoma cell lines. METHODS: U-2OS and U-2OS methotrexate (MTX) 300-resistant cell lines were treated with bufalin. Cell viability was assessed using the MTT assay. Cell-cycle status, apoptosis-inducing effects, and the expression of apoptosis-related proteins were evaluated by flow cytometry, fluorescent staining, DNA fragmentation assays, and Western blotting. The effect of bufalin on dihydrofolate reductase (DHFR) expression was studied by RTPCR and Western blotting. RESULTS: Bufalin inhibited cell growth in both U-2OS and U-2OS MTX300 cells. The induction of G2/M cell-cycle arrest was also seen in the cells treated with bufalin. The induction of apoptosis by bufalin was confirmed by increased expression of the tumor suppressor protein p53 and the increased ratio of the Bax/Bcl-2 proteins. Bufalin induced apoptosis to the same extent in both cell lines without regard to DHFR levels in the cells. CONCLUSION: Bufalin inhibited the growth of and induced apoptosis in both MTX-sensitive and MTX-resistant human osteosarcoma U-2OS cells. The apoptosis-inducing effect of bufalin was not influenced by the presence of high levels of the DHFR protein.     

冬凌草甲素抑制人胃腺癌细胞生长和诱导凋亡作用研究

目的:研究冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT、透射电镜、流式细胞仪等方法对经冬凌草甲素体外作用的BGC-823细胞进行观察和检测。结果:16、32、64μg·mL-1冬凌草甲素能显著抑制BGC-823细胞的生长,并呈浓度-时间依赖性。64μg·mL-1的冬凌草甲素作用24、48、72h的抑制率分别为68·5%、90·8%、94·7%。32μg·mL-1冬凌草甲素作用2h后,电镜下BGC-823细胞的线粒体和内质网增殖肿胀;作用8h后,线粒体和内质网空泡化,内部结构消失,细胞核染色质边集呈凋亡的典型改变;作用24h后,流式细胞仪检测BGC-823细胞G2/M期阻滞,凋亡率为37·8%。结论:冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,生长抑制可能与G2/M细胞周期阻滞有关,诱导凋亡可能通过线粒体和(或)内质网途径起作用。     

蜂毒多肽对膀胱移行细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 观察蜂毒多肽对T24膀胱癌细胞增殖、凋亡、细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响.方法 将1、10、100 mg/ml的蜂毒多肽分别作用于膀胱癌T24细胞12、24和48 h,MTT法检测细胞活力变化及生长抑制率,流式细胞术及Transwell小室法检测蜂毒多肽作用48 h时T24细胞周期、细胞凋亡率及细胞侵袭力.将T24膀胱癌细胞接种于裸鼠,成瘤后分为对照组、蜂毒多肽低剂量组[1 mg/（kg·d）]、中剂量组[5 mg/（kg＆#183;d）]和高剂量组[25 mg/kg＆#183;d）],检测5、10和15 d裸鼠移植瘤体积、肿瘤生长抑制率及15 d时肝肾功能、血常规变化.结果 随蜂毒多肽浓度增加及作用时间延长,T24细胞生长及凋亡发生受到显著影响（P〈0.05,P〈0.01）,100 mg/ml 蜂毒多肽作用48 h时,细胞生长抑制率升高,生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率升高,细胞侵袭力显著下降（P〈0.01）.蜂毒多肽组裸鼠移植瘤体积显著小于对照组,15 d时蜂毒多肽高剂量组肿瘤体积显著降低（P〈0.01）.各组肝肾功能和血常规无明显变化（P＆gt;0.05）.结论 蜂毒多肽可引起体外T24膀胱癌细胞增殖抑制、凋亡率增加及细胞侵袭力下降,可显著抑制裸鼠膀胱癌细胞移植瘤生长.     

三氧化二砷对人肾母细胞瘤细胞作用及机制的研究

目的研究三氧化二砷（arsenictrioxide,As203）对体外人肾母细胞瘤（Nephroblastoma／Wilms’tumor,WT）SK—NEP-1细胞作用及CyclinDl表达的影响。方法采用不同浓度的三氧化二砷作用体外培养人肾母细胞瘤WT细胞,应用MTT比色法检测细胞增殖的影响;RT-PCR法检测CyclinDlmRNA的表达。结果MTT检测对照组及不同药物浓度组增殖抑制率分别为（10．22±0．70）％、（20．76±3．46）％、（31．09±2．95）％、（40．04±2．30）％、（53．04±3．02）％、（64．61±0．95）％;RT-PCR法检测CyclinDlmRNA的表达,对照组及不同药物浓度组的灰度值分别为：1．25±0．07、1．03±0．08、0．90±0．09、0．73±0．08、0．48±0．09、0．26±0．07。以上检测各组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论三氧化二砷可明显抑制WT细胞增殖,其机制可能与CyclinD1表达水平降低有关。